翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌體外抑菌活性及小鼠感染模型的防治效果研究

高 艷，郝寶成，吳金措姆，格桑卓嘎，拉巴次旦，班 旦，四郎玉珍，邢小勇，梁 云，楊志偉，胡永浩* ，梁劍平*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院甘肅蘭州730070;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州730050;3.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩850009;4.蘭州市肺科醫(yī)院，甘肅蘭州730046)

牛出血性敗血癥，簡(jiǎn)稱“牛出敗”，是由多殺性巴氏桿菌引起的牛急性熱性敗血性傳染病［1］，該病原是條件致病菌，機(jī)體抵抗力降低時(shí)病菌即可侵入體內(nèi)大量繁殖［2］，除內(nèi)源性感染發(fā)病外，也經(jīng)呼吸道，消化道以及損傷皮膚和粘膜感染。易感動(dòng)物為牛［3］，豬［4］等動(dòng)物，發(fā)病死亡率高達(dá) 80%以上，痊愈牛雖可產(chǎn)生免疫力，但其生產(chǎn)性能出現(xiàn)一定幅度下降［5］。西藏牧區(qū)內(nèi)，牛出敗常地方流行或零星散發(fā)，根據(jù)臨診癥狀，分為肺炎型、浮腫型和敗血型［6］，此病潛伏期為 2～5 d，多見(jiàn)犢牛［7］，發(fā)病牛多呈急性經(jīng)過(guò)，死亡率高達(dá)40%～50%［8］，如芒康縣，林芝地區(qū)［9－10］等。近年來(lái)，西藏、青海［11］等主要牧區(qū)發(fā)病呈現(xiàn)上升態(tài)勢(shì)，不僅帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，且對(duì)草場(chǎng)和水源造成二次污染。

近年來(lái)，抗生素濫用導(dǎo)致臨床分離到的牛源多殺性巴氏桿菌耐藥菌株不斷增多，臨床抗感染治療效果越來(lái)越差，新疫苗研制開(kāi)發(fā)周期較長(zhǎng)，這些因素嚴(yán)重影響了對(duì)牛出血性敗血癥的臨床預(yù)防治療。有研究表明中藥或天然植物提取物可發(fā)揮對(duì)病原菌直接殺滅作用而不產(chǎn)生耐藥性或提高其對(duì)抗生素的敏感性［12－15］，如中藥“連黃”可降低巴氏桿菌的耐藥性［16］。利用中藥或天然植物提取物用于臨床疾病防治已逐漸成為研究熱點(diǎn)。藏藥因其生長(zhǎng)環(huán)境得天獨(dú)厚，藥用成分含量高，藥性純正副作用低，臨床治療效果較好，已得到很多研究者的認(rèn)可［17］。試驗(yàn)利用該復(fù)方對(duì)引起牛出敗的多殺性巴氏桿菌進(jìn)行體外抑菌活性研究及體內(nèi)防治實(shí)驗(yàn)，以期為臨床治療提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材與菌種 鐵棒錘、訶子、藏木香、安息香、翼首草、兔耳草、草果、紅景天，均購(gòu)自西藏亞郎藏藥材銷售有限公司。

多殺性巴氏桿菌(編號(hào):CVCC1659)，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。

1.2 培養(yǎng)基 MH瓊脂培養(yǎng)基(Mueller－Hinton Agar，MHA)，MH 肉湯培養(yǎng)基 (Mueller－Hinton borth，MHB)均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;LS4509增菌培養(yǎng)基，批號(hào)ZBAP－170716D，購(gòu)自廣州市迪景微生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明(KM)小鼠共計(jì)240只，雌雄各半，體重(18±2)g，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，批號(hào)為SCXK(甘)2015－0001，連續(xù)飼喂 7d，自由采食，飲水，觀察小鼠適應(yīng)環(huán)境情況。

1.4 儀器和試劑 生物安全柜(HFsafe－1500，上海力申科學(xué)儀器有限公司);Agilent 1290超高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);恒溫培養(yǎng)振蕩器(HNYC－202T，天津歐諾儀器股份有限公司;VITEK 2 COMPACT儀器(梅里埃生物公司);沃特浦制水機(jī)(四川沃特爾水處理有限公司);CO2培養(yǎng)箱(TABAI ESPEC CORD，Japan);革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡(產(chǎn)品批號(hào)2410112103，梅里埃診斷產(chǎn)品(上海)有限公司);注射用硫酸鏈霉素(產(chǎn)品批號(hào):170103，合肥強(qiáng)力動(dòng)物藥品有限責(zé)任公司);注射用青霉素鈉(產(chǎn)品批號(hào):16050905－1，哈藥集團(tuán));紅景天苷對(duì)照品(購(gòu)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以 98.8%計(jì)，批號(hào)為 110818－201708);甲醇(色譜純)。

