抑郁癥大鼠海馬內少突膠質細胞的體視學研究

韓麗君，王志恒，尚婷惠子，陳萍，董海影*

（1．齊齊哈爾醫學院病理學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2．齊齊哈爾五龍街道新化社區衛生服務中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

抑郁癥是嚴重危害人類健康的一種精神疾病。因此，探討抑郁癥的發病機制，探索抑郁癥治療的新靶點，對于改善抑郁癥患者的抑郁狀態和生活質量具有重要意義。研究表明，少突膠質細胞功能障礙，尤其是當少突膠質細胞包圍軸突時形成的結節和軸突的突然剝脫，在神經異常中起著重要作用。因此，少突膠質細胞可能與抑郁癥的發生和發展密切相關，而海馬是與抑郁癥相關的重要腦區，海馬中各亞區的少突膠質細胞在發生抑郁時的確切變化需要探索，本文基于體視學對此進行了研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物與分組

選取動物實驗中心提供的周齡在4到6周的雄性SD大鼠50只，體重均在150到200克之間，隨機分為兩組，實驗組30只，對照組20只。每5只一籠（模型組和實驗組大鼠都需要單籠飼養）并提供足夠的食物和水，在室溫為20℃、適宜生長的環境中適應性喂養，飼養和治療遵循實驗室動物保護和使用指導。1周后將實驗組大鼠置于一系列慢性卻不可預知的應激，其他條件與對照組一致條件下飼養。

1.2 實驗方法

取材，切片，染色，體視學分析：觀察組和實驗組每組隨機選16只大鼠，腹腔注射1%戊巴比妥鈉。將大鼠胸腔迅速打開暴露心臟，從左心室頂端進針，再將針頭用止血鉗固定。將右心耳切開灌注約80 ml生理鹽水再灌注4%（多聚甲醛）聚甲醛直到頸部僵硬。打開顱骨腔，取出顱骨，取出完整的腦組織，置于PBS制備的蔗糖溶液中3天。溶液的濃度分別為10%、20%和30%。將大腦組織植入OCT，在冷凍切片機上制作60微米的連續切片。所有切片在0.01 mol/L PBS溶液中漂浮。室溫（21～23℃），洗凈0.01 mol/L PBS，5分鐘×3次，輕輕搖勻。用0.3% Triton洗滌15分鐘，洗四次，放入封閉液中封閉，依次敷一抗、二抗、三抗，最后進行DAB顯色，顯影時間根據每張膠片的著色程度進行調整，約1分鐘，用蘇木素重復染色、脫水、封片、在體視學設備上，用專業體視學軟件對少突膠質細胞進行計數。大鼠海馬CA1區、CA3區和DG區在4倍物鏡下劃定。在每個切片的每個區域選擇大約12～30個視野，在每個動物的（每張切片）海馬的每個亞區域選擇大約400個視野。在100倍油鏡下用體視學軟件自動記錄并計數海馬各亞區少突膠質細胞的數量。

1.3 統計學方法

所有數據均應用SPSS 20.0統計學軟件進行處理和分析，P＜0.05為差異，則代表相應數據具有統計學上的意義。

2 結 果

對照組各區的細胞排列緊密，結構清楚，細胞邊緣光滑完整，而實驗組細胞排列松散，形態各異，細胞邊緣輪廓不清，且少突膠質細胞數目密度較對照組減少。經分析兩者比較；差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

實驗組大鼠海馬CA1區少突膠質細胞數量較對照組無明顯改變，而CA3區和的少突膠質細胞數量則明顯低于對照組，見表2。

表1 兩組細胞密度比較（±s）

表1 兩組細胞密度比較（±s）

分組少突膠質細胞密度（個/cm2）實驗組 3101.25±170.23對照組 4251.46±200.48 t 23.4578 P 0.003

表2 兩組大鼠海馬各區少突膠質細胞數目比較（±s）

表2 兩組大鼠海馬各區少突膠質細胞數目比較（±s）

分組 CA1區 DG CA3區實驗組 32018.0±10332.3 30173.8±6048.2 27887.8±4483.0對照組 45637.3±8879.2 48073.7±9901.2 36542.3±5909.9 t 23.4785 36.4877 42.8937 P 0.149 0.019 0.004

3 討 論

結果表明，實驗組CA1區少突膠質細胞與對照組相比無明顯變化，而CA3區和DG區少突膠質細胞與對照組相比明顯減少，這進一步表明，誘發抑郁的刺激不能減少CA1區成熟少突膠質細胞總數，但CA3區和DG區少突膠質細胞總數明顯降低。因此，本研究采用體視學方法研究海馬中少突膠質細胞的數量。此外，海馬的傳入纖維主要由內嗅皮質的軸突起，投射到海馬齒狀回的整個長度，投射到齒狀回的分子層和CA1的腔隙分子層。這兩層纖維的數量最大，這是海馬接受外部壓力的主要信息來源。因此，推測慢性應激可能影響CA1區的某些特定區域，如密集分布的腔隙分子層。這種推測需要在以后的實驗中進一步研究和確認。研究發現，兒童期較大的外部刺激可影響海馬的發育和成熟，導致海馬體積減少，尤其是CA3和DG的體積較正常人明顯減少，無不顯示海馬內少突膠質細胞的減少與抑郁癥的發生發展密切相關。

體視學研究結果表明，抑郁癥大鼠海馬CA3區和DG中少突膠質細胞數量明顯減少，而CA1區無明顯變化。研究結果為進一步認識抑郁癥的病理變化，尋找抑郁癥治療的結構靶點和切入點提供了重要的科學依據。