Hp抗原聯合血清總唾液酸和胃黏膜Survivin檢測對胃腺癌診斷的意義

蔣香梅

(德陽市人民醫院檢驗科，四川德陽 618000)

隨著生活水平的不斷提高以及人們的飲食結構的改變，胃腺癌的發病率呈逐年攀升的趨勢，該類疾病會對患者的飲食、生活方式造成一定的影響，甚至威脅到患者的健康乃至生命[1]。臨床中用于診斷胃腺癌的方式除影像學及內窺鏡檢查外，還包括一系列血清腫瘤標志物的檢測[2]。目前已經證實，幽門螺桿菌(Hp)是慢性胃炎以及消化性潰瘍等疾病的主要致病因子之一，并參與了胃癌的發生與發展過程。隨著研究的不斷深入，研究人員提出Hp感染可能與其他胃腺癌密切相關。血清總唾液酸是神經氨酸的一種乙酰化衍生物，參與了細胞癌變的過程。目前國內外尚未查見關于Hp抗原聯合血清總唾液酸檢測在胃腺癌診斷方面的相關報道，所以本研究以消化系統疾病患者為研究對象，旨在探討二者聯合檢測對在胃腺癌的早期診斷與消化系統疾病鑒別中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取2016年2月至2017年2月期間本院收治90例胃腺癌患者(惡性腫瘤組)、90例消化系統良性疾病患者(良性疾病組)及同期入院體檢的60例健康人(健康對照組)為研究對象。

1.1.1納入標準 (1)胃腺癌患者，均經病理及影像學確診；(2)消化系統良性疾病患者；(3)18～75歲，性別不拘；(4)健康對照組受試者均無呼吸、消化和生殖等系統疾??；(5)臨床資料完整者。

1.1.2排除標準 (1)排除合并其他惡性腫瘤患者；(2)排除嚴重精神類疾病者；(3)排除短期內服用過對Hp檢查有影響藥物的患者；(4)排除經手術及放化療的惡性腫瘤患者；(5)排除臨床資料不全者。

1.1.3失聯原因及應對措施 (1)預計原因：受試者退出試驗；受試者轉院治療；(2)應對措施：遵照入選和排除標準按1：1比例補充。

1.1.4醫學倫理學問題 (1)受試者及家屬簽署同意參與研究的同意書；(2)依據臨床指南的相關原則充分保障受試者的治療安全。(3)對患者診療記錄進行保密，保護受試者的隱私權(倫理學批準函編號：2016-015)。

1.2研究方法

1.2.1酶聯免疫吸附測定(ELISA)法檢測Hp抗原 于晨起后采集全部受試者刷牙前唾液標本，并取1 mL唾液治愈試管中送檢。采用ELISA雙抗體夾心法(試劑盒購自中美合資北京協和藥業有限公司)，向包被抗-Hp多克隆抗體孔內加入混勻唾液，每孔100 μL，隨后加入兔抗-Hp多克隆抗體(辣根過氧化物酶標記)，每孔20 μL，置于室溫條件下1 h；采用1倍沖洗液洗板至少5次。每孔加入底物溶液2滴，置于室溫條件下10 min后每孔加入停止液2滴；采用比色儀在450 nm單波長條件下進行比色，檢測結果≥0.141判定為Hp抗原陽性，<0.141則判定為Hp抗原陰性。

1.2.2酶法測定血清總唾液酸 采集全部受試者靜脈血3 mL，采用離心機在3 000 r/ min條件下離心10 min，取上層血清保存于-80 ℃冰箱中待測，要求于1周內完成檢測。采用酶法于P800全自動生化分析儀(羅氏診斷產品(上海)有限公司)測定受試者血清總唾液酸含量，測定試劑盒購自浙江東甌診斷產品有限公司，全部步驟均嚴格按照說明書進行操作。血清總唾液酸正常范圍為456～754 mg/L，檢測結果>754 mg/L則判定為血清總唾液酸陽性。

1.2.3采用免疫組織化學SP方法測定胃黏膜中Survivi的陽性率 利用兔抗人Survivi當多克隆抗體(南京碧云天公司)進行免疫組化染色；光鏡下細胞漿、膜中出現粗細一致的棕黃色顆粒和細胞核呈棕黃色為陽性顯色(Survivin 主要在細胞核表達)。利用光鏡(×400)隨機觀察 5個視野，利用二次計分法：(1)染色強度計分：無顯色計為0分，顯淡黃色計為1分，顯棕黃色計為2分，顯棕褐色計為3分；(2)陽性細胞百分比計分：陰性為0分，陽性細胞比例<10% 為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。計算兩者得分乘積，如果積分≤2分為陰性，如果>2分為則為陽性。

2 結 果

2.13組受試者一般資料比較 調查結果顯示，3組受試者性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，故可排除上述因素對研究結果造成的影響，數據具有可比性，見表1。

表1 兩組受試者一般資料及病理信息比較

2.23組受試者Hp抗原陽性檢出率比較 惡性腫瘤組受試者Hp抗原陽性檢出率為78.89%，明顯高于良性疾病組及健康對照組，良性疾病組受試者Hp抗原陽性檢出率明顯高于健康對照組(5.56%vs. 1.67%)，3組受試者間Hp抗原陽性檢出率差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 3組受試者Hp抗原陽性檢出率比較

