8種染色方法對組織切片中蝦肝腸胞蟲染色效果的比較

常曉晴，王 元，英 娜，李楠英，黃 倞，李新蒼，周俊芳，房文紅

(1．中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部東海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，上海 200090； 2．上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoonhepatopenaei，簡稱EHP)是一種主要侵染對蝦肝胰腺細(xì)胞并在其內(nèi)形成孢囊結(jié)構(gòu)的微孢子蟲。最初，2001年CHAYABURAKUL等[1]在研究泰國斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)生長緩慢疾病時首次檢測到EHP，但未對其進(jìn)行描述和命名，隨后，TOURTIP等[2]對其組織病理、超微結(jié)構(gòu)以及系統(tǒng)進(jìn)化等方面進(jìn)了研究，并正式命名。近幾年，國內(nèi)外許多地區(qū)如泰國[3]、越南[4]、印度[5]、中國[6-7]、馬來西亞[8]以及印度尼西亞[9]等均發(fā)現(xiàn)和報道了該寄生蟲的暴發(fā)流行。EHP的宿主除斑節(jié)對蝦外，已確認(rèn)的還有藍(lán)對蝦(Penaeusstylirostris)以及凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)。多數(shù)研究者認(rèn)為EHP與凡納濱對蝦生長遲緩有關(guān)[10-11]，且對全球凡納濱對蝦產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展已造成嚴(yán)重威脅。

病理診斷是目前臨床醫(yī)學(xué)中最可靠的一種定性診斷，具有其它檢查無法替代的權(quán)威性，被譽為疾病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”[12]，而組織石蠟切片是病理診斷中最常用的一種手段。組織染色是利用各種特定染料與組織細(xì)胞中不同成分結(jié)合反應(yīng)而使其呈現(xiàn)出不同顏色，是組織切片制作中一個至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，染色質(zhì)量的好壞將直接影響最終的觀察效果，是檢出病原以及準(zhǔn)確反映病理變化的關(guān)鍵。由于蝦肝腸胞蟲是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種對蝦病原，有關(guān)該寄生蟲病的特殊染色方法的研究較少，本研究比較了蘇木精-伊紅(HE)染色法、Masson染色法、愛顯藍(lán)-雪夫(AB-PAS)染色法、甲苯胺藍(lán)(TB)染色法、偉郝夫范吉森(EVG)染色法、勞克堅牢藍(lán)(LFB)染色法、天狼猩紅(Sirius red)染色法和普魯士藍(lán)(PB)染色法對凡納濱對蝦肝胰腺中蝦肝腸胞蟲的染色效果，以便篩選出穩(wěn)定、準(zhǔn)確、清晰的染色方法，為蝦肝腸胞蟲病的診斷及其病理研究提供更有效的檢測手段。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與處理

樣品為2016年上海郊區(qū)養(yǎng)殖場采集的疑似患病凡納濱對蝦活體，取其肝胰腺組織投入Davidson’s AFA固定液中，固定24 h后換液一次。固定的組織塊經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明和石蠟包埋后進(jìn)行連續(xù)切片，厚度約5 μm。切片經(jīng)二甲苯脫蠟再經(jīng)梯度乙醇脫水后，采用不同染色方法染色，最后常規(guī)脫水、透明、封片。

1.2 染色方法

1.2.1 蘇木精-伊紅(HE)染色法

參考BELL[13]的方法，稍作改進(jìn)：切片入Harris蘇木素染5 min，流水沖洗5 min；含1%鹽酸酒精(99份無水乙醇+1份濃鹽酸)分化數(shù)秒，流水沖洗；0.6%氨水返藍(lán)，流水沖洗。然后，切片入伊紅染液中染色3 min。

1.2.2 Masson染色法

參考GOLDNER[14]的方法，稍作改進(jìn)：切片用Weigert氏鐵蘇木素液染5 min，流水沖洗；含1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，流水沖洗數(shù)分鐘返藍(lán)，麗春紅酸性品紅液染8 min，蒸餾水快速漂洗；磷鉬酸水溶液處理約4 min，苯胺藍(lán)液復(fù)染5 min，1%冰醋酸分化1 min。

