超高效液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜中4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物殘留

馬合勤，岑嘉茵

（佛山市順德區農業綜合技術中心，廣東佛山 528333）

氨基甲酸酯類殺蟲劑的作用機理和有機磷類殺蟲劑相似，主要通過抑制膽堿酯酶活性而致效。由于多數氨基甲酸酯類殺蟲劑與膽堿酯酶的結合可逆，且在機體內快速水解，因此，膽堿酯酶的活性較易恢復，其毒性較有機磷類殺蟲劑毒性低[1-2]。

由于氨基甲酸酯類殺蟲劑極性強，熱穩定性較差，因此，其殘留檢測方法目前廣泛使用的有液相色譜-熒光（HPLC-FLD）法[3-4]、液相色譜-質譜聯用（HPLC-MS）法[5-7]、氣相色譜法[8]和氣相色譜-質譜法[9-10]等。此外，液相色譜-飛行時間質譜（LC-TOF-MS）[11]被用于農產品中農藥多殘留分析，成為目前殘留分析研究的熱點。HPLC-FLD法靈敏度高，選擇性強，但易受基質干擾；HPLC-MS法測定氨基甲酸酯類農藥殘留具有定量準確，靈敏度高，抗干擾能力強等優點，是目前痕量檢測的首選方法。NY/T 761—2008[4]中介紹的前處理方法試劑用量大，耗時長，步驟相對較多；改進的QuEChERS方法相對簡單快捷，但成本較高[7]。本試驗探討蔬菜中滅多威、涕滅威、克百威和甲萘威4種農藥及其代謝物涕滅威砜（aldicarb sulfone）、涕滅威亞砜（aldicarb sulfoxide）、3-羥基克百威（3-hydroxy-carbofuran）的殘留分析方法。樣品使用乙腈提取，Agilent Bond Elut QuEChERS小柱凈化，融合了文獻[4]和文獻[7]前處理優點，試劑使用量少，成本相對較低，操作步驟少，能快速檢測蔬菜中多種氨基甲酸酯類農藥，為分析確證工作提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、乙腈均為色譜純；試驗用水為Milli-Q高純水；氯化鈉為分析純；醋酸銨為優級純；15 mL分散固相萃取凈化管（安捷倫公司，5982-5656CH），內含PSA（N-丙基乙二胺）0.15 g、硫酸鎂0.9 g；氨基甲酸酯類農藥標準品（100 μg/mL），購于農業部環境質量監督檢驗測試中心。

1.2 儀器與設備

U3000 DGLC＋TSQ Endura超高壓液相色譜-串聯質譜分析系統，配有電噴霧離子源（ESI）；德國Retsch公司GM200型研磨機；美國Organomation公司N-EVAP 112型氮吹儀。

1.3 樣品前處理

取切碎勻漿后的蔬菜樣品20 g（±0.1 g），放入100 mL離心管中，加入40 mL乙腈、9 g烘干的氯化鈉。渦旋30 s，蓋緊離心管，用力振搖1 min，然后以4 000 r/min離心10 min。

取上層乙腈液10 mL轉入分散固相萃取凈化管，加入陶瓷均質子（5982-9313），4 000 r/min離心5 min。取4 mL萃取液轉移至離心管中，氮氣吹干。用2 mL流動相復溶，0.2 μm過濾器過濾后轉移至進樣瓶待測。

1.4 標樣溶液配制

分別移取100 μL上述100 μg/mL標準品于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成質量濃度為1 μg/mL的氨基甲酸酯類農藥及其代謝物標樣儲備液，避光低溫保存。

移取適量體積的上述標樣儲備液于同一容量瓶中，用乙腈稀釋成所需濃度的混合標樣工作溶液，避光低溫保存。

1.5 儀器條件

1.5.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil GOLD Dim柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱溫：40℃；樣品室溫度：10℃；進樣體積：10.0 μL；流速：0.30 mL/min；流動相：醋酸銨水溶液（5 mmoL/L NH4OAc＋0.1%甲酸）、乙腈，梯度洗脫程序見表1。整個分析時長12 min。

1.5.2 質譜條件

離子源（ESI），正離子模式；毛細管電壓：3.2 kV；離子源溫度：110℃；錐孔氣流量：75 L/h；光電倍增器電壓：650 V。定性離子對、定量離子對、碰撞電壓和錐孔電壓等條件參數詳見表2。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

表2 質譜條件及參數

2 結果與分析

2.1 方法的線性回歸

使用空白樣品基質溶液將標樣溶液配制成質量濃度分別為0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 μg/mL混合標樣工作溶液，在上述儀器條件下進行測定。4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物能有效分離，保留時間在6.0 min內，響應良好。當質量濃度為0.025～0.80 μg/mL時，4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物線性關系良好，相關系數為0.997 4～0.999 8。方法的最低檢測質量分數為0.003 mg/kg。線性回歸試驗數據見表3。

表3 方法的線性回歸方程及相關系數

2.2 前處理條件的選擇

文獻[4]中樣品經乙腈提取后，提取液蒸干，用甲醇＋二氯甲烷重新定容后，使用氨基小柱分離凈化，再對洗脫液吹干定容。試驗過程除了經氨基小柱凈化，還需要經過2次吹干定容，處理時間較長，且2次吹干易造成試驗回收率偏低。本試驗中試樣采用乙腈提取后，經Agilent Bond Elut QuEChERS分散固相萃取管凈化，簡化了處理過程。試驗步驟相對較少，處理時間短，使用耗材少，回收率高，凈化效果好，定量、定性更準確，縮短了試驗人員接觸化學試劑的時間。

2.3 流動相的選擇

當目標農藥的加合離子峰含有[M＋H]＋、[M＋Na]＋或[M＋NH4]＋時，向由水＋乙腈組成的流動相水相中加入5 mmol/L醋酸銨，各種農藥加合離子峰速率迅速提高。在電噴霧離子源ESI＋方式下，比較各種農藥加合離子豐度。結果顯示：涕滅威亞砜[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋；涕滅威砜[M＋H]＋＞[M＋Na]＋、滅多威[M＋H]＋＞[M＋Na]＋、3-羥基克百威[M＋H]＋＞[M＋NH4]＋＞[M＋Na]＋、涕滅威[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋＞[M＋H]＋、克百威[M＋H]＋＞[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋、甲萘威[M＋NH4]＋＞[M＋H]＋＞[M＋Na]＋。故選擇乙腈＋5 mmol/L醋酸銨水溶液體系為流動相，選取加合離子峰豐度較高且穩定的準分子離子峰為母離子。

與甲醇相比，以乙腈為流動相的有機相目標分析物的分離度和峰形更好，因此，流動相中的有機相選擇乙腈。在上述條件下，色譜圖見圖1。

圖1 氨基甲酸酯類農藥液相色譜圖

2.4 方法回收率及精密度試驗

采用空白加標的方法進行回收率和精密度試驗。分別添加混合標樣溶液使樣品中添加質量分數為0.02、0.04、0.20 mg/kg，每個添加水平設3個平行樣品。4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物的回收率為84.0%～109.9%，相對標準偏差為0.2%～12.4%，試驗結果見表4。

表4 方法回收率和精密度結果

3 結論

本試驗建立了超高效液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜中克百威、滅多威等4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物的殘留，以乙腈＋5 mmol/L醋酸銨水溶液梯度洗脫，在正離子模式下監測，最低檢測質量分數為0.003 mg/kg。方法準確，選擇性高，可以滿足蔬菜中4種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物殘留量的測定和確證。

本方法滿足農藥殘留檢測的要求，分析過程耗時短，誤差小，且溶劑使用量少。