2.33組受試者血清總唾液酸陽性檢出率比較 惡性腫瘤組受試者血清總唾液酸陽性檢出率為56.67%，明顯高于良性疾病組及健康對照組，良性疾病組受試者血清總唾液酸陽性檢出率明顯高于健康對照組(8.89%vs.3.33%)，3組受試者間血清總唾液酸陽性檢出率差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 3組受試者血清總唾液酸陽性檢出率比較

2.43組受試者血清總唾液酸平均含量比較 惡性腫瘤組受試者血清總唾液酸平均含量為(845.17±72.38)mg/L，明顯高于良性疾病組及健康對照組，良性疾病組受試者血清總唾液酸平均含量明顯高于健康對照組(690.25±53.19)mg/Lvs.(587.26±36.12)mg/L，3組受試者間血清總唾液酸平均含量差異具有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 3組受試者血清總唾液酸平均含量比較

2.53組受試者胃黏膜Survivin的表達 在受試者胃黏膜檢測到Survivin的表達即認為該檢測項目為陽性結果，3組受試者胃黏膜Survivin的表達陽性率差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

2.6單獨檢測Hp抗原、血清總唾液酸及二者聯合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度的比較 單獨檢測Hp抗原診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為47.9%、90.4%；單獨檢測血清總唾液酸診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為52.3%、82.7%；二者聯合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為80.1%、80.9%，見表5。

表4 3組受試者胃黏膜Survivin的表達

表5 單獨檢測Hp抗原、血清總唾液酸及二者聯合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度(%)

2.7Hp抗原、血清總唾液酸單獨以及聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的相關性分析 線性相關分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的結果呈正相關(r=0.94，P<0.05)。

3 討 論

近年來，我國消化系統惡性腫瘤發病率較高，且呈現每年遞增的趨勢，嚴重危害患者及其家庭，早期診斷對于消化系統惡性腫瘤的治療意義重大[3-5]。目前越來越多的腫瘤標志物應用于臨床上惡性腫瘤的早期診斷中，并取得較好的輔助效果。然而值得注意的是，腫瘤標志物在惡性腫瘤的診斷中尚存缺陷，為此，本研究將Hp抗原與血清總唾液酸兩種指標相結合，旨在提升消化系統惡性腫瘤早期診斷的準確性。故本研究進一步分析Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的相關性分析，以為臨床診治提供更為詳實的理論依據。

本研究將唾液中Hp抗原與血清總唾液酸含量進行聯合檢測，將消化系惡性腫瘤患者診斷的靈敏度提升至80.1%，并得出結論，二者聯合檢測的靈敏度明顯高于單獨檢測其中一種指標，二者聯合檢測在臨床中胃腺癌的早期診斷與鑒別中具有一定的輔助價值。尤其重要的是，本研究利用線性相關分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的結果呈正相關(r=0.94，P<0.05)。直接檢測胃黏膜Survivin需要活檢取得患者的胃黏膜，該操作屬于有創操作，患者在活檢過程中比較痛苦，其診治費用亦較高。而Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測創傷小、速度快捷。

筆者分析其機理發現，Survivin是近年來發現的凋亡抑制蛋白家族(IAP)成員之一，具有不同于IAP家族其他成員的獨特結構和性質，其表達于腫瘤和未分化的胚胎組織，在正常組織中不表達，與腫瘤的發生、發展及浸潤轉移密切相關。本研究利用線性相關分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的結果呈正相關關系，其相關度較高。這是因為Survivin還作為微血管動力穩定因子，調節細胞有絲分裂，保護細胞的完整性，在血管內皮細胞生成和血管生成中起關鍵作用。胃炎類型、環境因素以及細菌類型等因素參與了胃癌的發生與發展，并認為Hp的存在使得胃癌的發病率明顯提高[6-8]。本研究中消化系統惡性腫瘤患者唾液Hp抗原的陽性檢出率明顯高于消化系統良性疾病患者與健康人，良性疾病患者高于健康人，且3組受試者間差異具有統計學意義(P<0.05)，再次證實了Hp與消化系統疾病及腫瘤的發生發展顯著相關。血清總唾液酸作為細胞膜糖蛋白的主要組成部分，血清總唾液酸含量隨著細胞惡變、癌細胞轉移、浸潤、失去接觸性抑制而變化[9]。

4 結 論

本文研究結果顯示，消化系統惡性腫瘤患者與良性疾病患者血清總唾液酸含量明顯升高，且惡性腫瘤患者明顯高于良性疾病患者，這是由于正常條件下人體內血清總唾液酸含量保持穩定，而當發生腫瘤惡變、炎性反應或其他疾病時，細胞膜上糖脂合成上升且細胞膜上糖脂轉化出現異常，導致脫落或分泌入血，最終引起患者血清總唾液酸含量上升[10-12]。故而，Hp抗原、血清總唾液酸聯合檢測與胃黏膜Survivin檢測的結果呈正相關關系，其相關度較高，其可以代替胃黏膜Survivin檢測作為胃腺癌診斷的敏感指標。