2 方法

2.1 翼草景香水煎液的制備 準(zhǔn)確稱取各組分藥材，加10倍體積超純水水浸泡2 h，大火煮沸后連續(xù)煎煮2 h，四層紗布過(guò)濾，收集濾液，藥渣中再加入8倍體積超純水，大火煮沸后連續(xù)煎煮2 h，加四層紗布過(guò)濾，合并兩次濾液，烘干備用。

取9支10 mL無(wú)菌離心管，用二倍稀釋法將藥液分別稀釋為生藥濃度為 500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.8，3.91，1.95 mg/mL，標(biāo)記為 2－1 ～ 2－9，4℃保存，以備牛津杯法中使用。

2.2 HPLC測(cè)定翼草景香中紅景天苷方法

2.2.1 色譜條件 kromasil－sb－c18 色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇:水=15 ∶85，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對(duì)照品，溶于50%甲醇，配制成濃度為0.5615 g/L的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 稱取復(fù)方提取物4.00098 g，置具塞錐形瓶中，加入10 mL甲醇，超聲處理30 min，離心取上清，重復(fù)一次，合并兩次上清于25 mL容量瓶，甲醇定容至刻度，再將其轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶，用水定容至刻度，經(jīng) 0.22μm濾膜過(guò)濾后備用。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 將紅景天苷對(duì)照品分別稀釋為0.56150000、0.28075000、0.14037500、0.07018750、0.03509375 g/L的工作標(biāo)準(zhǔn)液，經(jīng) 0.22 μm 濾膜過(guò)濾后待進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，求其回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.14037500 g/L的工作標(biāo)準(zhǔn)液重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積的RSD。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取一供試品溶液分別于 0，2，4，8，12，24 h 進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積的 RSD，考察樣品的穩(wěn)定性。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品六份，按2.2.3制備供試液，按色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算樣品含量，峰面積RSD值。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知濃度的樣品1 mL，分別在其中加入不同體積的工作標(biāo)準(zhǔn)液(濃度為0.56150000 g/L)1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 mL，按色譜條件計(jì)算供試樣液回收率及RSD值。

2.3 菌懸液的計(jì)數(shù)和制備 將原菌液進(jìn)行7次10倍稀釋，吸取100μL稀釋液于MHA平皿涂布均勻，重復(fù)3次，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h，對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，求平均值，將菌液稀釋為1×106CFU/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.4 牛津杯法測(cè)定翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌抑菌作用 按向雙云等［18］做牛津杯的方法進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)照組為無(wú)菌水，每個(gè)藥液濃度重復(fù)3次，4℃冰箱放置2h，37℃恒溫培養(yǎng)18 h，測(cè)量抑菌圈直徑，取平均值。

2.5 翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌的MIC值根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute)制定的微生物臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，取12支試管，依次標(biāo)記為1～12，按向雙云等［18］利用試管2倍稀釋法測(cè)定MIC值，試管1～10生藥濃度依次為 250，125，62.5，31.25，15.63，7.8，3.91，1.95，0.98，0.49 mg/mL。試管 11 為陰性對(duì)照，12為空白對(duì)照，37℃搖床培養(yǎng)18 h，將培養(yǎng)物接種于MHA培養(yǎng)基，平板標(biāo)記為2－1～2－11，37℃恒溫培養(yǎng)18 h，并設(shè)3個(gè)重復(fù)平行組。

2.6 小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌模型的建立將SPF級(jí)昆明小鼠132只，隨機(jī)分11組，A～K組每組12只，雌雄各半。將原菌液10倍稀釋為108～102CFU/mL，A－G組依次腹腔注射菌液濃度為1×108～1×102CFU/mL 100 μL，H 組腹腔注射濃度 1×102CFU/mL菌液50μL，連續(xù)觀察3 d。并將菌液濃度為1×102CFU/mL 50μL進(jìn)行3次重復(fù)，統(tǒng)計(jì)小鼠死亡率。

