LINC00152通過調(diào)節(jié)VEGFR2的表達對血管瘤內(nèi)皮細胞生長、增殖、遷移和侵襲的影響

馬從乾，王雅#，王娜，楊柯，陳德才

鄭州大學(xué)附屬南陽市中心醫(yī)院1血管外科，2血液凈化科，河南 南陽 4730000

血管瘤是一種常見的良性腫瘤，對于導(dǎo)致患者出現(xiàn)潰瘍、功能障礙、瘢痕等并發(fā)癥的血管瘤，必須給予早期干預(yù)治療[1]。研究血管瘤內(nèi)皮細胞（hemangioma endotheliar cell，HemEC）的增殖、凋亡等生物學(xué)行為的機制，可為研究血管瘤的發(fā)生、發(fā)展和退化奠定一定的基礎(chǔ)[2]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細胞生長因子，具有促進血管形成、血管內(nèi)皮細胞遷移及增殖等作用[3-4]。Ou等[5]發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）在血管瘤組織中的表達水平高，且與血管瘤細胞的存活和凋亡密切相關(guān)。Teng等[6]研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA（long chain non-coding RNA，lncRNA）可抑制血管內(nèi)皮細胞的凋亡并促進其遷移。LINC00152是一種lncRNA，結(jié)合諸多相關(guān)研究，篩選出與LINC00152結(jié)合的miRNA均可靶向抑制VEGFR2基因的表達[7-12]，提示 LINC00152 與VEGFR2可能具有相關(guān)性。因此，本研究分析了LINC00152在不同時期血管瘤組織和癌旁正常皮膚組織中的表達情況，并探討LINC00152對Hem-EC生長、增殖、遷移和侵襲的影響及具體作用機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 病理組織收集

收集2010年10月至2016年10月于鄭州大學(xué)附屬南陽市中心醫(yī)院保存的嬰幼兒血管瘤患者的血管瘤組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)術(shù)后病理診斷確診為嬰幼兒血管瘤；②術(shù)前均未行任何輔助性治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在哮喘、嚴(yán)重先天性心臟病、低血糖等服藥禁忌證；②合并嚴(yán)重肝、腎功能不全；③出生時合并新生兒窒息或新生兒缺血缺氧性腦病。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入27例嬰幼兒血管瘤患者的血管瘤組織標(biāo)本（血管瘤增生期組織標(biāo)本15例，血管瘤退化期組織標(biāo)本12例）。27例嬰幼兒血管瘤患者中，男10例，女17例；年齡為1個月～2歲，平均年齡為（1.2±0.1）歲；依據(jù)Mulliken分類標(biāo)準(zhǔn)[13]：處于增生期血管瘤患者15例，處于退化期血管瘤患者12例；另選取相應(yīng)的癌旁（距腫瘤邊緣5 cm以上）正常皮膚組織標(biāo)本27例作為對照。

1.2 試劑與儀器

Endothelial Basal Medium-2培養(yǎng)基購于上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白含量檢測試劑盒購于南京碧云天生物技術(shù)有限公司；Trizol試劑盒購于美國Promega公司；SYBR Green Gene Expression Assay購于日本TaKaRa公司；胰蛋白酶購于美國Gibco公司；CCK-8檢測試劑盒購于日本Dojindo研究所；基質(zhì)膠Matrigel購于美國BD Biosciences公司；MMLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于北京索萊寶科技有限公司；熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRTPCR）檢測試劑盒購于上海生工生物工程有限公司；EdU增殖檢測試劑盒購于廣州銳博生物科技有限公司；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒購于 美 國 Invitrogen 公 司 ；sh-LINC00152、pcDNALINC00152、miRNA-inhibitor、miRNA-mimic、pcDNA和siRNA Control均購于上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；miRNA-200c-5p agomir和miRNA-195-5p agomir購于廣州銳博生物科技有限公司；細胞增殖和細胞凋亡免疫熒光試劑盒均購于廣州復(fù)能基因有限公司。VEGFR2單抗、GAPDH單抗和辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的二抗均購于美國Abcam公司。雙熒光素酶報告基因試劑盒購于北京全式金生物技術(shù)有限公司；SKLB1002購于北京華夏遠洋科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 qRT-PCR法檢測組織中LINC00152的相對表達量 采用qRT-PCR法檢測LINC00152的相對表達量。嚴(yán)格按照Trizol試劑盒說明書的步驟提取血管瘤增生期組織、血管瘤退化期組織和癌旁正常皮膚組織中的總RNA。采用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，以cDNA為模板，采用SYBR Green Gene Expression Assay進行熒光定量PCR，20 μl反應(yīng)體系（SYBR Green 10 μl，cDNA 2 μl，正向引物2 μl，反向引物2 μl，DEPC-H2O 4 μl）。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，60℃擴增30 s，72℃延伸20 s，共40個循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，應(yīng)用相對定量 2-△△Ct法計算LINC00152的相對表達量。實驗重復(fù)3次。

