Akt2、Livin蛋白表達情況與胃癌發病相關性及與臨床病理學特征的關系

王結實，蔡麗偉

(平頂山市第一人民醫院胃腸外科，河南 平頂山 467000)

胃癌是臨床上常見的的惡性腫瘤之一，其發病率非常高，居惡性腫瘤的第四位，嚴重影響人們的生活質量和生命安全。我國為胃癌的高發地區，且近年來其發病率隨著人們飲食結構的改變而呈逐年增加的態勢，給我國帶來巨大的經濟和社會負擔[1，2]。目前針對胃癌的治療方式多為手術治療和放化療等，但其發病機制尚不完全清楚，常規治療方式的治療效果并不理想，因此對胃癌發病機制以及臨床治療的研究成為學界關注的焦點[3，4]。近年來的研究發現，腫瘤的發生和發展與細胞的異常增殖和生長有著密切的關系，而多種細胞因子在這一過程中均發揮著重要的作用[5，6]。為了進一步探討絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶2（Akt2）、Livin蛋白在胃癌患者中的表達情況及其與臨床病理學特征的關系，本研究對我院討確診的胃癌患者組織標本和癌旁組織標本中的Akt2、Livin蛋白表達情況進行了檢測，并分析了其與臨床病理學特征的關系，旨在為臨床上提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院手術后胃癌組織標本125例（病灶組）、癌旁組織60例（癌旁組，距離腫瘤陰性切除邊緣3cm以內的組織，在125例胃癌患者中隨機選取），收集時間2015年1月-2017年5月。臨床資料通過回顧患者的病歷記錄和病例報告獲得。

病灶組，男64例、女61例，年齡39～78歲，平均年齡59.5±16.2歲；腫瘤的分化程度：高分化52例，中分低化73例；有淋巴結轉移67例，無淋巴結轉移58例；TNM分期：I期34例、B期29例、C期30例，D期32例；浸潤深度：未侵犯漿膜51例，侵犯漿膜74例；癌旁組，男32例、女28例，年齡40～74歲，平均57.7±12.4歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入排除標準

1.2.1 納入標準 ⑴術前未合并其他部位惡性腫瘤；⑵術后病理證實為胃癌；⑶手術根治性切除腫瘤，術后生存期大于1個月，未發生圍手術期并發癥；⑷有完整規范的術后病理報告及隨訪資料；⑸術前未接受放化療。

1.2.2 排除標準 ⑴合并其他系統嚴重疾病者；⑵未能完成隨訪者；⑶貧血及凝血功能障礙；⑷風濕及免疫系統疾病；⑸嚴重的肝腎功能疾病；⑹甲狀腺功能障礙；⑺因其他部位腫瘤進行過放化療治療者。

1.3 免疫組化染色方法 所有組織標本均經10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋后作連續切片，采用免疫組化染色法測定組織中Akt2、Livin蛋白的表達，SP染色試劑盒、兔抗人Akt2多克隆抗體、兔抗人Livin多克隆抗體均購于北京中杉生物技術公司，以陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 免疫組化判定標準 陰性對照用PBS代替一抗進行染色，結果做為陰性；陽性對照以各抗體說明書所提供組織進行染色，Akt2、Livin的陽性染色表現于細胞質，陽性細胞為棕黃色顆粒，標準光鏡下以細胞漿、膜中出現細胞核著色或粗細一致的棕黃色顆粒為陽性染色；采取二次計分法：先將染色按強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽性細胞百分比計分，0分為陽性細胞占比＜25%，1分為25%．50%，2分為51%．75%，3分為≥75%。用染色強度得分與細胞數得分之和作為判斷表達的結果，0分為陰性(一)，1～2 分為弱陽性(+)，3～4 分為中等陽性(++)，5～6分為強陽性(+++)。所有病理切片均由高年資病理醫師盲法評定結果。

1.5 統計學方法 統計軟件采用SPSS 16.0，采用均數±標準差（）進行統計描述，兩組間比較采用t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析法；計數資料組間比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組組織標本中的Akt2、Livin蛋白表達情況比較 病灶組、癌旁組的Akt2蛋白表達陽性率分別為 69.60%、6.67%（P＜0.001），表 1。 Livin 蛋白陽性率分別為 47.20%、5.00%（P＜0.01），見表 2。