試驗(yàn)結(jié)束后，將存活小鼠處死并解剖，觀察病理變化，并取一部分小鼠肺臟組織做細(xì)菌涂片染色，鏡檢。同時(shí)將病料接種于MHA培養(yǎng)基中，劃線挑取單個(gè)菌落，將其配制為0.50－0.63麥?zhǔn)蠞舛鹊木鷳乙?，利用全自?dòng)微生物鑒定及藥敏系統(tǒng)(VTEK 2 COMPACT)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

2.7 翼草景香水煎液對(duì)小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌防治作用 將SPF級(jí)昆明小鼠108只，雌雄各半，隨機(jī)分為9組，分別為預(yù)防組1～3、治療組1～3、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組。預(yù)防組1～3分別連續(xù) 5 d 灌服 0.1、0.3、0.5 mL 生藥濃度為125 g/L藏藥復(fù)方水煎液，在第5 d給藥后1 h，每只小鼠腹腔注射50μL多殺性巴氏桿菌菌液;治療組每只小鼠腹腔注射50μL多殺性巴氏桿菌菌液，感染 1 h 后，分別灌服 0.1、0.3、0.5 mL 生藥濃度為125 g/L藏藥復(fù)方水煎液1次;陽(yáng)性對(duì)照組感染多殺性巴氏桿菌1 h后按每千克體重肌肉注射2萬(wàn)單位青鏈霉素混合藥液治療1次;陰性對(duì)照組在感染細(xì)菌1 h后，灌服0.5 mL無(wú)菌水1次;空白組灌服0.5 mL無(wú)菌水1次，正常采食，飲水。將各試驗(yàn)組小鼠飼喂于相同環(huán)境中，觀察統(tǒng)計(jì)3 d內(nèi)小鼠精神狀況及死亡情況。

3 結(jié)果與分析

3.1 HPLC法測(cè)定翼草景香紅景天苷含量結(jié)果

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 按色譜條件進(jìn)樣求出其回歸方程為 y=3281.6x+3.965，r2=0.9999，紅景天苷進(jìn)樣量在 0.03509375～0.56150000 g/L 之間峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系，見(jiàn)圖1。

圖1 紅景天苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 1 The standard curve of salidroside

3.1.2 精密度試驗(yàn) 取濃度為 0.14037500 g/L的工作標(biāo)準(zhǔn)液重復(fù)進(jìn)樣 6次，其平均峰面積為927.1369833，RSD=0.17%，表明儀器的精密度良好。

3.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于配制后 0，2，4，8，12，24 h 進(jìn)行測(cè)定，供試品溶液 RSD值在0～8 h內(nèi)為1.82%，0～24 h內(nèi)為13.30%，故樣品在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，這時(shí)其峰面積為730.49461，供試品濃度為0.2214 g/L，則翼草景香水煎液中紅景天苷含量為 2019.78 mg。

3.1.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品六份，按色譜條件進(jìn)樣，其平均峰面積為 732.8506267，RSD=2.65%，表明樣品重復(fù)性良好。

3.1.5 加樣回收率試驗(yàn) 由表1可知，紅景天苷的平均回收率為90.99%，RSD為4.35%。

3.1.6 復(fù)方濃度對(duì)應(yīng)關(guān)系 結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery rate test

表2 復(fù)方生藥濃度與以紅景天苷標(biāo)定復(fù)方濃度關(guān)系Tab 2 The relationship between the concentration of compound crude drug and Salidroside

3.2 牛津杯法測(cè)定翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌抑菌作用 翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌抑菌圈大小隨生藥濃度變化見(jiàn)圖2。當(dāng)翼草景香水煎液濃度為0.49263 g/L時(shí)，對(duì)多殺性巴氏桿菌的抑菌圈平均直徑為28.5 mm，當(dāng)翼草景香水煎液濃度大于等于0.00385 g/L時(shí)對(duì)多殺性巴氏桿菌有抑菌效果。

圖2 抑菌圈直徑大小隨藥物濃度的變化Fig 2 The diameter of bacteriostatic circle varies with the drug concentration

3.3 翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌的MIC值測(cè)定 結(jié)合圖2、表2及表3，翼草景香水煎液濃度大于0.00385 g/L時(shí)，培養(yǎng)皿中無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，小于0.00385 g/L時(shí)培養(yǎng)皿中均有細(xì)菌生長(zhǎng)。因此，翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌的MIC值為0.00385 g/L。且由表3可看出，其最小殺菌濃度也是 0.00385 g/L。

