糖化白蛋白酶法測定的初步評價及其與糖化血紅蛋白相關性研究

黃鋆　石安然　肖思聰

[摘要] 目的 應用EP10-A3文件對酶法檢測糖化白蛋白（GA）的臨床應用性能進行初步評價，并對糖尿病患者糖化血紅蛋白（HbA1c）和糖化白蛋白（GA）的一致性、相關性及陽性率進行分析，評價其臨床應用價值。方法 使用酶法測定GA濃度，采用美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）頒布的《定量臨床檢驗方法的初步評價;批準指南EP10-A3》文件中規定的方法對其總不精密度、非線性、偏差、互染率、斜率、漂移等指標進行評價。并通過測定90例糖尿病患者的HbA1c和GA濃度，對兩者相關性、一致性以及陽性率進行分析。 結果 低，中，高GA樣本濃度偏差分別為-0.61，-0.28，0.34 μmol/L。總不精密度分別為1.48%，1.37%，0.84%。斜率、互染率、非線性、漂移（t=1.380，0.097，-1.370，0.013）差異無統計學意義（P>0.05）。GA與HbA1c回歸分析方程為Y=2.805X-0.268（r2= 0.714）。GA與HbA1c一致性采用Kappa檢驗，Kappa值為0.655，說明兩者一致性較好。HbA1c檢測結果陽性率與GA檢測結果陽性率，兩者差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 糖化白蛋白試劑盒準確度、精密度良好，均在允許范圍內，線性良好，攜帶污染率低，穩定性較好，性能指標符合臨床應用要求。GA可作為糖尿病診斷的補充指標，并用于臨床糖尿病療效監測。

[關鍵詞] 糖化白蛋白;糖化血紅蛋白;方法學評價;糖尿病

[中圖分類號] R587.1;R446.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1672-4062（2019）12（b）-0011-04

Preliminary Evaluation of Glycosylated Albumin Assay and Its Correlation with Glycosylated Hemoglobin

HUANG Yun1， SHI An-ran1， XIAO Si-cong2

1.Department of Clinical Laboratory， Union Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China; 2.School of Medical Technology and Engineering， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350000 China

[Abstract] Objective To evaluate the clinical application performance of enzymatic detection of glycated albumin （GA） by EP10-A3 and to compare the consistency and correlation between glycated hemoglobin （HbA1c） and glycated albumin （GA） in diabetic patients. The positive rate was analyzed to evaluate its clinical application value. Methods The GA concentration was determined by enzymatic method， and the total imprecision， nonlinearity， and the method specified in the “Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Test Methods; Approval Guide EP10-A3” document issued by the American Committee for Clinical Laboratory Standards （CLSI）. Indicators such as deviation， mutual dyeing rate， slope， and drift were evaluated. The correlation， consistency and positive rate of the two patients were determined by measuring the concentrations of HbA1c and GA in 90 patients with diabetes. Results It showed low， medium and high GA sample concentration deviations of -0.61， -0.28， and 0.34 μmol/L， respectively. The total imprecision was 1.48%， 1.37%， and 0.84%， respectively. The differences in slope， mutual staining rate， nonlinearity， and drift（t=1.380， 0.097， -1.370，0.013） were not statistically significant （P>0.05）. The regression equation for GA and HbA1c is Y=2.805X-0.268 （r2=0.714）. The consistency of GA and HbA1c was Kappa test， and the Kappa value was 0.655， indicating that the two were consistent. There was no significant difference between the positive rate of HbA1c test and the positive rate of GA test （P>0.05）. Conclusion The glycated albumin kit has good accuracy and precision， all within the allowable range， good linearity， low carrying pollution rate， good stability， and performance indicators meet the requirements of clinical application. GA can be used as a supplementary indicator for the diagnosis of diabetes and used for clinical diabetes monitoring.

[Key words] Glycated albumin; Glycated hemoglobin; Methodological evaluation; Diabetes

隨著人們生活水平的提升，糖尿病患者的數目也在不斷增加。有報告顯示[1]，全球患糖尿病人數已經超過1.2億，而我國糖尿病發病率高達9.6%。眾所周知，糖尿病是一種內分泌代謝障礙性疾病，主要與長期血糖控制不佳有關[2]。長期的高血糖容易引發糖尿病足和視網膜病變等并發癥，因此及時調整血糖，使其保持在正常水平具有重要的意義。血糖檢測是糖尿病治療的重要風向標，能幫助醫生及時了解患者的疾病發展情況，制定合理的給藥方案從而給予更好的治療[3]。