表1 組織標本中的Akt2蛋白表達情況比較

表2 組織標本中的Akt2蛋白表達情況比較

2.2 胃癌組織標本中的Akt2、Livin蛋白表達與患者臨床病理學特征的關系 Akt2與淋巴結轉移、分化程度、不同浸潤深度、不同臨床分期有關 （P＜0.05）；與年齡、性別無關(P＞0.05)，Livin 蛋白與淋巴結轉移、分化程度有關(P＜0.05)；與性別、年齡、不同浸潤深度、不同臨床分期間無關(P＞0.05)。見表3。

表3 胃癌Akt2、Livin蛋白表達與臨床病理學特征的關系

3 討論

多項研究表明[7-11]，腫瘤的發生和發展過程與癌細胞的增殖、轉移和浸潤等多個基因的調控有著密切的關系，但目前仍沒有可靠、有效的判斷腫瘤惡性程度和預后的有效標志物。研究表明[12]，生長因子受體 (Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)具有酪氨酸激酶活性，可影響細胞的生長和分化，并通過兩條信號轉導通路進行調控，其中一條是PI3K/Akt通路，主要參與腫瘤細胞的增殖、腫瘤侵襲、轉移、血管生成、腫及細胞凋亡的抑制等過程。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(Akt)是PI3K/Akt信號通路中的關鍵激酶，主要有Akt1/PKBα、Akt2/PKBβ和Akt3/PKBγ三個亞單位，其中Akt2與惡性腫瘤的侵襲及轉移關系最為密切。

Livin基因是一種新發現的凋亡抑制蛋白家族成員，其在正常成人大多數組織中不表達或很少表達，但在結腸癌、黑色素瘤及鱗狀細胞癌等腫瘤中高表達。目前有研究表明[13]，Livin基因具有抑制腫瘤細胞凋亡的作用，但其機制尚未完全闡明。本研究對我院胃癌患者組織標本和癌旁組織標本的Akt2、Livin蛋白表達情況進行檢測發現，病灶組、癌旁組的Akt2蛋白表達陽性率分別為69.60%、6.67%，而Livin蛋白陽性率分別為47.20%、5.00%，提示胃癌患者組織標本的Akt2蛋白和Livin蛋白表達明顯異常，這可能反映Akt2蛋白和Livin蛋白的表達與胃癌的發生和發展有著一定的關系，而Akt2蛋白和Livin蛋白的表達情況也許能作為胃癌診斷和預后判斷的重要檢測指標。

PI3K/Akt2通路能加快腫瘤細胞的生長、侵襲與轉移速度，同時還抑制瘤細胞的調亡。Arobleda等[14]的研究也表明，過表達Akt2的細胞系其穿透基質發生轉移的能力明顯提高，Akt/PKB具有促進腫瘤侵襲及轉移的重要能力，這與本研究的結果基本一致。本研究發現，Akt2與淋巴結轉移、分化程度、不同浸潤深度、不同臨床分期有關（P＜0.05）；與年齡、性別無關，提示Akt2與胃癌的發生、發展和轉移有著密切的關系，Akt2表達越高，則胃癌的嚴重程度更高。研究表明，Livin基因主要通過抑制caspase途徑及激活TAKl/JNKl信號傳導途徑來抑制腫瘤細胞凋亡，但目前只在黑色素瘤、結腸癌、膀胱癌和肺癌組織等少數腫瘤細胞中表達，在多數正常成人組織中不表達。阿娜爾古麗·阿布都熱合曼等[15]研究表明，Livin與胃癌的形成密切相關，有助于判斷胃癌的侵襲性及惡性程度。本研究發現，Livin蛋白與淋巴結轉移、分化程度有關；與性別、年齡、不同浸潤深度、不同臨床分期間無關，提示Livin蛋白的表達與胃癌的發展和轉移有一定的關系。

綜上所述，Akt2、Livin蛋白在胃癌中高表達，并且與腫瘤的發生發展關系密切，但具體機制仍需作進一步的深入研究。