1.3.2 HemEC培養(yǎng) 參考李鵬等[14]的方法進行HemEC原代培養(yǎng)，使用含10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）和雙抗的Endothelial Basal Medium-2培養(yǎng)基對HemEC進行體外培養(yǎng)。在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2、飽和濕度條件下的細胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

1.3.3 HemEC轉(zhuǎn)染及分組 取處于對數(shù)生長期的細胞用于后續(xù)轉(zhuǎn)染實驗，將轉(zhuǎn)pcDNA-LINC00152的細胞分別記為OE-Linc1組和OE-Linc2組（分別擴增兩個含有LINC00152序列的不同片段進行過表達），將轉(zhuǎn)染pcDNA空載體的細胞記為OE-NC組，將轉(zhuǎn)染sh-LINC00152的細胞分別記為sh-Linc1組和sh-Linc2組（分別采用兩個不同LINC00152片段進行干擾），將轉(zhuǎn)染sh-LINC00152對照的細胞記為sh-NC組，細胞轉(zhuǎn)染嚴(yán)格按照Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒說明書的步驟進行操作，經(jīng)鑒定若轉(zhuǎn)染效率大于90%，則用于后續(xù)實驗。以過表達LINC00152（OE-Linc1組）的HemEC為基礎(chǔ)，將細胞分為SKLB1002組（采用300 nmol/L SKLB1002處理）、miRNA-200c-5p組[采用400 nmol/L miRNA-200c-5p miRNA模擬物（agomir）處理]和miRNA-195-5p組（采用400 nmol/L miRNA-195-5p agomir處理），檢測對各組細胞增殖、侵襲和遷移的影響。實驗重復(fù)3次。

1.3.4 qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后HemEC中LINC00152的相對表達量 HemEC轉(zhuǎn)染48 h后，采用qRTPCR法檢測HemEC中LINC00152的相對表達量，方法同1.3.1。

1.3.5 CCK-8法檢測HemEC增殖能力 以CCK-8底物反應(yīng)后的光密度測定細胞活力，即在待測的每孔細胞中加入10 μl CCK-8溶液，置于37℃下孵育2 h，在酶標(biāo)儀450 nm處測定各孔細胞的吸光度值。以EdU免疫熒光強度測定細胞增殖，具體操作步驟參考EdU增殖檢測使用說明書，制備EdU培養(yǎng)基，離心重懸并收集待測細胞，以加入1×Apollo染液500 μl避光染色10 min，磷酸鹽緩沖液清洗后上流式細胞儀檢測相對熒光強度，相對熒光強度越高表示增殖能力越強。

1.3.6 Transwell實驗檢測HemEC侵襲和遷移能力將Transwell上室濾膜經(jīng)人工基底膜涂覆，置于培養(yǎng)箱中孵育2 h待用，將待檢測的HemEC用胰蛋白酶消化，離心后采用無血清培養(yǎng)基重懸制成單細胞懸液，取出平衡后的Transwell小室，于下室加入含10%FBS的培養(yǎng)基600 μl，于上室加入細胞懸液200 μl，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，取出小室，擦去上室細胞及細胞碎片，加入結(jié)晶紫溶液500 μl進行染色，清洗后，通過倒置顯微鏡觀察并拍照，檢測細胞的侵襲能力。檢測細胞遷移能力時，Transwell上室濾膜未經(jīng)人工基底膜涂覆，其余步驟同Transwell侵襲實驗。

1.3.7 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測細胞中VEGFR2的表達水平 收集轉(zhuǎn)染后48 h各組Hem-EC，按照蛋白提取試劑盒說明書步驟提取細胞中蛋白，采用蛋白質(zhì)定量檢測（BradfordProteinAssay，BAC）法定量檢測提取的蛋白濃度。采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDSPAGE）分離蛋白，將凝膠蛋白低溫下轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，以5%脫脂奶粉室溫封閉60 min，分別加入一抗VEGFR2（1∶800稀釋），4 ℃孵育過夜，再加入1∶1000稀釋的二抗，室溫反應(yīng)2 h。以HRP催化電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL）進行檢測，應(yīng)用Image J軟件進行灰度分析，以GAPDH作為內(nèi)參蛋白，計算細胞中VEGFR2蛋白的表達水平。

