調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠頦舌肌動(dòng)脈血?dú)饧凹埩Φ挠绊?/h1>
2019-02-15 10:00:30張麗秀楊海淼歐喜燕朱同剛鄒權(quán)李馳坤丁云錄孫永亮張琳琳劉鐵軍
中國老年學(xué)雜志 2019年2期 關(guān)鍵詞：劑量實(shí)驗(yàn)
張麗秀 楊海淼 歐喜燕 朱同剛 鄒權(quán) 李馳坤 丁云錄 孫永亮 張琳琳 劉鐵軍
(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)
目前已證實(shí)許多危險(xiǎn)因素參與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)的發(fā)病和進(jìn)展，以頦舌肌為主的上氣道擴(kuò)張肌結(jié)構(gòu)和功能障礙是OSAHS的主要致病因素之一〔1～3〕。綜合古代、現(xiàn)代醫(yī)家論述及臨床調(diào)研與課題組多年臨床實(shí)踐并結(jié)合實(shí)驗(yàn)，證明調(diào)宗氣組方可改善大鼠頦舌肌功能，從而對OSAHS患者的治療起到積極的意義。
1 材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)選取健康Wistar大鼠，雄性，體重220～250 g，50只。所有實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照Guide for the Care and Use of Laboratory Animals(NIH頒布，No.85-23)要求執(zhí)行。
1.2藥品與相應(yīng)試劑 藥物組成：黃芪，黨參，石菖蒲，黃芩，丹參，川芎，地龍，薄荷，郁金等(合計(jì)224 g)。
1.3氣體 高純度氮?dú)馀c醫(yī)用氧氣：由巨洋氣體有限責(zé)任公司提供(長春市)，濃度>99.99%，。
1.4儀器 動(dòng)物低氧艙：由課題組聯(lián)合吉林省農(nóng)業(yè)機(jī)械研究院制作；手掌血?dú)夥治鰞x：型號：i-STAT300，美國雅培公司產(chǎn)品；血?dú)夥治鰞x測試卡：型號：G3+，美國雅培公司產(chǎn)品；生理信號采集系統(tǒng)，型號：Powerlab/8sp，澳大利亞埃德公司產(chǎn)品；紫外/可見分光光度計(jì)，Perkin Elmer公司產(chǎn)品，型號：Lambda25；電子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品，型號：YP1201N；高通量組織研磨器：Scientz-48型，寧波新芝生物科技股份有限公司提供；賀利氏(Heraeus)離心機(jī)(臺式)，型號：Biofuge Stratos；酶標(biāo)儀，型號：BIO680，美國伯樂公司產(chǎn)品；迷你雙垂直電泳儀電泳槽蛋白凝膠電泳儀，型號：DYCZ-24DN，北京六一儀器廠；轉(zhuǎn)移電泳儀電源，型號：DYY-7C，北京六一儀器廠；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)：天能科技有限公司(上海)，Tanon 6100。
1.5實(shí)驗(yàn)方法
1.5.1中藥的制作 將上述中藥免煎提取物溶于41.5 ml的蒸餾水中作為高劑量調(diào)宗氣方備用，中劑量調(diào)宗氣方將高劑量調(diào)宗氣方稀釋2倍后備用，低劑量調(diào)宗氣方將中劑量調(diào)宗氣方稀釋2倍后備用。
1.5.2實(shí)驗(yàn)分組、給藥 大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為慢性間歇性缺氧組、慢調(diào)宗氣組方高、中、低劑量組、正常對照組。正常對照組、慢性間歇性缺氧組動(dòng)物給予1 ml·kg-1·d-1蒸餾水灌胃；調(diào)節(jié)氣組方高劑量組以46.66 g·kg-1·d-1藥灌胃，該給藥劑量相約為每日用等效劑量的4倍；調(diào)宗氣組方中劑量組動(dòng)物以23.33 g·kg-1·d-1中藥灌胃，該給藥劑量相約為臨床每日用等效劑量的2倍；調(diào)宗氣組方低劑量組動(dòng)物16.67g·kg-1·d-1中藥灌胃，該給藥劑量約為臨床每日用等效劑量的等倍。
1.5.3慢性間歇性缺氧模型的建立
