子宮內膜癌患者血清LncRNA ROR與miR-29的差異性表達及二者的診斷價值研究

陳 佳，許贇興

(南通大學附屬海安醫院輸血科，江蘇海安 226600)

子宮內膜癌好發于圍絕經期和絕經后女性[1]，是最常見的女性生殖系統腫瘤之一。每年有近200 000的新發子宮內膜癌病例，是常見婦科惡性腫瘤病死率僅次于卵巢癌和宮頸癌的第三位[2]。目前子宮內膜癌早期臨床表現不典型，導致許多患者就診時病情已發展至中晚期。此外，子宮內膜癌的診斷主要依靠診斷性刮宮，該操作為有創性檢查，會給患者造成一定的痛苦，不宜在人群中普及，嚴重影響患者預后[3]。尋找有效、穩定的生物學標志物無疑可為子宮內膜癌的治療贏得時間，對提高患者生存率，改善其生存質量具有重要意義。

研究發現，長鏈非編碼RNA ROR(lncRNA ROR)與微小RNA 29(miR-29)可通過表觀遺傳調控參與各種生理病理過程，并與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關[4-5]。本次實驗通過比較分析子宮內膜癌患者與健康女性血清LncRNA ROR和miR-29水平，分析二者與子宮內膜癌的臨床病理特征之間的關系及對子宮內膜癌的診斷及發病風險預測價值。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2013年2月至2017年2月在本院經病理學/細胞學確診的子宮內膜癌患者230例作為病例組。其中子宮內膜樣腺癌149例，黏液性腺癌45例，漿液性腺癌26例，透明細胞性腺癌10例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期87例，Ⅲ～Ⅳ期143例。子宮內膜癌的組織學類型和分期參照FIGO2009年手術病理分期[6]。同期收取250例于本院健康體檢者作為對照組。兩組研究對象的年齡、BMI、吸煙史、飲酒史和生育史等一般資料差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究的開展經醫院倫理委員會批準。

表1 兩組研究對象一般資料比較

1.2血清LncRNA ROR與miR-29水平檢測 受試者禁食10 h以上，次日清晨由專業醫護人員使用含促凝劑采血管抽取靜脈血10 mL，血液標本在1 h內于4 ℃條件下以12 000 g離心力離心15 min，收集血清進行相關指標檢測。血清總RNA的提取按照血液RNA提起試劑盒(中國Bioteke公司)說明書步驟進行。取上述提取的RNA，使用去除基因組逆轉錄試劑盒(中國Takara公司)逆轉錄為cDNA。采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測血清LncRNA ROR、miR-29及內參基因GAPDH表達水平。檢測過程中所用引物序列。見表2。 采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量，△Ct值=目的基因Ct值-GAPDH Ct值。血清LncRNA ROR與miR-29基因擴增曲線和熔解曲線峰型單一，說明引物沒有非特異性擴增，如圖1。

表2 引物序列

注：A圖為LncRNA ROR擴增曲線；B圖為LncRNA ROR熔解曲線；C圖為miR-29擴增曲線；D圖為miR-29熔解曲線

2 結 果

2.1兩組研究對象血清LncRNA ROR、miR-29水平比較 病例組的血清LncRNA ROR、miR-29水平明顯高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。如表3。

表3 兩組研究對象血清LncRNA ROR、miR-29水平比較

2.2血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內膜癌患者臨床病理特征之間的關系 血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內膜癌患者的年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、生育史、組織學類型等因素差異無統計學意義(P>0.05)，而不同子宮內膜癌的TNM分期差異有統計學意義(P<0.05)，在Ⅰ～Ⅱ期患者中差異有統計學意義(P<0.05)。如表4。