1.2.3 愛顯藍(lán)-雪夫(AB-PAS)染色法

參考黃云梅等[15]的方法，稍作改進(jìn)：切片入阿利新藍(lán)染液浸染10 min，稍水洗，0.5%高碘酸水溶液氧化10 min，流水沖洗數(shù)分鐘后再用蒸餾水漂洗兩次，再用雪夫試劑暗處浸染20 min，流水沖洗10 min。

1.2.4 甲苯胺藍(lán)(TB)染色法

參考吳敏等[16]的方法，切片用甲苯胺藍(lán)染液染色10 min，95%乙醇分化1 min，風(fēng)干后封片。

1.2.5 偉郝夫范吉森(EVG)染色法

參考胡曉磊等[17]的方法，Verhoeff’s染液染20 min，至顏色呈深黑色，流水沖洗，2%三氯化鐵溶液分化10～20 s，流水沖洗，5%硫代硫酸鈉溶液處理1 min清除多余碘，流水沖洗后再蒸餾水漂洗2次；Van Gieson’s液復(fù)染5 min，無水乙醇漂洗1 min。

1.2.6 勞克堅牢藍(lán)(LFB)染色法

參考張麗等[18]的方法，稍作改進(jìn)，切片置于0.1% LFB染液60 ℃ 孵育過夜，流水沖洗；浸入70%乙醇中30 min；浸入0.05% 碳酸鋰中分色約1 min，流水沖洗；0.1%伊紅復(fù)染1 min，流水沖洗5 min。

1.2.7 普魯士藍(lán)(PB)染色

參考董鴻瑞等[19]的方法，切片入2%亞鐵氫化鉀和2%鹽酸混合染液(1∶1)中染色20 min；流水沖洗2 min，蒸餾水洗，0.1%核固紅染液復(fù)染10 min，蒸餾水洗5 min。

1.2.8 天狼猩紅染色

參考沈薔等[20]的方法，稍作改進(jìn)，切片入飽和苦味酸天狼猩紅染色液內(nèi)染色8 min，無水乙醇漂洗約1 min，風(fēng)干后封片。

1.3 顯微觀察及數(shù)據(jù)分析

制備的切片用Olympus BX51多功能顯微鏡在1 000倍下觀察，Image-Pro Plus 5.1軟件拍照，圖像采集分析。

EHP的檢出率是將每種染色方法染色后的切片均在顯微鏡400倍下觀察，觀察記錄每個視野下所有肝小管，和被感染肝小管的數(shù)量。定義：檢出率=單個視野鏡檢EHP感染肝小管數(shù)量/單個視野鏡檢的肝小管數(shù)量，視野內(nèi)含肝小管結(jié)構(gòu)的一半及以上視為一個肝小管。采用兩種方法計算檢出率：方法一：同位置法，8張連續(xù)切片分別用8種染色方法染色后在400倍鏡下，觀察4個相同位置，進(jìn)行統(tǒng)計，計算檢出率；方法二： 隨機法，8種染色方法對應(yīng)的連續(xù)切片上，隨機取4個視野，統(tǒng)計檢出率。因HE染色為常規(guī)染色方法，本次統(tǒng)計學(xué)分析使用HE染色檢出率的平均值為檢驗值，其它染色組樣本與HE染色樣本進(jìn)行單樣本t檢驗，使用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 HE染色效果

凡納濱對蝦肝胰腺組織中肝小管的基膜呈粉紅色，管壁細(xì)胞層中各類細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)紫色，細(xì)胞核核膜及核仁邊緣光滑，邊界清晰，胞漿呈現(xiàn)深淺不同的粉紅色，細(xì)胞整體的形態(tài)結(jié)構(gòu)染色清晰。蝦肝腸胞蟲孢囊整體形狀輪廓較清晰，其內(nèi)大量孢子在宿主細(xì)胞中呈現(xiàn)出顆粒感，孢子被染成粉紅色，與細(xì)胞漿背景顏色相比，染色稍深，但不易區(qū)分，單個孢子形狀不清晰，似卵圓形(圖版I-1)。