1.5.3.1低氧動(dòng)物艙的建立及改進(jìn) 制成長方體艙，規(guī)格為120 cm×60 cm×60 cm，選用的有機(jī)玻璃8 mm厚，艙體上面配有密封蓋(可打開)，用于取放動(dòng)物，側(cè)壁留有一個(gè)直徑為20 mm小孔(用作輸入氮?dú)?，兩端分別安裝電動(dòng)風(fēng)閥(直徑為160 mm)，其中一端同剛安裝風(fēng)機(jī)，用于空氣的吸入及缺氧艙內(nèi)氣體的排出。試驗(yàn)過程中，分別用生石灰和硅膠干燥劑吸收艙內(nèi)的二氧化碳和水蒸氣。
1.5.3.2間歇性缺氧實(shí)驗(yàn) 將慢性間歇性缺氧組、調(diào)宗氣組方各劑量組大鼠分別置于慢性間歇性低氧艙內(nèi)，連續(xù)5 w實(shí)驗(yàn)。
1.5.4檢測指標(biāo)
1.5.4.1調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠動(dòng)脈血?dú)庾兓挠绊?于給藥5 w末后，經(jīng)腹腔給動(dòng)物注射20%氨甲酸乙酯(烏來糖)溶液(5 ml/kg)麻醉，于大鼠第4、5肋間穿刺，取左心室動(dòng)脈血1 ml，快速注入血?dú)馄校醚獨(dú)夥治鰞x檢測其動(dòng)脈血血?dú)猓^察各組大鼠動(dòng)脈血氧分丈夫(PaO2)、血氧飽和度(SaO2)變化。
1.5.4.2調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠頦舌肌肌張力變化的影響 用上述麻醉方法，給大鼠固定，逐層分離舌底部肌肉，暴露頰舌肌。分離舌下神經(jīng)中央支和側(cè)支，并切斷側(cè)支，將生物信號采集系統(tǒng)相連的銀質(zhì)雙極鉤狀電極鉤住舌下神經(jīng)中央支。將一側(cè)頰舌肌的下頜骨固定，肌肉處于最適初長度。給予刺激，記錄收縮最大張力。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel2000軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2.1調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠動(dòng)脈血?dú)庾兓挠绊?慢性間歇性缺氧組與正常對照組比較，其動(dòng)脈血PaO2、SaO2顯著降低(P<0.001)，調(diào)宗氣組方高、中劑量組動(dòng)脈血PaO2與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.001，P<0.05)，調(diào)宗氣組方低劑量組動(dòng)脈血PaO2與慢性間歇性缺氧組比較差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但仍有增高趨勢；調(diào)宗氣組方高、中、低劑量組動(dòng)脈血SaO2與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.001，P<0.05)。見表1。
表1 各組動(dòng)脈血?dú)庾兓?/p>
與慢性間歇性缺氧組比較:1)P<0.05，2)P<0.001
2.2調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠頦舌肌肌張力變化的影響 慢性間歇性缺氧組頦舌肌肌張力〔(2.11±0.11)N/mm2〕與正常對照組比較顯著降低〔(2.36±0.11)N/mm2，P<0.001〕。調(diào)宗氣組方高劑量組〔(2.25±0.11)N/mm2〕、中劑量組〔(2.23±0.11)N/mm2〕頦舌肌肌張力與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.01，P<0.05)，調(diào)宗氣組方低劑量組〔(2.18±0.13)N/mm2〕頦舌肌肌張力與慢性間歇性缺氧組比較雖無顯著性差異(P>0.05)，但仍有增高趨勢。
3 討 論
OSAHS是一種睡眠呼吸疾病，患者白天困倦、注意力不集中、乏力、頭暈、心慌胸悶等多臟器及多系統(tǒng)功能損傷，嚴(yán)重的影響生活質(zhì)量〔5～9〕。目前西醫(yī)對于OSAHS的治療，主要針對上述參與OSAHS的發(fā)病、發(fā)展各危險(xiǎn)因素進(jìn)行，手術(shù)成為OSAHS的主要治療手段。對于采取手術(shù)治療應(yīng)當(dāng)保持更加審慎的態(tài)度。使用無創(chuàng)通氣治療，不去病源，不舒適感，攜帶不方便，部分患者需終生睡眠時(shí)使用，患者依從性差〔10～12〕。由于副作用大、有效性低，藥物治療更不在常規(guī)治療之列。