表4 血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內膜癌患者臨床病理特征的關系

圖2 血清LncRNA ROR與miR-29對子宮內膜癌鑒別診斷的ROC曲線分析

2.3血清LncRNA ROR與miR-29對子宮內膜癌的鑒別診斷價值 血清LncRNA ROR和miR-29區分子宮內膜癌和健康人群的AUC分別為：0.791(95%CI：0.730～0.921，P<0.001)和0.861(95%CI：0.800～0.922，P<0.001)，對應的靈敏度/特異度分別為：77.9%/82.6%、85.3%/68.5%。聯合血清LncRNA ROR和miR-29區分子宮內膜癌和健康人群的AUC為0.907(95%CI：0.812～0.961，P<0.001)，靈敏度為83.7%，特異性92.8%。聯合檢測時，鑒別子宮內膜癌的特異性顯著提高，見圖2。

2.4風險評估 單因素分析顯示，血清高LncRNA ROR和miR-29水平是子宮內膜癌發病的危險因素；多因素分析顯示，校正年齡、BMI、吸煙史、飲酒史和生育史等因素影響后，血清高LncRNA ROR和miR-29水平是子宮內膜癌發病的獨立危險因素，見表5。

表5 血清LncRNA ROR和miR-29水平對子宮內膜癌的發病風險預測價值

3 討 論

子宮內膜癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，具有發病率高、侵襲性強以及預后差等特點，是威脅人群健康的主要疾病之一[2]。生物標志物是血液、尿液或者組織中能檢測疾病狀態的分子指標，可用于疾病的檢測與評估[7]。生物標志物在體液中的濃度變化可以為臨床提供疾病的進展情況，理想情況下，生物標志物應具有檢測早期小塊腫瘤的高靈敏度、高特異度，并且在非腫瘤患者體內不會增加。目前，對于子宮內膜癌的診斷仍然缺乏有效指標，導致這類患者預后較差[8]，而生物標志物的早期檢測可顯著提高子宮內膜癌患者的生存率。CA125是子宮內膜癌的輔助診斷指標之一，但由于CA125在非生殖系統腫瘤如淋巴瘤與子宮內膜異位癥等良性疾病中也可出現增高，導致其靈敏度不足，特異度較低，限制了該指標在臨床上的應用[9-10]。ZHOU等[11]的研究發現，利用酶聯免疫吸附法檢測血清CA125在區分子宮內膜癌患者與健康人群中的靈敏度/特異度僅有63.2%/69.4%，此種情況下，尋找其他更可靠的生物學標志物對子宮內膜異位癥的早期干預及預后的提高具有重要意義。

LncRNA ROR與miR-29已被報道參與了多種腫瘤的發病過程[4-5]。研究發現，LncRNA ROR可通過抑制miRNA-145介導的子宮內膜干細胞分化過程而促進子宮內膜癌的發生[12]，而miR-29則可誘導子宮內膜癌組織新生血管形成，增加癌組織血供，以促進腫瘤的生長及轉移[13]，而目前尚無關于二者應用于子宮內膜癌診斷的相關報道。本研究發現子宮內膜癌患者的血清LncRNA ROR和miR-29水平顯著高于正常女性，且在疾病早期即出現明顯增高，提示二者對子宮內膜癌具有早期診斷價值。ROC分析結果表明，血清LncRNA ROR和miR-29鑒別診斷子宮內膜癌的靈敏度與特異度均顯著高于CA125，而聯合檢測二者時，特異度顯著優于單項指標檢測的特異度。此外，血清高LncRNA ROR與miR-29水平，均是子宮內膜癌發病的獨立危險因素，該結果提示二者不僅對子宮內膜癌的早期診斷有重要意義，對該疾病的發病風險評估亦具有潛在價值。

本研究存在以下不足之處：(1)收集的病例數有限，未來仍需更多多中心大樣本研究來驗證本次研究的結果；(2)未對LncRNA ROR與miR-29參與子宮內膜癌發病的潛在機制進行深入探究，未來可設計相應的細胞及動物實驗進行深入挖掘。

本次研究首次對子宮內膜癌患者血清LncRNA ROR與miR-29的差異性表達及二者的診斷、發病風險預測價值進行探究，并發現聯合檢測二者對子宮內膜癌具有較高的早期診斷與風險預測價值。