2.2 Masson染色效果

宿主肝小管的基膜呈藍(lán)靛色，細(xì)胞核著色深，尤其是核仁呈深紅色，核膜與胞漿邊界清晰，細(xì)胞漿呈現(xiàn)深淺不同的藍(lán)灰色。蝦肝腸胞蟲孢囊整體形狀輪廓清晰，其內(nèi)大量孢子在宿主細(xì)胞中呈現(xiàn)出強烈的顆粒感，孢子被染成妃紅色或品紅色，與宿主細(xì)胞核相比染色稍淺，但與細(xì)胞漿顏色差異明顯，背景清晰，易辨別，且單個孢子的形狀較清晰，為橢圓形，更接近濕涂片中新鮮孢子的形狀(圖版I-2)。

2.3 AB-PAS染色效果

宿主肝小管基膜呈現(xiàn)絳紫色，各細(xì)胞邊界模糊，不易區(qū)分，且細(xì)胞核與細(xì)胞漿均呈現(xiàn)淡醬紫色，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不清晰。蝦肝腸胞蟲孢囊整體形狀輪廓不清晰，其內(nèi)大量的孢子雖表現(xiàn)出顆粒感，但孢子形態(tài)模糊，雪夫試劑將孢子染成淡紅色，與背景顏色對比差異不明顯，不易辨別(圖版I-3)。

2.4 TB染色效果

宿主肝小管基膜、細(xì)胞漿均呈淺藍(lán)色，細(xì)胞核形態(tài)不清晰，核仁染色深，核膜與細(xì)胞漿邊界模糊。強嗜堿性細(xì)胞整個被染成深藍(lán)色。蝦肝腸胞蟲孢囊整體形狀輪廓清晰，其內(nèi)大量孢子呈現(xiàn)較強的顆粒感，多數(shù)孢子被染成紫紅色或深藍(lán)色，形狀較清晰，與背景顏色對比差異較明顯，少數(shù)孢子染色后與背景顏色差異不明顯，不易分辨(圖版I-4)。

2.5 EVG染色效果

宿主肝小管基膜和細(xì)胞漿均呈現(xiàn)灰黃色，各細(xì)胞細(xì)胞核邊界清晰，核仁呈現(xiàn)黃黑色。強嗜堿性細(xì)胞整個呈現(xiàn)深黑灰色。蝦肝腸胞蟲孢囊整體形狀輪廓較清晰，孢子呈現(xiàn)藍(lán)灰色，與背景顏色對比差異不明顯，形態(tài)模糊，顆粒感差，不易辨別(圖版I-5)。

2.6 LFB染色效果

宿主肝小管基膜、各細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核均呈青藍(lán)色，顏色一致，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不能辨別。蝦肝腸孢蟲包囊輪廓無法辨識，部分孢子呈藍(lán)色，部分孢子呈不透明的黑色，與背景顏色相比差異極明顯，分散在細(xì)胞漿中孢子表現(xiàn)出強烈的顆粒感，但整個切片中，孢子數(shù)量相對較少(圖版I-6)。

2.7 PB染色效果

宿主肝小管基膜、各細(xì)胞的細(xì)胞漿均呈淡粉紅色，各細(xì)胞形態(tài)模糊，但細(xì)胞核形狀清晰，核仁呈粉紅色。蝦肝腸胞蟲孢囊輪廓模糊，孢子形態(tài)模糊，無顆粒感，與背景顏色無差異，難辨別(圖版I-7)。

2.8 天狼猩紅染色效果

宿主肝小管基膜呈淡紅色，各細(xì)胞均呈黃色，且形態(tài)結(jié)構(gòu)模糊。蝦肝腸胞蟲孢囊輪廓模糊，孢子形態(tài)模糊，難辨別(圖版I-8)。