近年來，多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為該病主要病理因素為痰濕、熱及氣滯、血瘀等，痰濕內(nèi)阻、痰熱內(nèi)塞、氣滯血瘀、肺脾腎虛、心陽不足等為主要病機(jī)。由于現(xiàn)代社會環(huán)境、缺乏運(yùn)動(dòng)、壓力、飲食等因素，尤以肺氣不利，脾失健運(yùn)而致痰、濕、瘀為關(guān)鍵，其發(fā)病人群及相關(guān)臨床研究亦多見。但目前機(jī)制研究的深入化、細(xì)化不夠，缺乏實(shí)驗(yàn)研究的支持。OSAHS患者多見于肥胖、體重增加同時(shí)脾胃功能減退的人群，而本病發(fā)生時(shí)患者處于慢性間歇性低氧狀態(tài)，說明肺吸入清氣的功能亦受到影響。根據(jù)宗氣的概念及組成：宗氣是由肺吸入的清氣和脾胃所化生的水谷精微之氣組成，OSAHS患者宗氣的生成及功能勢必受到影響，調(diào)節(jié)其“宗氣”功能，補(bǔ)充其“宗氣”的不足，從而改善肺吸入清氣及增強(qiáng)脾主肌肉的功能，對改善此類患者的癥狀可起到積極的意義，且本課題組運(yùn)用該理論進(jìn)行臨床試驗(yàn)，已取得了成效〔13～17〕。
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1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)選取健康Wistar大鼠，雄性，體重220～250 g，50只。所有實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照Guide for the Care and Use of Laboratory Animals(NIH頒布，No.85-23)要求執(zhí)行。
1.2藥品與相應(yīng)試劑 藥物組成：黃芪，黨參，石菖蒲，黃芩，丹參，川芎，地龍，薄荷，郁金等(合計(jì)224 g)。
1.3氣體 高純度氮?dú)馀c醫(yī)用氧氣：由巨洋氣體有限責(zé)任公司提供(長春市)，濃度>99.99%，。
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1.5實(shí)驗(yàn)方法
1.5.1中藥的制作 將上述中藥免煎提取物溶于41.5 ml的蒸餾水中作為高劑量調(diào)宗氣方備用，中劑量調(diào)宗氣方將高劑量調(diào)宗氣方稀釋2倍后備用，低劑量調(diào)宗氣方將中劑量調(diào)宗氣方稀釋2倍后備用。
1.5.2實(shí)驗(yàn)分組、給藥 大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為慢性間歇性缺氧組、慢調(diào)宗氣組方高、中、低劑量組、正常對照組。正常對照組、慢性間歇性缺氧組動(dòng)物給予1 ml·kg-1·d-1蒸餾水灌胃；調(diào)節(jié)氣組方高劑量組以46.66 g·kg-1·d-1藥灌胃，該給藥劑量相約為每日用等效劑量的4倍；調(diào)宗氣組方中劑量組動(dòng)物以23.33 g·kg-1·d-1中藥灌胃，該給藥劑量相約為臨床每日用等效劑量的2倍；調(diào)宗氣組方低劑量組動(dòng)物16.67g·kg-1·d-1中藥灌胃，該給藥劑量約為臨床每日用等效劑量的等倍。
1.5.3慢性間歇性缺氧模型的建立
1.5.3.1低氧動(dòng)物艙的建立及改進(jìn) 制成長方體艙，規(guī)格為120 cm×60 cm×60 cm，選用的有機(jī)玻璃8 mm厚，艙體上面配有密封蓋(可打開)，用于取放動(dòng)物，側(cè)壁留有一個(gè)直徑為20 mm小孔(用作輸入氮?dú)?，兩端分別安裝電動(dòng)風(fēng)閥(直徑為160 mm)，其中一端同剛安裝風(fēng)機(jī)，用于空氣的吸入及缺氧艙內(nèi)氣體的排出。試驗(yàn)過程中，分別用生石灰和硅膠干燥劑吸收艙內(nèi)的二氧化碳和水蒸氣。
1.5.3.2間歇性缺氧實(shí)驗(yàn) 將慢性間歇性缺氧組、調(diào)宗氣組方各劑量組大鼠分別置于慢性間歇性低氧艙內(nèi)，連續(xù)5 w實(shí)驗(yàn)。
1.5.4檢測指標(biāo)
1.5.4.1調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠動(dòng)脈血?dú)庾兓挠绊?于給藥5 w末后，經(jīng)腹腔給動(dòng)物注射20%氨甲酸乙酯(烏來糖)溶液(5 ml/kg)麻醉，于大鼠第4、5肋間穿刺，取左心室動(dòng)脈血1 ml，快速注入血?dú)馄校醚獨(dú)夥治鰞x檢測其動(dòng)脈血血?dú)猓^察各組大鼠動(dòng)脈血氧分丈夫(PaO2)、血氧飽和度(SaO2)變化。
