山東省生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的污染狀況及耐藥性分析

趙效南 苑曉萌 張印 胡明 王文博 劉玉慶

摘要：本研究于2015—2016年從山東省主要乳制品生產城市的生鮮乳罐裝車中采集412份生鮮牛乳樣品，對其進行金黃色葡萄球菌的分離鑒定，并采用微量肉湯稀釋法對金黃色葡萄球菌進行藥物敏感性試驗。結果表明，從412份生鮮牛乳中共分離到148株金黃色葡萄球菌，分離率為35.8%;金黃色葡萄球菌對青霉素的耐藥率最高，為77.7%，其次為紅霉素，耐藥率為58.1%，對萬古霉素和阿莫西林/克拉維酸的耐藥率較低，分別為0.7%和1.4%，所有菌株對利奈唑胺表現為敏感。本研究結果可為山東地區生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的監測與防控，以及養殖場中抗生素的規范使用提供參考。

關鍵詞：金黃色葡萄球菌;生鮮牛乳;污染狀況;耐藥性

中圖分類號：S432.4+2?文獻標識號：A?文章編號：1001-4942（2019）12-0096-04

Abstract?In the study， four hundred and twelve fresh milk samples were collected from the fresh milk canning trucks in the main dairy production cities of Shandong Province during 2015-2016. The S. aureus was isolated， identified and conducted antibiotic sensitivity tests by micro-broth dilution method. The results showed that 148 strains of S. aureus were isolated with the isolated rate as 35.8%. S. aureus had the highest resistance rate to penicillin as 77.7%， followed by erythromycin with the resistance rate as 58.1%， but had lower resistance rates to vancomycin and amoxicillin/clavulanic acid showing as 0.7% and 1.4%， respectively.All strains were sensitive to linezolid. The results could provide references for the monitoring and prevention of S. aureus in fresh milk， and regulate the use of antibiotics in farms of Shandong Province.

Keywords?Staphylococcus aureus; Fresh milk; Contamination Status; Antimicrobial resistance

金黃色葡萄球菌是一種條件性致病菌，常存在于環境以及人和動物的皮膚和粘膜中[1]，可導致多種感染，包括關節炎、尿路感染、乳腺炎和亞臨床乳腺炎等，還可引起人體淺表皮膚感染甚至引發嚴重致命的侵入性疾病[2]，通常由生鮮牛乳和乳制品加工廠中分離得到[3]。

奶牛乳房炎在奶牛養殖業中發生最為普遍，被認為是世界上最昂貴的奶牛疾病之一，通常由微生物引起，而金黃色葡萄球菌是該病最主要的致病菌[4]。患有乳房炎的奶牛通常會將大量細菌帶入牛奶供應鏈中，被污染的牛奶可能含有能夠引起食物中毒的致病菌株，從而對公共安全造成危害[5]。目前，抗生素是治療金黃色葡萄球菌的主要藥物，但隨著大量使用，耐藥菌株不斷出現，甚至出現“超級細菌”[6]。近幾年，有關生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的耐藥性研究相對缺乏。因此，本研究從生鮮牛乳中進行金黃色葡萄球菌的分離鑒定并對該細菌的耐藥性進行分析，旨在為我國奶牛乳房炎治療選擇合適抗生素，同時為動物性食品安全和人類公共健康提供合理的檢測數據。

1?材料與方法

1.1?樣品采集

2015—2016年，分別從山東省主要乳制品生產城市的生鮮乳罐裝車中采集412份生鮮牛乳樣品，其中濟南市130份、濰坊市114份、日照市14份、泰安市62份、德州市32份、臨沂市60份。每輛運輸車取樣1次，取樣前需攪拌生鮮牛乳，將所取樣品置于冰盒中，立即帶回實驗室進行細菌學分析。

1.2?金黃色葡萄球菌的分離與鑒定

分別對412份生鮮牛乳樣品進行倍比稀釋，再涂布到Baird-Parker瓊脂培養基上，35℃需氧培養24～48 h。對于每個樣本，取4個具有典型金黃色葡萄球菌外觀特征（黑色外觀并被透明圈包圍）的菌落進行純化，再通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜進行確定，并用甘油保存于-20℃。

