四川、西藏產野生當歸揮發油成分的GC-MS分析

廣東省清遠市中醫院，廣東 清遠 511500

當歸為傘形科植物當歸[Angelicasinensis(Oliv.) Diels]的干燥根，具有補血活血、調經止痛、潤腸通便的功效[1]。揮發油是當歸的有效成分之一，研究表明當歸揮發油中含有藁本內酯、正丁烯內酯、當歸酮、月桂烯等多種成分，具有廣泛的藥理活性。近年來當歸揮發油在心血管系統、消化系統、呼吸系統、腦神經系統和抗腫瘤方面的相關研究取得了較好的成績[2]。

當歸主產于我國西北和西南海拔1800～3000 m的高寒地區，根據產地的不同又有秦歸(產甘肅、陜西)、云歸(產云南)和川歸(產四川)之分，其中甘肅岷縣為當歸的道地產區。張宏意等[3]2008年通過實地調查甘肅、四川、云南、湖北、青海和西藏林芝等當歸產區，發現野生資源稀少。孫紅梅等[4]通過對當歸藥材資源調查與分析發現，由于需求量的增加，生態環境的破壞，導致野生資源匱乏，目前現在市場上流通的當歸藥材商品均為栽培品種。本研究通過分析對比西藏林芝和四川平武的野生當歸揮發油中的成分和含量，對比其差異性，以期為當歸野生藥用植物資源的開發利用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥材 西藏林芝野生當歸采于海拔 3100 m左右的灌木林下，土壤類型為灰棕色土壤，PH值微堿性；四川平武野生當歸實地采于海拔 2700 m左右的灌木林下，土壤類型為棕色土壤，PH值微堿性。采集時間為2018年9月，經廣東藥科大學張宏意博士鑒定為傘形科植物當歸[Angelicasinensis(Oliv.) Diels]。分離根莖葉，除去須根和泥沙，待水分稍蒸發后，置于40℃烘箱中，烘48 h后粉碎過40目篩。

1.2 儀器 烘箱；粉碎機；電熱套; 揮發油測定器; 冷凝管; 膠管；HP5890GC/HP5972MS氣/質聯用儀；賽多利斯—sartor ious/BP210D電子天平；島津AY120托盤電子分析天平(稱量樣品)；具塞錐形瓶；HH—6恒溫水浴鍋；國家統一標準檢驗篩：40目，孔徑0.45 mm，浙江上于縣杜浦江山篩具廠。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理 分別稱取兩地野生當歸粉末50克(40目)，置于2000 mL圓底燒瓶中，加入800 mL蒸餾水，置揮發油測定器中，共水蒸餾提取8 h，靜置30 min，收集得到黃褐色透明油狀物，封裝備用。取兩地當歸揮發油樣品，用島津AY120托盤電子分析天平精密稱定10 mg，用三氯甲烷溶解使濃度為10 mg/mL，作為樣品供試液備用。

1.3.2 色譜條件儀器 HP5890GC/HP5972MS 氣/質聯用儀；色譜柱: Cp sil 5CB(Varian) 30 m×0.25 mm×0.25 μm (100%苯甲基硅氧烷)；柱溫: 50℃保持6 min，2℃/min升溫至100℃保持10 min，1℃/min升溫至160℃，2℃/min升溫至220℃保持15 min；運行146 min；載氣：He氣；柱Flow=1.0 mL/min ；進樣方式：不分流；進樣量：1 μL；進樣口溫度：280℃。

1.3.3 質譜條件 離子源為EI；電離電壓: 70 ev；電子倍培電壓:1 882 mV ；質譜Temp=171℃；Vacuum:65 mTorr ；溶劑延時:6 min；質譜掃描范圍:50～550 amu；質量范圍：50～550 m/z；樣品經峰純度檢測: Wiley 138譜庫檢索。