1.5.4.2調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠頦舌肌肌張力變化的影響 用上述麻醉方法，給大鼠固定，逐層分離舌底部肌肉，暴露頰舌肌。分離舌下神經(jīng)中央支和側(cè)支，并切斷側(cè)支，將生物信號采集系統(tǒng)相連的銀質(zhì)雙極鉤狀電極鉤住舌下神經(jīng)中央支。將一側(cè)頰舌肌的下頜骨固定，肌肉處于最適初長度。給予刺激，記錄收縮最大張力。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel2000軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2.1調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠動(dòng)脈血?dú)庾兓挠绊?慢性間歇性缺氧組與正常對照組比較，其動(dòng)脈血PaO2、SaO2顯著降低(P<0.001)，調(diào)宗氣組方高、中劑量組動(dòng)脈血PaO2與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.001，P<0.05)，調(diào)宗氣組方低劑量組動(dòng)脈血PaO2與慢性間歇性缺氧組比較差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但仍有增高趨勢；調(diào)宗氣組方高、中、低劑量組動(dòng)脈血SaO2與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.001，P<0.05)。見表1。
表1 各組動(dòng)脈血?dú)庾兓?/p>
與慢性間歇性缺氧組比較:1)P<0.05，2)P<0.001
2.2調(diào)宗氣組方對慢性間歇性缺氧大鼠頦舌肌肌張力變化的影響 慢性間歇性缺氧組頦舌肌肌張力〔(2.11±0.11)N/mm2〕與正常對照組比較顯著降低〔(2.36±0.11)N/mm2，P<0.001〕。調(diào)宗氣組方高劑量組〔(2.25±0.11)N/mm2〕、中劑量組〔(2.23±0.11)N/mm2〕頦舌肌肌張力與慢性間歇性缺氧組比較顯著增加(P<0.01，P<0.05)，調(diào)宗氣組方低劑量組〔(2.18±0.13)N/mm2〕頦舌肌肌張力與慢性間歇性缺氧組比較雖無顯著性差異(P>0.05)，但仍有增高趨勢。
3 討 論
OSAHS是一種睡眠呼吸疾病，患者白天困倦、注意力不集中、乏力、頭暈、心慌胸悶等多臟器及多系統(tǒng)功能損傷，嚴(yán)重的影響生活質(zhì)量〔5～9〕。目前西醫(yī)對于OSAHS的治療，主要針對上述參與OSAHS的發(fā)病、發(fā)展各危險(xiǎn)因素進(jìn)行，手術(shù)成為OSAHS的主要治療手段。對于采取手術(shù)治療應(yīng)當(dāng)保持更加審慎的態(tài)度。使用無創(chuàng)通氣治療，不去病源，不舒適感，攜帶不方便，部分患者需終生睡眠時(shí)使用，患者依從性差〔10～12〕。由于副作用大、有效性低，藥物治療更不在常規(guī)治療之列。近年來，多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為該病主要病理因素為痰濕、熱及氣滯、血瘀等，痰濕內(nèi)阻、痰熱內(nèi)塞、氣滯血瘀、肺脾腎虛、心陽不足等為主要病機(jī)。由于現(xiàn)代社會環(huán)境、缺乏運(yùn)動(dòng)、壓力、飲食等因素，尤以肺氣不利，脾失健運(yùn)而致痰、濕、瘀為關(guān)鍵，其發(fā)病人群及相關(guān)臨床研究亦多見。但目前機(jī)制研究的深入化、細(xì)化不夠，缺乏實(shí)驗(yàn)研究的支持。OSAHS患者多見于肥胖、體重增加同時(shí)脾胃功能減退的人群，而本病發(fā)生時(shí)患者處于慢性間歇性低氧狀態(tài)，說明肺吸入清氣的功能亦受到影響。根據(jù)宗氣的概念及組成：宗氣是由肺吸入的清氣和脾胃所化生的水谷精微之氣組成，OSAHS患者宗氣的生成及功能勢必受到影響，調(diào)節(jié)其“宗氣”功能，補(bǔ)充其“宗氣”的不足，從而改善肺吸入清氣及增強(qiáng)脾主肌肉的功能，對改善此類患者的癥狀可起到積極的意義，且本課題組運(yùn)用該理論進(jìn)行臨床試驗(yàn)，已取得了成效〔13～17〕。
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