解脲支原體感染對(duì)表征男性精子質(zhì)量關(guān)鍵參數(shù)影響的全面分析

宋偉杰 劉心怡 劉建業(yè)，3 劉祥虎 伍 拓 何樂(lè)業(yè)，3

1. 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院 泌尿外科（湖南長(zhǎng)沙 410013）；

2. 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院 婦產(chǎn)科（湖南長(zhǎng)沙 410013）；

3. 中南大學(xué)前列腺疾病研究所（湖南長(zhǎng)沙 410013）

生殖健康相關(guān)的流行病學(xué)資料顯示[1]，我國(guó)男性生殖水平較之前明顯降低， 且男性不育患者數(shù)量呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)。 此現(xiàn)象除了與當(dāng)今男性生活壓力增大、生育年齡延后及不良的飲食生活習(xí)慣有關(guān)外， 支原體等病原微生物的泌尿生殖道感染也是重要影響因素之一[2]，有報(bào)道該比例約為15%[3]。 解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,UU)為支原體的一種，形態(tài)學(xué)觀察表明：UU 能吸附于精子表面, 阻止精子的運(yùn)動(dòng), 并產(chǎn)生神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)干擾精子與卵子的結(jié)合, 但其具體致病機(jī)制仍不十分明確[4]，支原體感染與男性精子質(zhì)量等相關(guān)性研究結(jié)論也一直存在爭(zhēng)議[5-6]。 本研究通過(guò)分析我院最近門診接診的男性生育檢查患者的精液檢查結(jié)果，探討解脲支原體感染與男性精液質(zhì)量間的關(guān)系。

資料與方法

一、研究對(duì)象

回顧性分析自2018 年5 月至2019 年7 月于我院泌尿外科門診就診的生育檢查患者共2612 名，資料完整者共1313 名，其中精液UU 培養(yǎng)陽(yáng)性患者188 名，占比例14.3%。 188 名支原體培養(yǎng)陽(yáng)性患者， 年齡19～54歲，平均年齡31 歲，設(shè)為病例組。 在1125 名門診資料完整且支原體培養(yǎng)陰性的患者中， 隨機(jī)選取188 例患者作為對(duì)照組，兩組患者性生活正常，無(wú)明顯睪丸、附睪、輸精管等異常，無(wú)性傳播疾病病史，具有可比性。

二、儀器和試劑

國(guó)產(chǎn)顯微鏡（BEION M3），全自動(dòng)精子質(zhì)量分析儀（BEION S3-2）， 支原體分離鑒定試劑盒 （粵械注準(zhǔn)20172400576，珠海經(jīng)濟(jì)特區(qū)海泰生物制藥有限公司）

三、研究方法

（一）精液標(biāo)本采集

所有的研究對(duì)象按照 《世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》[9]第五版( 以下簡(jiǎn)稱WHO 第五版)要求，在取精前禁欲2～7 d，手淫方式或自動(dòng)取精按摩器采集精液于干燥有刻度的無(wú)菌杯中， 并要求在實(shí)驗(yàn)室附近取精室留取，標(biāo)本杯上注明患者姓名，37℃水浴箱內(nèi)孵育待其完全液化后進(jìn)行檢測(cè)。

（二）精液常規(guī)分析標(biāo)準(zhǔn)

參照WHO 第五版標(biāo)準(zhǔn)， 正常精液參考范圍:精液體積≥1.5mL，pH≥7.2，液化時(shí)間＜60min，精子濃度≥15×106/mL，前向運(yùn)動(dòng)(PR)精子≥32%，總活力[PR+非前向運(yùn)動(dòng)精子NP]≥40%，精子存活率≥58%。

（三）解脲支原體分離鑒定培養(yǎng)

根據(jù)試劑使用說(shuō)明書(shū)， 按以下步驟進(jìn)行。 試劑復(fù)溫：按標(biāo)本數(shù)取出相應(yīng)數(shù)量的培養(yǎng)液和測(cè)板，恢復(fù)至室溫，充分混勻培養(yǎng)液。 空白陰性對(duì)照：旋開(kāi)瓶蓋，用無(wú)菌吸嘴吸取培養(yǎng)基100μL 加入測(cè)試板A1 孔；接種標(biāo)本：將標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶，旋轉(zhuǎn)并擠壓數(shù)次，使拭子中標(biāo)本滲入，丟棄拭子或直接加入50μL陽(yáng)性培養(yǎng)物；加樣至測(cè)試板： 吸取100μL 含標(biāo)本培養(yǎng)基分別加入各微孔中； 加礦物油封蓋培養(yǎng)： 向各孔滴加1～2 滴無(wú)菌礦物油， 蓋上測(cè)試蓋板， 置 （37±1）℃恒溫箱中培養(yǎng)，在24～48h 分別觀察結(jié)果，并按要求填寫(xiě)報(bào)告單。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)分析。 比較兩組樣本前，采用Shapiro-Wilk 檢驗(yàn)判斷樣本是否符合正態(tài)分布。 若符合正態(tài)分布則采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述統(tǒng)計(jì)結(jié)果，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）描述統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。 對(duì)于分類變量，采用頻數(shù)和百分比進(jìn)行描述， 采用卡方檢驗(yàn)或確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