糖化白蛋白（glycated albumin，GA）測定是以糖化血清白蛋白測定值與血清總白蛋白值（ALB）之間的比值來表示GA的濃度，可反映人體過去2～3周前的平均血糖水平。《中國血糖監測臨床應用指南》（ 2015年）已將其列為血糖控制監測的有效方法之一[4]。有文獻[5]表明，對2型糖尿病患者采用胰島素加強療法進行初始治療，治療2周后，GA的變化率約為糖化血紅蛋白（Glycated hemoglobin，HbA1c）的10倍左右。因此，GA能在血糖變化最顯著時反映血糖濃度，特別適合初診為糖尿病的患者降糖治療的療效觀察。對于血紅蛋白異常和肝功能不佳的糖尿病患者，用GA監測治療效果具有更好的價值。GA的檢測方法主要有干化學法、固體酶法、高壓液相色譜法（ HPLC）和液體酶法等，目前臨床應用最廣泛的方法為改良的液體酶法。

EP10-A3是臨床和實驗室標準委員會（CLSI）對一項新的體外診斷檢測方法、試劑盒或或儀器設備進行初步評價的方案。該方案主要是通過實驗設計和數據分析，對某項目檢測系統進行單因素短期評價，在進行完整方法學評價前用來快速鑒別該方法是否適用于臨床實踐。該法簡單便利，操作時間短暫，臨床實用性較高。

通過EP10-A3文件初步評價酶法測定GA的方法學性能，驗證其作為臨床應用性能，并分析糖尿病患者 HbA1c和 GA 的一致性、相關性，為糖尿病早期診斷和治療效果監測提供更有意義的借鑒。

1? 材料與方法

1.1? 樣品來源

1.1.1? 患者樣品? 收集2019年1—3月在該院明確診斷為糖尿病患者（診斷參照2013年WHO糖尿病診斷標準），并排除存在血紅蛋白低（<90 g/L）或白蛋白低（<30 g/L）和變異體等影響檢測結果因素的患者共90例。這90例患者中，男性47例，女性43例，男∶女=1.09∶1，年齡31～94歲，中位年齡57歲。

1.1.2? 用于方法學評估樣品? 日本積水株式會社定值質控血清（批號：805RLP 使用期限2020.02）。GA低值樣品標定值為13.4%。GA高值樣品標定值為28.5%。將上述高值樣品和低值樣品等比混合為中值樣品，GA標定值為21%。高、中、低3個濃度的樣品每種按0.1 mL分裝，放入-40℃冰箱保存。

1.2? 儀器

羅氏Modular P8000全自動生化分析儀檢測GA，伯樂Variant II Turbo糖化血紅蛋白分析儀檢測HbA1c。

1.3? 試劑

1.3.1? GA試劑? GA酵素液（批號：805RLP），ALB顯色液（批號：805RLP），試劑：日本積水株式會社。

1.3.2? HbA1c試劑? （批號：64182048），試劑：伯樂生命醫學產品有限公司

1.4? 方法

①測定方法及順序：依照EP10-A3文件的規定，每天測定10個樣品，按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序測定各GA質控品濃度，共測定5 d。其中第1個中值作為測定起始用，不在統計范圍內，后9個數據中的任何1個數據不合格，都必須放棄該批次的所有數據，重新測定。

②判斷標準：按照 CLSI EP10-A3 文件計算總不精密度以美國臨床實驗室改進修正法案（CLIA'88）分析質量要求規定的允許誤差的1/2，判斷檢測系統精密度的可接受性。以各濃度5 d檢測結果的算術平均值與其對應設定值計算偏移，以CLIA'88 分析質量要求為允許誤差，判斷檢測系統偏移的可接受性; 截距、斜率、非線性、互染率、漂移性按 CLSI EP10-A3 文件計算及判斷。

③分別檢測90例糖尿病患者血清標本的HbA1c和GA值。

1.5? 統計方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析。計算偏差、總不精密度。對斜率、互染率、非線性、攜帶污染作回歸分析，其校正回歸值做t檢驗，當t<-4.6或t>4.6時，P<0.05為差異有統計學意義。GA和HbA1c之間的相關性采用回歸分析。

2? 結果

2.1? 應用EP10-A3進行初步評價結果

2.1.1? 偏差分析? 以各濃度樣本5 d的測定結果均值與其對應設定值計算偏差，偏差均未超過設定的±5%范圍，臨床均可接受。見表1。

表1? ?GA偏差結果分析[（x±s），%]

2.1.2? 總不精密度分析? 按照EP10-A3文件提供的方法，計算總不精密度。各濃度總不精密度均未超過允許誤差，臨床均可接受。見表2。

表2? ? GA總不精密度分析結果

2.1.3? 測定結果多元回歸分析? 按EP10-A3中的方法對斜率、互染率、非線性、漂移性差異進行多元回歸計算，結果顯示斜率、互染率、非線性、漂移的差異無統計學意義（-4.60.05）。見表3。