2.9 檢出率

2.9.1 同位置視野檢出率結(jié)果

2.9.2 隨機視野檢出率結(jié)果

對隨機位置法檢出率進(jìn)行t檢驗的結(jié)果如表2所示。

上述兩種不同統(tǒng)計方法得出的EHP孢子檢出率，均以Masson染色最高，LFB染色次之。

3 討論

特殊染色法是病理學(xué)研究常用的方法之一，也是臨床病理診斷中重要的輔助技術(shù)之一。特殊染色技術(shù)具有特異、簡單、快捷、廉價等顯著優(yōu)點，并且這些技術(shù)也在發(fā)展和完善，至今還沒有出現(xiàn)更好的能完全替代它的直接顯示細(xì)胞內(nèi)外特殊化學(xué)物質(zhì)的簡便易行的方法和技術(shù)。但其在組織病理分析時耗時較長，對實驗人員的專業(yè)經(jīng)驗要求較高，并且在水產(chǎn)生物輕微感染微孢子蟲時易診斷失敗。微孢子蟲病的石蠟切片染色是其病原檢測的基礎(chǔ)，但是不同的染色技術(shù)在其形態(tài)學(xué)觀察中的作用卻不甚明確，因此本實驗對比了8種染色技術(shù)對蝦肝腸胞蟲的染色效果。

表1 8種染色方法對蝦肝腸胞蟲孢子檢出率結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析(同位置視野)Tab.1 Statistical analysis of the detection rate of 8 staining methods for EHP (the same scan filed)

注：*表示P<0.05

Note：*meansP<0.05

表2 8種染色方法對蝦肝腸胞蟲孢子檢出率結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析(隨機視野)Tab.2 Statistical analysis of the detection rate of 8 staining methods for EHP (random scan filed)

注：*表示P<0.05

Note：*meansP<0.05

對蝦肝腸胞蟲是近年來的新發(fā)現(xiàn)病原之一，有關(guān)該寄生蟲病的特殊染色方法的研究較少，目前國內(nèi)外多數(shù)研究者采用常規(guī)的蘇木素-伊紅(HE)染色法。HE染色技術(shù)是病理技術(shù)中最經(jīng)典的染色方法，是由WALDEYER于1863年首先提出來的，一直沿用至今。RAJENDRAN等[5]利用 HE染色法分別對凡納濱對蝦肝胰腺組織中的孢子和純化后的孢子進(jìn)行了染色，結(jié)果表明，純化后的孢子染色效果明顯優(yōu)于組織中的孢子染色效果，這說明肝胰腺組織對HE染色法檢測EHP產(chǎn)生干擾。SALACHAN等[3]對比了HE染色和原位雜交技術(shù)對肝胰腺組織中EHP的檢測效果，發(fā)現(xiàn)在低倍鏡下，HE染色切片中EHP不能被識別出，而原位雜交切片中EHP則易被檢出，故認(rèn)為后者比HE染色更可靠，但此法耗時長、成本高。本研究也發(fā)現(xiàn)，雖然HE染色對肝胰腺組織細(xì)胞的染色效果不錯，但對孢子著色較淺，與背景顏色接近，在低倍鏡下孢子的辨識度低，特別是在孢子數(shù)量較少、孢囊較小的時候，更不易與肝胰腺組織區(qū)分，不仔細(xì)觀察而易造成漏檢，影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，綜合分析效果并非最優(yōu)。

Masson染色方法的原理是利用鐵蘇木素著色細(xì)胞核，利用酸性品紅和苯胺藍(lán)著色胞漿，從而使組織不同成分顯示不同顏色。該法在診斷慢性炎癥、纖維性腫瘤以及肝、腎、心臟等機體纖維化病變中具有重要應(yīng)用[21]。通常情況下，組織多采用甲醛固定，經(jīng)Masson染色后胞漿為紅色，細(xì)胞核為藍(lán)色(苯胺藍(lán)復(fù)染)或綠色(亮綠復(fù)染)。而本研究中，對蝦肝胰腺組織為Davidson’s AFA液固定，經(jīng)染色后，胞漿呈藍(lán)灰色，細(xì)胞核核仁呈深紅色，這種明顯的差異很可能與固定試劑的不同有關(guān)。黃利等[22]研究了不同固定液對Masson染色結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)Bouin氏液固定的組織細(xì)胞核、胞漿染成紫紅色，而10%甲醛固定的組織細(xì)胞核染成綠色，胞質(zhì)染成紫紅色。這表明不同固定液對 Masson 染色結(jié)果影響較大。本文中，宿主細(xì)胞核、胞漿、基膜均呈不同顏色，結(jié)構(gòu)清晰易辨別，說明對宿主的組織細(xì)胞染色效果Masson染色法與HE染色法兩者差別不明顯；而經(jīng)Masson染色后的孢子呈鮮艷紅色，與背景對比鮮明，雖然孢子顏色和與宿主細(xì)胞核核仁顏色接近，但前者形態(tài)呈小顆粒橢圓形，且數(shù)量多，似石榴籽，后者呈圓形，單個體積大，周圍空白，外圍有核膜包圍，二者形態(tài)結(jié)構(gòu)差異大，容易區(qū)分。Masson染色結(jié)果顯示組織結(jié)構(gòu)清晰，對比鮮明，顆粒清晰可見，此方法既能檢出肝胰腺組織中的大量孢子，又能將宿主的各細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰顯示，彌補了HE染色的不足，說明Masson染色法對蝦肝腸胞蟲的染色效果優(yōu)于HE染色法。本文系首次將Masson染色應(yīng)用于微孢子蟲病研究。