1.3.8 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?通過生物信息學(xué)在線數(shù)據(jù)庫TargetScan預(yù)測發(fā)現(xiàn)LINC00152與miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p存在靶向結(jié)合位點，分別擴增 LINC00152與 miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p結(jié)合位點序列，分別構(gòu)建到報告基因載體上，記為Linc-WT報告質(zhì)粒，同時將LINC00152與miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p結(jié)合位點紊亂序列構(gòu)建到報告基因載體上，記為Linc-MUT報告質(zhì)粒，按照雙熒光素酶報告基因試劑盒說明書的步驟進行操作，在細胞轉(zhuǎn)染48 h后收集細胞，加入細胞裂解液裂解細胞10 min，離心后取上清，加入50 μl熒光素酶檢測試劑，振蕩混勻10 min，分別測定雙熒光素酶活性，根據(jù)熒光強度計算各組織細胞的相對熒光素酶活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件對-數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗或SNK-q檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。體外實驗中，每個實驗組設(shè)置3個生物學(xué)重復(fù)，每個生物學(xué)重復(fù)設(shè)置2個技術(shù)重復(fù)，每組數(shù)據(jù)代表6個獨立數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 LINC00152在不同組織中的相對表達情況

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，LINC00152在血管瘤增生期組織和血管瘤退化期組織中的相對表達量分別為（1.91±0.28）、（3.20±0.66），均明顯高于癌旁正常皮膚組織的（1.00±0.17），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.614、6.344，P＜0.01）。LINC00152在血管瘤退化期組織中的相對表達量明顯高于血管瘤增生期組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.729，P＜0.01）。

2.2 轉(zhuǎn)染后細胞中LINC00152的相對表達量

NC組、sh-NC組和OE-NC組細胞中LINC00152的相對表達量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與sh-NC組相比，sh-Linc1組和sh-Linc2組細胞中LINC00152的相對表達量均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.572、2.912，P＜0.05）。與OE-NC組相比，OE-Linc1組和OE-Linc2組細胞中LINC00152的相對表達量均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.619、6.648，P＜0.01）。（圖1）

圖1 轉(zhuǎn)染后細胞中LINC00152的相對表達量

2.3 過表達或敲低LINC00152對細胞增殖能力的影響

EdU細胞增殖檢測結(jié)果顯示，敲低LINC00152后，NC組、sh-NC組、sh-Linc1組和sh-Linc2組的相對熒光強度分別為（1.00±0.16）、（0.94±0.14）、（0.60±0.11）、（0.56±0.10）。NC組和sh-NC組的相對熒光強度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。sh-Linc1組和sh-Linc2組的相對熒光強度均明顯低于NC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.823、P=0.005；t=4.197、P=0.003）。過表達LINC00152后，NC組、OE-NC組、OE-Linc1組和OE-Linc2組的相對熒光強度分別為（1.00±0.16）、（0.95±0.16）、（1.68±0.25）、（1.63±0.24）。NC組和OE-NC組的相對熒光強度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。OELinc1組和OE-Linc2組的相對熒光強度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 過表達或敲低LINC00152對細胞侵襲和遷移能力的影響

NC組、OE-NC組和sh-NC組細胞的侵襲比例和細胞遷移比例比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。OE-Linc1組和OE-Linc2組細胞的侵襲比例均明顯高于OE-NC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.573、3.736，P＜0.01）；OE-Linc1組和OE-Linc2組細胞的遷移比例均明顯高于OE-NC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.067、3.742，P＜0.01）。（圖2）