表3 不同藥物濃度下的菌落生長(zhǎng)數(shù)目Tab 3 The number of colonies at different drug concentrations

3.4 小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌模型的建立感染多殺性巴氏桿菌后，小鼠出現(xiàn)精神沉郁，被毛逆立，食欲下降。感染試驗(yàn)結(jié)束后各組試驗(yàn)小鼠死亡統(tǒng)計(jì)情況如表4。小鼠剖檢可見(jiàn)肺臟有明顯點(diǎn)狀淤血、壞死，心臟血管明顯充血，肝臟上有散在的白色壞死點(diǎn)，腸道有鼓氣現(xiàn)象，取肺部組織做細(xì)菌涂片，革蘭氏染色菌體為紫紅色(圖3)，初步鑒定為革蘭氏陰性菌;利用全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏系統(tǒng)(VTEK 2 COMPACT)進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，分離鑒定獲得細(xì)菌為多殺性巴氏桿菌的可信性為97%。并將菌液濃度為1×102CFU/mL 50μL注射感染小鼠，經(jīng)3次重復(fù)平行試驗(yàn)，SPF級(jí)昆明(KM)小鼠腹腔注射死亡率均為75%，表明致死率為75%的小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌模型的建立成功。

表4 小鼠感染不同濃度菌液的死亡率Tab 4 Mortality in mice infected with different concentrations of bacteria

3.5 翼草景香水煎液對(duì)小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌防治作用 預(yù)防組不同劑量小鼠死亡率為50%，41.7%，81.8%，治療組小鼠死亡率為 66.7%，50%，75%，陰性對(duì)照組小鼠死亡率為75%，陽(yáng)性和空白對(duì)照組死亡率為0。如圖4所示，該翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌有一定防治作用，當(dāng)給予每只小鼠含紅景天苷0.0369mg的復(fù)方時(shí)，具有顯著的預(yù)防作用，能明顯降低死亡率33%。

4 討論與結(jié)論

4.1 翼草景香組方 藏醫(yī)經(jīng)典著作《四續(xù)》及《四部醫(yī)典》均詳細(xì)的記載了“對(duì)治”是藏藥治療疾病的基本原則，是藥味、性、效配方的理論依據(jù)。藏藥方劑組方主要遵循“主仆原則”，具體組方時(shí)又有君王、大臣、王妃、士兵藥的不同，與中藥的“君臣佐使”有所不同，藏醫(yī)多以藥效強(qiáng)弱來(lái)區(qū)別“君王、大臣”。藏醫(yī)組方時(shí)，對(duì)疾病的診斷需準(zhǔn)確，明確疾病屬性和藥性之間的關(guān)系，藏藥藥性理論與中醫(yī)不同［19］，見(jiàn)表 5。

牛出血性敗血癥在中醫(yī)辯證上屬于疫癘之病，臨床上常以敗血為主要癥狀，屬于熱性病。藏醫(yī)上，該病是因?yàn)槌喟臀蓙y造成的熱性疾病，根據(jù)“對(duì)治”原則，治療該病應(yīng)該選用具有寒、涼性質(zhì)的藥物。翼草景香復(fù)方有八味藥組成，分別為翼首草，兔耳草，訶子，紅景天，安息香，草果，鐵棒錘，藏木香，在西藏牧區(qū)已用于牛出血性敗血癥臨床防治。其組方中翼首草含量最多，屬苦、寒藥物，是翼草景香復(fù)方的主藥，其水提物具有很好的抑菌效果［20］;《四部醫(yī)典》將兔耳草列為草藥類之首，味苦性寒，藏醫(yī)中兔耳草，訶子也多用于治療赤巴病［21－22］，此兩味藥含量雖少于翼首草，亦是翼草景香復(fù)方的主藥，鐵棒錘亦屬苦、寒藥物，雖具有毒性，但與訶子配伍使用能有效降低其毒性［23］。翼草景香復(fù)方使用翼首草，兔耳草，訶子清熱解毒，結(jié)合安息香，藏木香，草果等緩解癥狀，利用紅景天提高機(jī)體免疫力，組方組成符合疾病“對(duì)治”原則，遵循“主仆”原則，且試驗(yàn)結(jié)果表明，翼草景香水煎液對(duì)牛出血性敗血癥致具有防治作用。

