一種國產智能紅細胞洗滌機制備的紅細胞產品不同儲存期質控指標觀察

時卉麗，楊鳳霞，趙 倩，李建民，趙莉華，何路軍

(河北省血液中心，河北石家莊 050071)

經濟的快速發展，為我國各級醫療事業的發展增添了強大動力，尤其是在醫療制造業方面，機械化、自動化技術越發完善，大大提升了醫療制造業的工作效率與工作質量[1]。一直以來，我國對于洗滌紅細胞產品的制備多以手工制備為主，不僅工作效率低下，而且產品的質量及其穩定性受制備者技術水平、操作方法、設備運轉以及周圍環境等因素影響大。加之在采用手工方法制備洗滌紅細胞產品時往往需要多次洗滌且耗時長，稍有不慎便會導致制備失敗，進而影響臨床的正常使用[2]。而機器制備方法的出現，不僅有效解決了上述的弊端，而且大大提升了洗滌紅細胞產品的制備效率。有報道顯示機器方法所制備的紅細胞其儲存期各項質控指標也較佳[3]。本文就機器及手工法制備的洗滌紅細胞產品不同儲存期質控指標差異進行更進一步探究，對機器法制備洗滌紅細胞的臨床價值進行判定，現報道如下。

1 材料與方法

1.1材料、儀器與試劑 原料血取本血站現有的采用分袋保存的60袋去白懸浮紅細胞，所有研究中血液均由本站提供，且其來源均取自街頭無償獻血人員。經檢驗，所有原料血的檢驗指標除轉氨酶異常，其他各項指標均達到國家標準，每袋2 U去白懸浮紅細胞。60袋去白懸浮紅細胞原料血的來源、檢驗指標以及血量等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。依據隨機數字法及對每袋原料血所采取制備方法的不同將其均分為手工、機器兩組。手工鹽水法30袋，機器洗滌法30袋；智能紅細胞洗滌機(型號：ZHXD)，一次性使用離心式紅細胞洗滌器(成都佳穎)、一次性使用機用注射器(成都佳穎)，RC12BP大容量低溫離心機(美國Kendro公司)，全自動無菌罐對接機(日本Terumo公司)，無菌接管機及無菌熔接片(日本泰爾茂公司)、溶血劑及酶清洗液劑(希森美康生物科技有限公司)、COULTER AcT.5diff全自動血細胞計數儀、UV765紫外-可見分光光度計、血漿游離血紅蛋白試劑盒(Trinder法)(北京瑞爾達科技有限公司)、腦脊液蛋白測定試劑盒(保定長城試劑廠)以及全血質控物(希森美康生物科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1手工鹽水法 手工組采用隨機抽取30袋去白懸浮紅細胞作為原料血，通過無菌接駁機將要制備的原料血與0.9%生理鹽水四聯袋接通，檢查接口兩端結合嚴密后在2～6 ℃ 2 840 r/min速度離心14 min，分出血漿或上清液制成濃縮紅細胞再加入250 mL 0.9%生理鹽水混勻，再次2～6 ℃ 2 840 r/min速度離心14 min，重復上述過程共分3次對紅細胞進行洗滌，在洗滌過程中盡可能分出血漿或上清液。最后在紅細胞中加入100 mL的紅細胞保存液制得[2]。

1.2.2機器洗滌法 機器組采用隨機抽取30袋去白懸浮紅細胞作為原料血，按照智能紅細胞洗滌機規定的方法在儀器上選擇洗滌紅細胞程序，通過無菌接駁機將要制備的原料血與配套耗材連接，開啟自動化程序，根據不同制備階段加入氯化鈉溶液進行自動洗滌，最后加入100 mL的紅細胞保存液完成洗滌紅細胞的制備[2]。

1.3觀察指標 按照新版國標提出的質量標準[3]，將血紅蛋白含量、上清蛋白質含量、儲存期末溶血率作為手工制備組和機器制備組的關鍵檢測指標。分別對手工、機器兩組不同制備方法下紅細胞產品進行詳細檢測鑒定，進而判定兩種制備方法的優劣。

1.4血紅蛋白含量檢測 對手工、機器兩組不同制備方法下紅細胞產品的血紅蛋白含量均采用COULTER AcT.5diff全自動血細胞計數儀檢測Hb濃度，用感量0.1 g的電子天平稱取洗滌紅細胞重量，結合洗滌紅細胞產品的比重(1.060)計算出容量和血紅蛋白含量。計算公式如下：洗滌紅細胞(MAP)容量(mL)=[整重量(g)-空袋重量(g)]÷洗滌紅細胞(MAP)比重(g/mL)；血紅蛋白含量=Hb(mg/L)×洗滌紅細胞(MAP)容量[4]。

1.5上清液蛋白含量檢測 對手工、機器兩組不同制備方法下紅細胞產品的上清蛋白質濃度的測定均嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》[4]規定進行，計算公式如下：上清液蛋白含量(g)=上清蛋白質濃度(mg/dL)×容量(mL)×10-5。