2.5 LINC00152與miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p間的相互作用

圖2 過表達或敲低LINC00152對血管內(nèi)皮細胞侵襲和遷移能力的影響

通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測LINC00152靶向結(jié)合位點，LINC00152能夠與miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p靶向結(jié)合（圖3）。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示，Linc-WT報告質(zhì)粒組中miRNA-200c-5p mimic-NC、miRNA-200c-5p mimic、miRNA-195-5p mimic-NC、miRNA-195-5p mimic的相對熒光強度分別為（1.00±0.15）、（0.20±0.03）、（1.00±0.15）、（0.25±0.04），與mimic-NC相比，miRNA-200c-5p或miRNA-195-5p mimic共轉(zhuǎn)染可明顯降低報告質(zhì)粒表達的熒光素酶活性（P＜0.01），而報告質(zhì)粒Linc-MUT中 miRNA-200c-5p mimic-NC、miRNA-200c-5p mimic、miRNA-195-5p mimic-NC、miRNA-195-5p mimic的相對熒光強度分別為（1.00±0.15）、（1.05±0.15）、（1.00±0.15）、（0.96±0.14）；與mimic-NC相比，miRNA-200c-5p或miRNA-195-5p mimic共轉(zhuǎn)染后熒光強度無明顯變化。

圖3 LINC00152與miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p間結(jié)合位點預(yù)測結(jié)果示意圖

2.6 過表達或敲低LINC00152對VEGFR2表達的影響

VEGFR2mRNA在正常組織、血管瘤增生期組織和退化期組織中的相對表達量分別為（1.00±0.16）、（1.30±0.19）、（1.13±0.17）。與癌旁正常皮膚組織相比，血管瘤增生期組織中VEGFR2mRNA的表達水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與血管瘤增生期組織相比，血管瘤退化期組織中VEGFR2mRNA的表達水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與NC組相比，OE-NC和sh-NC組細胞中VEGFR2 mRNA和蛋白的表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與OE-NC組相比，OE-Linc1組和OE-Linc2組細胞中VEGFR2 mRNA和蛋白的表達水平均升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與sh-NC組相比，sh-Linc1組和sh-Linc2組細胞中VEGFR2 mRNA和蛋白的表達水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 敲低或過表達LINC00152后Hem-EC中VEGFR2 mRNA和蛋白表達水平的比較（x±s）

OE-Linc1中，與mimic NC組相比，miRNA-200c-5p組、OE-Linc1 miRNA-16-5p組和OE-Linc1 miRNA-195-5p組細胞中VEGFR2蛋白的表達水平均明顯降低（t=4.672、4.964、4.745，P＜0.01）。sh-Linc2中，與inhibitor NC組相比，miRNA-200c-5p組、sh-Linc2 miRNA-16-5p組和sh-Linc2 miRNA-195-5p組細胞中VEGFR2蛋白的表達水平均明顯升高（t=4.375、3.914、3.799，P＜0.01）。（圖4）

圖4 LINC00152與miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p和miRNA-16-5p間的相互作用

2.7 LINC00152通過VEGFR2促進HemEC的活性

與NC組相比，miRNA-200c-5p組、miRNA-195-5p組和SKLB1002組細胞在72 h時的光密度值均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.430、3.563、5.874，P＜0.05）。（圖5）

圖5 不同組別HemEC細胞的光密度值

2.8 LINC00152通過VEGFR2影響HemEC的侵襲和遷移

與NC組相比，miRNA-200c-5p組、miRNA-195-5p組和SKLB1002組HemEC在體外的遷移能力均明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.939、3.589、5.558，P＜0.01）；與 NC 組相比，miRNA-200c-5p組、miRNA-195-5p組和SKLB1002組Hem-EC在體外的侵襲能力均明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.736、4.208、5.894，P＜0.01）。（表2）

表2 不同組別HemEC在體外侵襲和遷移能力的比較（±s）

表2 不同組別HemEC在體外侵襲和遷移能力的比較（±s）

注：*與NC組比較，P＜0.01

組別NC組miRNA-200c-5p組miRNA-195-5p組SKLB1002組細胞遷移1.00±0.17 0.62±0.11*0.65±0.11*0.46±0.06*細胞侵襲1.00±0.16 0.59±0.09*0.63±0.10*0.49±0.07*

3 討論

血管瘤常發(fā)生于嬰幼兒的頭頸部皮膚及皮下組織，大部分血管瘤可自行消退，但是大面積的血管瘤消退后可后遺淺瘢痕、局部色素沉淀、皮膚萎縮下垂等體征。血管瘤的病理學(xué)特點是HemEC增殖活躍，并伴有血管生成和肥大細胞的聚集。VEGFR2是蛋白酪氨酸激酶家族成員之一，具有蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）結(jié)構(gòu)域，可與VEGF結(jié)合激活PTK的活性，通過磷酸化下游分子激活相關(guān)信號通路，調(diào)控細胞增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為[15]。在胃癌細胞中，VEGFR2可促進胃癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移[16]。通過細胞轉(zhuǎn)染siRNA在肺癌細胞Calu-1中敲低VEGFR2的表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力明顯受到抑制；此外，下調(diào)VEGFR2的表達還可提高放射后肺癌細胞的凋亡率[17]。研究表明，血管瘤細胞可以自分泌的形式分泌VEGF-A并激活自身的VEGFR2，導(dǎo)致細胞的存活、增殖和遷移能力提高[18]。本研究結(jié)果顯示，LINC00152在血管瘤增生期組織和血管瘤退化期組織中的相對表達量均明顯高于癌旁正常皮膚組織（P＜0.01），提示VEGFR2可能促進血管瘤的生長。