AB-PAS染色是綜合利用阿利新藍(lán)染色和常規(guī)PAS染色兩者的優(yōu)點，可檢測組織中的糖原、中性粘多糖、酸性粘多糖以及真菌[23]等物質(zhì)成分。組織中的糖類成分與染色劑中的過碘酸發(fā)生作用，產(chǎn)生出游離的醛基再與無色堿性品紅反應(yīng)而顯示出紫紅色；而組織中的酸性粘液物質(zhì)與水溶性的堿性染料AB反應(yīng)而顯示為藍(lán)色，從而使紅色的PAS反應(yīng)物和藍(lán)色的AB反應(yīng)物同時呈現(xiàn)在一張切片中。肝胰腺是對蝦機體代謝重要器官，是糖原儲存的主要場所之一，因而PAS染色反應(yīng)可將其內(nèi)糖原物質(zhì)染成紅色，而EHP屬于真菌類生物，其孢子的孢壁中含有與真菌細(xì)胞壁類似的多糖類物質(zhì)，經(jīng)染色也同樣呈現(xiàn)紫紅色，因而背景與病原顏色差異小，不利于觀察。

甲苯胺藍(lán)是一種具有異染性的堿性染料，含有發(fā)色團和助色團，一般組織細(xì)胞中的細(xì)胞核等酸性成分被染成為與染料本色相同的藍(lán)色，而特殊的細(xì)胞，如肥大細(xì)胞，該細(xì)胞漿內(nèi)充滿許多粗大的嗜堿性顆粒，這種顆粒因含有肝素、組胺等具異染性的成分而被染成與染料本色相異的紫紅色[16]。本文中蝦肝腸胞蟲的部分孢子也被染成紫紅色，這說明孢子中也含有異染性的成分，在400倍鏡下紫紅色的孢子與背景藍(lán)色對比并不明顯。而TOURTIP等[2]發(fā)現(xiàn)EHP孢子經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后顏色為均一的深藍(lán)色，此現(xiàn)象與本文結(jié)果不一致，這可能與固定液不同有關(guān)，后者使用的是戊二醛固定液，可能戊二醛與孢子發(fā)生作用，致使孢子中的異染性物質(zhì)發(fā)生改變。

EVG染色法也是一種用于顯示彈力纖維和膠原纖維的病理診斷方法，經(jīng)EVG染色后，彈力纖維和細(xì)胞核呈黑色，膠原纖維呈紅色，從而區(qū)分及判斷這兩類纖維的病變情況[24]。本實驗中，該染色方法雖然能顯示細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)，但對EHP孢子染色效果不好，容易造成漏檢。

LFB染色是一種常用的顯示髓鞘的染色方法[25]，本實驗中，肝胰腺組織被染成淡藍(lán)色，而EHP孢子變成黑色，這可能是其與勞克堅牢藍(lán)結(jié)合不緊密造成的，在乙醇和碳酸鋰分化過程中，孢子褪至無色，以致其與背景色差界限明顯。雖然散落的孢子在光鏡下極易識別出，但是，EHP孢囊結(jié)構(gòu)在染色過程中被破壞，孢子似部分丟失，形態(tài)也不均一，而且背景中無法區(qū)分組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