1.7統計學處理 應用SPSS 12.0軟件對不同制備方法下紅細胞產品的各檢測指標數據進行處理。采用t檢驗與χ2檢驗對比分析手工制備法與機器制備法二者所制備的紅細胞產品其不同儲存期質控指標的具體差異，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1機器組與手工組制備的洗滌紅細胞在不同儲存期Hb檢測結果差異 經不同制備方法制備洗滌后的紅細胞產品進行檢測發現，行機器方法制備的機器組紅細胞產品其不同儲存期Hb水平均明顯高于手工組，差異有統計學意義(P<0.05)。且機器組所制備紅細胞產品在不同儲存期其Hb呈穩定下降趨勢，而手工組這一趨勢并不穩定，見表1。

2.2機器組與手工組制備的洗滌紅細胞在不同儲存期上清蛋白含量檢測結果差異 對手工、機器兩組不同方法制備的紅細胞產品的上清蛋白含量代入計算公式后所得結果發現，手工、機器兩組其上清蛋白含量這一質控指標在不同儲存期變化不大，均未見明顯衰減，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3機器組與手工組制備的洗滌紅細胞在不同儲存期溶血率檢測結果差異 對手工、機器兩組不同方法制備的紅細胞產品的上清蛋白含量所得值代入溶血率計算公式后所得結果發現，兩組紅細胞產品隨著儲存期的延長紅細胞產品溶血率逐漸升高，而且手工法比機器法升高明顯，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表1 不同儲存期Hb的檢測結果

表2 不同儲存期上清蛋白含量的檢測結果

表3 不同儲存期溶血率的檢測結果

3 討 論

隨著臨床對血液制品的需求越來越大，傳統手工制備方法越發不能夠滿足需求[6]。加之傳統手工制備方法在制備紅細胞等產品時受制因素多，制作者自身操作及水平、儀器的設定與使用以及制備穩點、環境等均會影響紅細胞制備產品的質量。尤其是在其長期儲存方面，影響更大[7]。

臨床上對于紅細胞產品的手工制備主要是人工通過虹吸亦或是壓漿板將原料血中白細胞去除，而后通過多次洗滌進而得到懸浮紅細胞產品及相關的血漿產品[8]。本次研究在將30袋原料血經無菌接駁機聯通且行離心操作后，共進行了3次生理鹽水洗滌，最終得到紅細胞產品。手工制備方法不僅對工作人員技術水平的熟練度要求較高，而且在制備操作過程中常常會出現數據記錄錯誤或相關信息遺漏記錄的情況，這也使得制成的紅細胞產品溯源性差。因此，在西方發達國家，手工制備血液產品方法已逐步被淘汰，取而代之的是自動化、機械化的機器制備[9，10]。機器制備主要是利用無菌接駁機將要制備的原料血與配套耗材連接，開啟自動化程序對紅細胞產品進行洗滌制備[11]。機器化制備過程中的離心、洗滌過程均由全自動機器自動完成，不受人工操作的影響[12]。此外，機器方法制備紅細胞產品因采用全自動機器設備進行，因此，在制備紅細胞產品過程中對每一批次產品制備的質量、分離程序及時間、操作人員、使用設備型號及具體始末時間以及儲存時間等詳細信息均能夠由儀器自動記錄，并能夠經專業軟件建立紅細胞產品數據，大大提升了產品的溯源性[13-14]。本次研究機器組采用智能紅細胞洗滌機(型號：ZHXD)，一次性使用離心式紅細胞洗滌器(成都佳穎)，RC12BP大容量低溫離心機(美國Kendro公司)以及全自動無菌罐對接機(日本Terumo公司)等儀器對30袋原料血進行離心、洗滌操作，進而得到了最終紅細胞產品[15]。對于紅細胞產品的制備，采取機器方法具有優質高效、標準化、信息化以及自動化等優點。其研究結果表明，相較于手工方法，機器方法制備的紅細胞質量更佳，儲存時其各指標變化更為平穩，這同此次研究結果高度相似[16-17]。

由上述研究結果可知，對手工、機器兩組不同方法所制備的紅細胞產品的血紅蛋白含量、上清蛋白含量以及溶血率等3項關鍵檢測指標進行對比分析發現，手工、機器兩組各制得的30袋紅細胞產品其各項檢測指標除上清蛋白含量差異較小，其余各指標均有明顯差異。其中，行機器方法制備的機器組紅細胞產品其不同儲存期Hb水平均明顯高于手工組。機器組所制備紅細胞產品在不同儲存期Hb呈穩定下降趨勢，而手工組這一趨勢并不穩定。而在溶血率方面，機器制備組無論是在7 d、14 d、21 d、28 d還是在35 d各儲存期節點其溶血率均明顯低于手工組。即機器法制備的紅細胞產品更為穩定。