最近的研究指出lincRNA可調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。Zhao等[19]發(fā)現(xiàn)lncRNA SNHG16可通過競爭性結(jié)合miRNA-520d-3p降低后者對STAT3基因表達的靶向抑制能力，提高HemEC的增殖、遷移和侵襲能力。此前Liu等[20]通過微陣列比較了新生兒血管瘤病理組織和癌旁組織中mRNA及l(fā)ncRNA的差異表達情況，發(fā)現(xiàn)FENDRR、MEG3、MEG8、LINC00152和H19等lncRNA在血管瘤中的表達量均升高。此外有研究表明，LINC00152可促進多種腫瘤的進展[21-22]。本實驗結(jié)果顯示，LINC00152敲低可抑制HemEC的生長、增殖、遷移和侵襲，促進HemEC的凋亡，過表達LINC00152則促進HemEC的生長、增殖、遷移和侵襲，正常腫瘤細胞體外培養(yǎng)的凋亡率為5%，過表達LINC00152細胞的凋亡率降低不明顯，因此本實驗未展示此組數(shù)據(jù)。通過LINC00152在血管瘤組織中的表達情況可知，LINC00152可促進血管瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，與上述報道相符。

LINC00152被鑒定為涉及多種惡性腫瘤的癌基因，例如胃癌、肝細胞癌、結(jié)腸癌、膽囊癌和腎細胞癌。LINC00152促癌的機制多為其作為競爭性內(nèi)源RNA與特定的miRNA相結(jié)合，解除miRNA對相關(guān)原癌和促癌基因表達的抑制作用[23-24]。Chen等[25]首次報道了LINC00152與miRNA-16-5p間的相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LINC00152可通過競爭性結(jié)合miRNA-16-5p促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。本研究結(jié)合Li等[7]的研究，并通過數(shù)據(jù)庫靶點預(yù)測，篩選出LINC00152與miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p和miRNA-16-5p結(jié)合的作用靶點，其中，已有LINC00152與miRNA16-5p相結(jié)合的相關(guān)報道，本實驗不再重復(fù)驗證，而是通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞C了LINC00152與miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p相互結(jié)合的作用。敲低或過表達LINC00152可影響miRNA的表達，miRNA過表達對LINC00152的表達也產(chǎn)生影響。此外，本實驗檢測了敲低或過表達LINC00152對VEGFR2轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平的影響。過表達miRNA-200c-5p或miRNA-195-5p能夠回調(diào)由LINC00152過表達導(dǎo)致的VEGFR2表達量升高。以上結(jié)果表明，LINC00152可競爭性地與miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p和miRNA-16-5p結(jié)合，提高VEGFR2的表達水平。本研究發(fā)現(xiàn)，抑制VEGFR2的表達可降低由過表達LINC00152誘導(dǎo)的細胞增殖、侵襲和遷移，促進細胞凋亡；miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p對應(yīng)的agomir處理模擬miRNA的過表達，同樣可降低由過表達LINC00152誘導(dǎo)的細胞增殖、侵襲和遷移，促進細胞凋亡，說明LINC00152通過VEGFR2促進HemEC的存活、遷移和侵襲。

綜述所述，LINC00152可提高 VEGFR2在HemEC中的表達水平和轉(zhuǎn)錄活性，促進HemEC的生長、增殖、遷移和侵襲，其作用機制可能與LINC00152與 miRNA-200c-5p、miRNA-195-5p和miRNA-16-5p間的結(jié)合導(dǎo)致VEGFR2表達水平升高有關(guān)，證明了LINC00152促進血管瘤發(fā)生、發(fā)展的效果，抑制LINC00152的表達可能對血管瘤或其他腫瘤的治療具有潛在的意義，為LINC00152可能作為血管瘤的診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物提供一定的理論基礎(chǔ)。