采用Shapiro-Wilk 檢驗(yàn)判斷出本研究樣本數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，因此采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）描述，組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。 具體統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果為：在1125 名門診資料完整且支原體培養(yǎng)陰性的患者中根據(jù)完全隨機(jī)原則抽取共188 例患者， 年齡中位數(shù)為30.0(28.0～32.0)歲，病例組共188 例，年齡中位數(shù)為30.0(28.0～34.0)歲，年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.811，P=0.417）； 兩組的精液液化狀態(tài)分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=67.693，P＜0.001。 兩組精液pH 值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z＜0.001，P=0.417）；兩組PR 精子百分率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-11.681，P＜0.001），病例組的PR 精子百分率中位數(shù)低于病例組；兩組精子總活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-11.922，P＜0.001），對(duì)照組的總活力中位數(shù)低于對(duì)照組；兩組排精量(mL)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.586，P=0.558）。 兩組精液正常形態(tài)精子(%)差異有統(tǒng)計(jì)意義（Z=-11.656，P＜0.001），病例組的正常形態(tài)精子(%)中位數(shù)低于陰性組；兩組精子濃度(106個(gè)/mL)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-7.847，P＜0.001），病例組的精子濃度(106個(gè)/mL)中位數(shù)低于對(duì)照組；兩組精子存活率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-11.922，P＜0.001），病例組的精子存活率中位數(shù)低于對(duì)照組。 具體見(jiàn)圖1 和表1。

圖1 UU 感染陰性和陽(yáng)性組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的精液參數(shù)對(duì)比

表1 兩組年齡及精液參數(shù)比較

討 論

在2018 年5 月至2019 年7 月就診于中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院泌尿外科門診生育檢查的患者中， 通過(guò)對(duì)精液樣本進(jìn)行UU 培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)， 挑選出UU 感染陽(yáng)性病例188 份為病例組，UU 感染陰性精液病例188 份為對(duì)照組， 對(duì)兩組樣本的精液參數(shù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。 結(jié)果表明：兩組樣本的排精量和精液pH 值沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)表1)；但是，對(duì)照組的精液液化狀態(tài)、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子總活力、正常形態(tài)精子、精子濃度、 精子存活率等表征男性精子質(zhì)量的關(guān)鍵參數(shù)均優(yōu)于病例組（見(jiàn)圖1 和表1）。解脲支原體感染會(huì)導(dǎo)致男性精子質(zhì)量下降。

相關(guān)的機(jī)制研究顯示，UU 為體積介于細(xì)菌和病毒之間的一類病原微生物，直徑僅有15～25μm。沒(méi)有細(xì)胞壁，不能獨(dú)立存活，常寄居在人體的泌尿生殖道上皮細(xì)胞內(nèi)， 是引發(fā)泌尿生殖系統(tǒng)感染的重要病原體之一。UU 能將其自身的原生質(zhì)膜和精子膜結(jié)合，原生質(zhì)內(nèi)的有毒蛋白質(zhì)和類脂成分直接融入精子膜內(nèi)， 對(duì)精子造成破壞和損傷，降低精子活力。此外，UU 還能釋放神經(jīng)毒素、殺死精子或?qū)е戮踊蝃7-8]。 UU 感染與男性精子質(zhì)量間的相關(guān)性被生殖領(lǐng)域研究者們廣泛關(guān)注[9-11]。王春霞等[12]（2012）通過(guò)比對(duì)分析某院就診的不育男性患者和正常生育男性精液參數(shù)， 證明了解脲支原體感染與患者不育存在顯著相關(guān)。 他們發(fā)現(xiàn)不育組UU 陽(yáng)性者與生育組UU 陰性者精液量及pH 值的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩組的精子濃度、精子活動(dòng)率等參數(shù)均是不育組UU 陽(yáng)性者低于生育組UU 陰性者。劉伯龍等[13]（2016）分析了解脲支原體感染對(duì)不育男性精液質(zhì)量及生育能力的影響， 發(fā)現(xiàn)不育男性中，UU 感染者精子總活力、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子存活率顯著降低，但精子畸形指數(shù)、體部畸形率和尾部畸形率與未感染UU者差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。張?jiān)粕降萚14]對(duì)男性不育門診患者按照細(xì)菌感染和解脲支原體感染進(jìn)行分組比較，分析組內(nèi)各參數(shù)間的差異。 他們的研究結(jié)果表明解脲支原體感染會(huì)導(dǎo)致精液量、精子濃度、精子總數(shù)、精子正常形態(tài)率下降，而對(duì)前向運(yùn)動(dòng)精子百分率沒(méi)有影響。 上述研究工作的共同特點(diǎn)之一是他們的病例組均為不育男性，由于不育男性的患病原因復(fù)雜，具有較大的差異性，因此，他們的研究結(jié)果也稍有差異。 但是，總體的結(jié)論是一致的，即UU 感染會(huì)使患者的精子質(zhì)量下降，與本文的研究結(jié)果一致。

與上述研究工作不同的是， 本文的研究樣本為生育檢查患者， 病例組和對(duì)照組在檢查前均不知情自身精子質(zhì)量情況，減少了樣本的選擇性差異。 此外，得益于檢測(cè)儀器及相關(guān)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展， 本文給出了排精量，pH 值、精液液化狀態(tài)、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子總活力、正常形態(tài)精子、精子濃度、精子存活率及正常形態(tài)精子數(shù)等幾乎所有與精子質(zhì)量相關(guān)參數(shù)的比對(duì)分析結(jié)果，相對(duì)更為全面。 我們的研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了UU 感染與男性精子質(zhì)量直接相關(guān)，為導(dǎo)致男性不孕不育的重要因素之一，應(yīng)該引起足夠重視。 精液UU 感染檢查應(yīng)列為孕前的一項(xiàng)常規(guī)檢查項(xiàng)目。 當(dāng)然，由于本研究所納入患者病例數(shù)有限，統(tǒng)計(jì)效能較低，結(jié)論的穩(wěn)定性尚待進(jìn)一步研究。