天狼腥紅作為一種強酸性染料，普遍應(yīng)用于人或動物肝、腎等臟器纖維化病變的染色[26]，通常需要與偏光鏡結(jié)合使用才能發(fā)揮出其作用，本文分別于普通光學(xué)顯微鏡下和偏振光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)EHP孢子在兩者視野中均與背景無區(qū)別。

普魯士藍(lán)染色多用于檢測人類肝、腎臟的鐵血黃素沉積，鐵血黃素顆粒與染液發(fā)生反應(yīng)而呈現(xiàn)藍(lán)色，而其它的細(xì)胞成分則被染成淺紅色[19,27]，本文中對蝦肝胰腺組織及EHP均被染成淡粉紅色，未發(fā)現(xiàn)藍(lán)色成分。

與前述6種染色方法相比，普魯士藍(lán)和天狼腥紅染色后，在脫色過程中，肝胰腺組織與孢子同步脫色，最終兩者顏色反差不大，孢子的形態(tài)不再可辨。

通過鏡檢發(fā)現(xiàn)，孢子與背景顏色差異效果在低倍鏡下(40×物鏡)比高倍鏡(100×物鏡，圖版I)下差，而400倍又是常用的研究組織病理的放大倍數(shù)，并且單個視野下大約包含15個肝小管，適于數(shù)據(jù)采集。因此我們選擇400倍作為檢出率的評價標(biāo)準(zhǔn)，在此放大倍數(shù)下如果孢子與背景顏色對比明顯，易于識別，則孢子的檢出率高，不同染色方法使孢子在400倍鏡下的可見性也側(cè)面印證了該染色方法的優(yōu)劣，可進(jìn)一步證實染色方法的可靠性。通過連續(xù)切片發(fā)現(xiàn)，宿主細(xì)胞內(nèi)的孢子形成的團塊形狀變化較大，大小一般約為5～10 μm, 而切片厚度為5 μm, 一個孢子團在經(jīng)歷1～2次連續(xù)切片后往往在第二或第三個連續(xù)切片上消失了，導(dǎo)致同一個肝小管在連續(xù)切片上孢子的檢出率并不相同，為避免這種情況造成的統(tǒng)計誤差，我們選擇隨機方法對檢出率再次統(tǒng)計。

統(tǒng)計學(xué)結(jié)果中P<0.05時表示該染色方法與HE染色法具有明顯差異，除了AB-PAS染色法之外的其它6種染色方法都與HE染色法有顯著性差異。其它染色法與HE染色法進(jìn)行單樣本t檢驗的t值為正值時表示孢子染色檢出率高于常規(guī)HE染色法，當(dāng)t值為負(fù)值時則相反。結(jié)果表明，Masson染色的孢子檢出率最高，在蝦肝腸胞蟲組織切片檢測中具有明顯優(yōu)勢；LFB在檢出率上雖優(yōu)于HE染色，但該染色方法可能存在破壞孢囊結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象，因此不適用于病理變化分析；其它4種染色方法的EHP檢出率均低于HE染色法，其中PB染色和天狼腥紅染色的t值為絕對值最大的負(fù)值，表示兩者在蝦肝腸胞蟲染色上效果最差。

綜上所述，所列8種染色方法對蝦肝腸胞蟲的染色各有優(yōu)缺點，其中Masson染色法效果最優(yōu)，因此，Masson染色可用于微孢子蟲臨床病理診斷和病理組織學(xué)研究。

圖版I 不同染色方法下的肝胰腺組織及蝦肝腸胞蟲孢子
Fig 1 Hepatopancreas tissue and spores of EHP under different staining methods
注：1，HE染色；2，Masson染色；3，AB-PAS 染色；4，TB染色；5，EVG染色；6，LFB染色；7，PB染色；8，天狼腥紅染色。B：基膜，N：細(xì)胞核，S：孢子。所有標(biāo)尺=10 μm。
Note：1, HE staining; 2, Masson staining; 3, AB-PAS staining; 4, TB staining; 5, EVG staining; 6, LFB staining; 7, PB staining; 8, Sirius red staining; B: Basilar membrane; N: Nucleus; S: Spores. All scale bars =10 μm.