朱福全
(黑龍江省勃利縣杏樹畜牧獸醫站,黑龍江 勃利 154500)
以水樣或糊狀腹瀉為主的牛傳染病包括牛產腸毒素性大腸桿菌病、副結核病、??漳c彎曲菌腹瀉、牛輪狀病感染、牛冠狀病毒感染;寄生蟲病包括隱孢子蟲病、前后盤吸蟲病、莫尼茨絳蟲病和犢牛弓首蛔蟲?。黄胀ú≈饕ㄏ?、胃腸炎、淀粉樣變性和結腸炎等疾病。
采少量新鮮尸體的小腸前段腸黏膜或內容物,常接種于伊紅美藍瓊脂培養基上,挑選有金屬光澤、紫色帶黑心菌落進行生化反應鑒定。用已知多價和單價O抗血清及單價黏附素抗血清鑒定分離菌的血清型,之后再做腸毒素測定,以確定致病性。
小川氏培養基上需氧培養,生長緩慢,常需6~8周或更長時間才能生長小菌落。常用抗酸染色鏡檢方法,取糞便中的黏液、血絲,加3倍量的0.5%NaOH液,混勻,55℃水浴乳化30 min,以4層紗布濾過,取濾液以1 000 r·min-1離心5 min,去沉渣后,再以3 000~4 000 r· min-1離心30 min,去上清,取沉淀物涂片,用抗酸染色鏡檢,本菌為紅色,常呈叢狀。這兩種方法中有一種為陽性結果,可確診本病。
取腹瀉糞便直接接種于改良Camp-BAP瓊脂培養基,在一個大氣壓的85%N2、10%CO2和5%O2的混合氣體環境條件下,37℃或25℃進行分離培養,經生化試驗鑒定分離菌。
一般在腹瀉開始24 h內采取小腸內容物或糞便,經高速和超速離心濃縮病毒后,進行檢查,常用的方法有電鏡法、酶聯免疫吸附試驗等。還可將小腸或腸內容物涂片,用已知牛輪狀病毒熒光抗體做直接熒光試驗以及多重RTPCR鑒定病毒。必要時將病料接種于MA-104細胞進行病毒分離培養。
用電子顯微鏡從腹瀉便中直接觀察病毒粒子,或用牛冠狀病毒熒光抗體從糞便中檢出本病毒。必要時將病料接種于BEK-1或HRT-8細胞進行病毒分離培養,用已知牛冠狀病毒抗血清做病毒中和試驗鑒定分離的病毒。
可采用飽和蔗糖溶液漂浮法收集糞便中的卵囊,再用1 000倍的油鏡檢查,可見到圓形或卵圓形的卵囊,內含有4個裸露的子孢子和1個殘體。還可采用改良的酸性染色法,制成蟲體抹片,染色,鏡檢,隱孢子蟲卵囊被染成紅色,此法檢出率較高。還可采用間接免疫熒光法,隱孢子蟲卵囊以熒光抗體染色后顯示蘋果綠熒光,極易辨認,敏感性高達100%,特異性97%,此法目前已成為國外診斷隱孢子蟲病最常用的方法之一。死后診斷時取病變部位或刮取消化道黏膜抹片染色,或采用病理切片,姬姆薩染色,或制成電鏡樣本,鑒定蟲體。對可疑病例可采用實驗動物感染加以確診。
對成蟲引起的疾病可采用反復水洗沉淀法進行糞便檢查,檢出大量蟲卵即可確診。對童蟲引起的疾病,在生前診斷要結合臨床癥狀、分析流行病學資料做出判斷,必要時可進行尸體剖檢,根據其病變和檢出的大量童蟲而確診。
在患牛糞便中檢到黃白色孕卵節片,形似煮熟的米粒,將孕節侮涂片檢查時,可見到灰白色、特征性的蟲卵即可確診。未發現節片時,用飽和鹽水浮集法檢查糞便,可發現蟲卵。如果患牛癥狀明顯,但未檢出蟲體或蟲卵,可能是蟲體尚未成熟,此時可采用診斷性驅蟲方法。死后剖檢,在小腸內可見到大量蟲體和相應的病變。
采用飽和鹽水漂浮法進行蟲卵檢查,檢出大量的蟲卵即可確診。死后剖檢在小腸找到犢牛弓首蛔蟲或在血管、肺臟找到移行期幼蟲也可確診。
血液學變化不明顯,但可見低血鈣,代謝酸中毒。
血、尿檢驗結果明顯有變。發病初期,白細胞總數增多,中性粒細胞比例增大,核型左移,出現多量桿狀和幼稚型(增生性左移);發病后期,白細胞總數明顯減少。由于機體長時間脫水和循環系統衰竭,而出現相對性紅細胞增多癥指征,包括血液濃稠,血沉減慢,紅細胞壓積容量增高(>40%)。尿蛋白質含量增多,腎上皮細胞以至各種管型也有改變。
尿液、乳汁和血中酮體含量增高,尿呈酸性。血糖降低,堿貯下降,多數血脂升高。臨床病理檢查,血酮水平>20 mg·dL-1,血糖含量<50 mg·dL-1,并且呈現明顯癥狀的,稱為臨床酮病。血酮水平為10~20 mg·dL-1,但無明顯臨床癥狀的,稱為亞臨床酮病。原發性酮病時,血糖為20~40 mg·dL-1(正常是50 mg·dL-1),血酮10~100 mg·dL-1(正常為10 mg·dL-1)。繼發性酮病時,血糖常>40 mg·dL-1,血酮很少超過50 mg·dL-1。尿酮差異很大,正??蛇_70 mg· dL-1,酮病時,約達80~1 300 mg· dL-1。乳酮較穩定,酮病時平均值達40 mg·dL-1正常為3 mg·dL-1)。目前,國內多采用酮粉法,國外多采用試紙法定性檢測牛乳中酮體陽性,作為監測泌乳早期牛群亞臨床酮病的依據。