1.3.4 樣品定性、定量分析 分別取兩地野生當歸揮發油樣品供試液，精密吸取1 μL，按“1.3”項下色譜條件和質譜條件進樣測定，得到相應的質譜圖，與 Wiley 138譜庫標準物質質譜圖進行對比分析，確認兩地野生當歸揮發油各成分，用峰面積歸一化法計算出各組分相對百分含量。

2 結果與分析

2.1 揮發油含量 取兩地野生當歸各50 g粉末，照《中國藥典》(2015版)(通則2204乙法)項下揮發油測定法測定揮發油含量，結果西藏林芝野生當歸揮發油含量為1.22%(mL/g)，四川平武野生當歸揮發油含量為1.16%(mL/g)。

2.2 揮發油成分 通過對西藏林芝野生當歸揮發油中各成分 GC—MS 分析，檢出的各成分與 Wiley 138譜庫標準物質質譜圖進行對比分析，檢測到35 個色譜峰，鑒定出22種化合物，總含量占總檢出峰的 91.699 % (色譜圖如圖 1 所示，化學成分見表 1)。其中含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞(70.184%)，其次是正丁烯基苯酞(9.288%)，另外含量較多的還有十八碳二烯酸(3.171%)、十六烷酸(2.761%)、1.2-二烯基環丙烷(2.122%)，石竹烯(1.428%)等，其他成分含量則較低(低于1%)。

四川平武野生當歸揮發油中檢出的各成分與 Wiley 138譜庫標準物質質譜圖進行對比分析，檢測到35 個色譜峰，鑒定出17種化合物，總含量占總檢出峰的 97.675 % (色譜圖如圖 2 所示，化學成分見表 1)。其中含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞(92.551%)，其次是正丁烯基苯酞(3.037%)，其他成分含量則較低(低于1%)。

通過對西藏林芝和四川平武兩地產野生當歸揮發油成分的GC—MS分析對比(見表1)，發現兩地揮發油中共有8種相同的成分，分別是：β-羅勒烯、1，3-異苯并呋喃二酮、石竹烯、(+-)-裸丁二烯、β-法尼烯、β-紅沒藥烯、正丁烯基苯酞和2-氫正丁烯基苯酞；8種共同成分相對含量分別占總成分的81.709%(西藏林芝)和96.17%(四川平武)。

表1 西藏林芝和四川平武野生當歸揮發油化學成分檢索結果對比

另外，西藏野生當歸中還含有1-α-松油醇、9-甲基-十一碳烯、1-苯基辛酮、γ-欖香烯、β-蛇床烯、 1,3-苯二氧、4-甲氧-6-(2-丙烯基)、法尼烯、 1.2-二烯基環丙烷、十五烷酸、十六烷酸、十八碳二烯酸甲酯、13-二十二烯酸甲酯、十九烷酸甲酯、13-二十二烯酸甲酯等成分；四川平武野生當歸中還含有2,4,6-三甲基-1,3-苯二胺、2,4,5-三甲基苯甲醛、1-苯基戊酮、(+)-香樹烯、喇叭烯、β-雪松烯、斯巴醇、2.3-二氫四甲基苯駢吡咯等成分。

3 討論

本研究結果顯示，西藏林芝野生當歸揮發油的含量和成分比四川平武的多；而在所有成分中，含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞，且四川平武的2-氫正丁烯基苯酞(92.551%)比西藏林芝(70.184%)的多；另外，在本研究中，西藏林芝和四川平武野生當歸揮發油中都未檢測出藁本內酯，有文獻曾報道過用水蒸汽蒸餾法提取當歸揮發油會破壞藁本內酯的結構，使其分解產生其他物質[5-6]；也有研究表明當歸揮發油很不穩定，主要成分藁本內酯在室溫容易異構化[2]；還有研究發現當歸屬于短日照植物，較長的日照不利于以藁本內酯為主的揮發性成分含量增加[7]；因此，造成兩地野生當歸揮發油中的成分和含量差異及未檢測出藁本內酯這一結果的原因還有待進一步研究。