腺病毒介導hBDNF基因修飾骨髓間充質干細胞靜脈移植對大鼠脊髓損傷后OMgp表達的影響及意義

陳榮生 王長昇 張立群 許衛紅

(福建醫科大學附屬第一醫院脊柱外科，福建 福州 350005)

脊髓損傷(SCI)是一種嚴重的中樞神經系統創傷性疾病，可造成永久性、毀滅性的神經功能缺損和殘疾。骨髓間充質干細胞(BMSCs)是來源于骨髓支持結構的一種多能干細胞，可在體外定向分化為神經元及膠質細胞，用于SCI的移植治療〔1〕，但在神經營養因子與軸突生長抑制因子相互拮抗的局部環境中，神經再生十分有限〔2〕。腦源性神經營養因子(hBDNF)在SCI發生時表達上調，可促進SCI中軸突的再生及感覺功能的恢復〔3，4〕。少突膠質細胞髓鞘糖蛋白(OMgp)是中樞神經系統(CNS)髓鞘中重要的軸突生長抑制因子〔5〕，但目前其在BMSCs治療中的意義尚不明確。本研究通過靜脈移植腺病毒上調hBDNF的BMSCs治療大鼠SCI模型，觀察其療效及對OMgp表達的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物及細胞 雄性SD大鼠(上海斯萊克實驗動物中心)構建SCI模型，體重(250±20)g。人腎上皮細胞系HEK293細胞(上海酶研生物科技有限公司)。

1.2實驗試劑 DMEM培養基、胎牛血清及胰蛋白酶(美國Gibco公司)，脂質體Lipofectamine2000(美國Thermo公司)，聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)蛋白濃度測定試劑盒(上海碧云天生物公司)，聚偏氟乙烯(PVDF)膜(美國Millipore公司)，蛋白抽提試劑盒(北京康為世紀生物科技有限公司)，電化學發光(ECL)發光液(美國Thermo公司)，hBDNF、OMgp及β-actin抗體(美國Abcam公司)，山羊抗兔免疫球蛋白(Ig)G(北京中杉公司)，聚丙烯酰胺，SDS及過硫氨酸等(美國Arfleresco公司)，其余試劑均為國產分析純。

1.3實驗儀器 3111型CO2細胞培養箱(美國Thermo公司)，ECO1.5紫外超凈工作臺(美國Thermo公司)，Allegra TM64R高速冷凍離……