圖3 菌體革蘭氏染色結(jié)果(1000×)Fig 3 Cell Gram stain results

圖4 小鼠死亡率隨復(fù)方劑量的變化Fig 4 mice mortality varies with the compound dose

表5 藏醫(yī)五元、六味、八性、十七效與疾病對(duì)治簡(jiǎn)表

4.2 高效液相色譜法測(cè)定翼草景香水煎液中紅景天苷含量 超高效液相色譜憑借其選擇性高，分離效果好，檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)被運(yùn)用于多個(gè)領(lǐng)域中，如化學(xué)分析，環(huán)境分析，藥物分析，食品分析［24］等，藥材的化學(xué)成分含量測(cè)定方法有薄層色譜法、氣相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法、HPLC［25］等。

紅景天是復(fù)方主要藥材之一，紅景天苷作為紅景天的主要成分，其不具備抑菌作用，但可提高機(jī)體免疫力。因此，本文利用HPLC測(cè)定翼草景香水煎液中紅景天苷的濃度，并以此來(lái)標(biāo)定該翼草景香水煎液濃度。利用100%甲醇溶解紅景天苷標(biāo)品時(shí)，出現(xiàn)兩個(gè)相連的峰，經(jīng)液相全波長(zhǎng)掃描及分光光度計(jì)全波長(zhǎng)掃描，確定其為一種物質(zhì)，經(jīng)試驗(yàn)，利用50%甲醇溶解對(duì)照品時(shí)其峰形最對(duì)稱。在該色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)曲線、儀器精密度、樣品穩(wěn)定性及重復(fù)性RSD值都良好，加樣回收率為90.99%，偏低，RSD值為4.35%，偏高，可能是由于該溶液為復(fù)方提取物，成分眾多，不同濃度下，中藥成分發(fā)生的相互作用程度不一。

4.3 翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌體外抑菌作用 研究中利用牛津杯法和試管二倍稀釋法測(cè)定翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性，當(dāng)翼草景香水煎液濃度為0.49263 g/L時(shí)抑菌圈平均直徑為28.5 mm，表明翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌高度敏感，且其MIC值為0.00385 g/L，比呂彪、曲徑等［26－27］研究的單味中草藥抑菌效果更顯著。

4.4 翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌感染模型小鼠治療效果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)的研究領(lǐng)域中，本文通過(guò)成功建立多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型，研究了翼草景香水煎液對(duì)巴氏桿菌的體內(nèi)防治作用，經(jīng)觀察，小鼠感染巴氏桿菌后，20 h后無(wú)死亡情況，故治療及對(duì)照組均給藥1次，預(yù)防及治療的高劑量組0.5 mL反而出現(xiàn)治療組死亡率較高現(xiàn)象，可能由于感染細(xì)菌后小鼠的免疫力降低所致，當(dāng)給予0.3 mL復(fù)方水煎液時(shí)，預(yù)防組降低死亡率33%，治療組降低死亡率25%。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于牛出敗多采用疫苗預(yù)防［28－29］，但由于多殺性巴氏桿菌的莢膜型和血清型眾多，疫苗免疫具有特異性不能全面覆蓋［30］，或基層獸防人員缺乏技術(shù)培訓(xùn)采取不正確的接種方式，接種劑量［31－32］等，牛出敗依舊每年發(fā)生，臨床上治療巴氏桿菌病多采用抗生素類藥物，多連續(xù)用藥3 d，長(zhǎng)時(shí)間使用效果降低，中藥多作為后期護(hù)理使用或不用，使用藏藥復(fù)方防治更是未找到相關(guān)報(bào)道。因此，本文復(fù)方以翼首草作為主藥，其可入血成分有

綠原酸、獐牙菜苷等，有文獻(xiàn)報(bào)道綠原酸具有抑菌作用［33］，但在此復(fù)方是否為主要有效成分尚需進(jìn)一步研究確定;紅景天與訶子中都含有沒(méi)食子酸，具有抗菌作用［34－35］。文中翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌感染小鼠具有明顯的防治作用，且預(yù)防作用強(qiáng)于治療作用。

4.5 結(jié)論 翼草景香為藏藥復(fù)方，在西藏部分牧區(qū)已用于牛出血性敗血癥臨床防治，本文通過(guò)液相定量復(fù)方中紅景天苷濃度為0.2214 g/L，體外及體內(nèi)試驗(yàn)證明翼草景香水煎液對(duì)多殺性巴氏桿菌具有良好的體內(nèi)、外抑菌活性，且其預(yù)防作用較治療作用明顯，這為牛出血性敗血癥的臨床藥物防治提供新的選擇。