表3? ?多元回歸分析匯總

2.2? GA和HbA1c檢測結果相關性分析

GA和HbA1c檢測結果的回歸分析方程為Y = 2.805X-0.268，相關系數（r2=0.714），見圖1。

圖1? ?GA和HbA1c相關性分析

2.3? GA和HbA1c的一致性分析

以超過GA和HbA1c參考區間的上限（ GA>16%;HbA1c>6.0%）判定為陽性，90例明確診斷為糖尿病的患者中 HbA1c陽性結果有59例（65.56%），陰性有31例（34.44%）。GA 陽性結果有59例（65.56%），陰性有31例（34.44%）。兩種方法陽性符合率57.8%，陰性符合率為26.6%，總符合率為84.4%。一致性檢驗Kappa值為0.655，提示兩種方法一致性較好。見表4。

表4? ?GA和HbA1c檢測結果比較[n（%）]

2.4? GA和HbA1c檢測結果陽性率比較

HbA1c檢測結果陽性率與GA檢測結果陽性率，兩者差異無統計學意義（P>0.05），見表5。

表5? ?GA和HbA1c檢測結果陽性率比較（例）

3? 討論

糖化血清白蛋白對于血糖監控，指導臨床診斷，評價降糖療效指導治療，對糖尿病血管并發癥的評估都有很好的臨床意義。該研究通過參照EP10-A3文件對酶法測定糖化白蛋白的臨床性能初步評估。偏差評價結果顯示低、中、高濃度的絕對偏差和總不精密度均在允許范圍之內，能達到臨床檢測的要求。并且多元回歸總結分析結果顯示斜率、互染率、非線性、漂移性的t 值均在-4.6～4.6之間，差異無統計學意義（P>0.05），說明試劑準確度好，線性能力良好，攜帶污染率低，能較好地滿足臨床常規檢測要求。使用EP10-A3文件能夠在短期內對單個因素進行較為準確的判斷，方便省時，受到外界因素影響較小，分析結果較為全面。但這僅僅只是實驗數據累積分析的開始，想要進行完整的方法學評價，還需要各個文件對單個項目的更加精確完整的分析。例如評價線性可以使用EP-6;評價干擾影響可以使用EP-7和EP-14;評價總誤差可以使用EP-21;還可以使用EP-15進行恒定和比例偏移的評價。另外，還應當著重研究如何實現糖化白蛋白的標準化。可以通過長期對大量自然人群的隨訪調查，然后進行多中心協作研究。標準操作和標準可以通過質譜技術建立[6]。

在該次研究中HbAlc與GA呈正相關（r2=0.714），說明二者有一定的關聯性，同時通過采用Kappa一致性檢驗和配對χ2檢驗，得出兩者一致性較好，陽性率差異無統計學意義（P>0.05）。糖化血紅蛋白（HbA1c）是血糖與血紅蛋白結合的產物，其含量主要取決于血糖濃度與血紅蛋白的接觸時間。由于人體內紅細胞的壽命約為120 d，因此HbA1c水平反映的是檢測前2～3個月內的平均血糖水平[7]。HbA1c優點是不受短期內血糖變化的影響，可作為長期血糖控制的重要監測指標。糖化血清白蛋白（GA）可反映人體過去2～3周前的平均血糖水平，可評估患者短期內糖代謝控制情況。糖化白蛋白對于監測血糖水平、評估糖尿病及其并發癥、評估血糖控制的療效和指導臨床診斷方面擁有較高的臨床意義。由于HbA1c水平因為反映的是前3～4個月血糖水平，無法顯示短期內血糖的波動和變化，對于血糖水平的評估存在“延遲效應”，而不能及時顯現出治療效果。對于短期住院治療的糖尿病患者，GA可能比HbA1c更具有參考價值[8-9]。另外有研究報道[10]指出GA不僅能反映平均血糖水平，更能反映餐后血糖水平。HbA1c檢測還會受變異體和溶血性貧血及腎病貧血等能縮短紅細胞壽命的疾病的影響，不能真實反映血糖控制水平[11]。此時GA測定不受這些因素的影響，應用GA來調整降糖方案會更有幫助。因此GA是一個很有意義的臨床診斷治療的補充。

GA的檢測結果同樣會受到血清白蛋白更新速度、體質指數（BMI）、ALB 代謝等因素的影響[12]。因此。臨床上可通過實際情況選擇檢測HbA1c或GA，用來排除干擾因素的影響，從而獲得正確的血糖監測結果。但是慢性肝病患者體內白蛋白合成能力降低導致白蛋白半衰期延長，又因脾機能亢進使紅細胞半衰期縮短，這些導致HbA1c較血糖水平偏低，GA水平較血糖水平偏高，所以對慢性肝病患者的血糖監控較困難，目前尚無準確反映血糖水平的標志物。

[參考文獻]

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（收稿日期：2019-09-19）