1.3?藥敏試驗

采用美國臨床和實驗室標準協會（Clinical and Laboratory Standards Institute， CLSI）推薦的微量肉湯稀釋法，對試驗分離鑒定的金黃色葡萄球菌進行18種抗菌藥物最小抑菌濃度的測定。抗菌藥物包括：青霉素、阿莫西林/克拉維酸、紅霉素、克林霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、頭孢噻呋、頭孢西丁、磺胺異惡唑、苯唑西林、萬古霉素、復方新諾明、多西環素、氟苯尼考、泰妙菌素、替米考星、慶大霉素、利奈唑胺。以大腸埃希菌ATCC25922作為藥敏試驗質控菌株，結果判定及質量控制按2018年CLSI標準進行[7]，將所有金黃色葡萄球菌分為S（敏感）、I（中度敏感）和R（耐藥）。本試驗抗生素判定標準見表1。

1.4?數據分析

采用Microsoft Excel 2016軟件對試驗數據進行統計分析。

2?結果與分析

2.1?金黃色葡萄球菌的分離鑒定結果

經鑒定，412份生鮮牛乳中共分離出148株金黃色葡萄球菌，分離率為35.9%（表2）。

2.2?藥敏試驗結果

本試驗采用微量肉湯稀釋法，對148株金黃色葡萄球菌進行了18種抗生素藥物敏感性檢測。結果（表3）顯示，金黃色葡萄球菌對青霉素的耐藥率最高，為77.7%;其次為紅霉素，耐藥率為58.1%;對克林霉素和磺胺異惡唑的耐藥率均為37.8%;對萬古霉素和阿莫西林/克拉維酸的耐藥率較低，分別為0.7%和1.4%，而所有菌株均對利奈唑胺表現為敏感。

3?討論與結論

金黃色葡萄球菌對牛群和生鮮牛乳的污染是乳制品生產環節中的一個重要問題[8]。Hennekinne等[9]認為乳品廠原料乳中金黃色葡萄球菌的存在，是乳制品食品鏈的潛在威脅，污染嚴重可導致食源性疾病的爆發。Asao等[10]報道的史上最大的食源性疾病爆發的起因就是食品中細菌的污染，涉及13 420名感染者。此外，乳品業的成本負擔巨大，牛群動物的乳房炎會導致產奶量顯著下降，相關的獸醫和治療成本也會大大增加，在某些情況下需要宰殺病牛[9]。因此，本研究對生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的分離鑒定和藥物敏感性檢測結果，可在一定程度上了解生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的污染情況和耐藥性，為生產中藥物使用提供幫助，具有一定的現實意義。

本研究生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的分離率為35.9%，高于杜琳等[11]報道的從內蒙古自治區等五省區牛乳中金黃色葡萄球菌12.1%的分離率，但低于田會麗等[12]報道的石河子地區的70.83%的分離率，與吳星星等[13]報道的烏魯木齊地區生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌33.7%的分離率結果相當。而國外生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的分離情況希臘西北部為40%[14]，意大利為53.5%[15]，美國為62.0%[16]，巴西為56.0%[17]。因此，金黃色葡萄球菌分離率的不同可能跟樣本量大小、樣品儲存方法、分離方法、地區和季節等因素有關。

本研究中，148株金黃色葡萄球菌對大部分抗生素呈現不同程度的耐藥性。它們對青霉素的耐藥率最高，為77.7%，低于闞秋琪等[18]研究的江蘇省某奶牛場金黃色葡萄球菌對青霉素的耐藥率（100%），但高于McMillan等[19]報道的維多利亞地區對青霉素15.4%的耐藥率，這可能與奶牛養殖過程中青霉素使用量或使用不合理有關;對紅霉素的耐藥率為58.1%，稍高于吳星星等[13]?研究的對紅霉素40.0%的耐藥率，但低于邱梅等[20]報道的對紅霉素100%的耐藥率;對利奈唑胺、萬古霉素和阿莫西林/克拉維酸耐藥率較低，與王秋冬等[21]的檢測結果一致，這與養殖場中較少使用這些抗生素有關。

綜合分析可知，山東地區生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌污染比較嚴重，并且該菌耐藥性存在差異，因而建議生產上應根據實際情況合理使用抗生素，同時加強對生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的監控。

參?考?文?獻：

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