大果櫸組織培養研究

張若晨，王良民

（1.山西運城農業職業技術學院，山西運城044000；2.山西農業大學林學院，山西太谷030801）

大果櫸，又名小葉櫸、枹榆，落葉喬木，高達20m，小枝無毛，葉卵狀長圓形或卵形，果實為核果[1]。其樹冠龐大，落葉量較多，具有改良土壤的效果，是很好的造林樹種。樹葉顏色隨生長季節發生變化，一般春季剛萌芽的幼葉為紫紅色，然后變成鮮綠色，再變成深綠色，到了秋季逐漸變成紅色、紫色和棕色，具有很高的觀賞價值[2-3]。果實很多空癟粒，結實率不穩定，影響繁殖。

大果櫸具有較高的造林價值和觀賞價值，已被列為河南省重點保護植物，也是山西省的珍稀鄉土樹種[4]。但是其資源貧乏，天然種源少，結實率低而不穩定[5]。所以，進行大果櫸人工繁殖技術研究具有重要的生產和生態意義[6-10]。

本試驗利用大果櫸莖段進行組織培養，找出大果櫸組織培養的最佳培養基配方及培養條件，從而為建立大果櫸快繁體系提供理論依據，為大果櫸的繁育提供新途徑。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

選取山西農業大學植物園及林學院苗圃所栽種的大果櫸，植物園大果櫸樹齡在50 a以上，苗圃所栽種大果櫸是由中條山泗交林場引種栽培。2018年5月取以上2種材料的大果櫸1年生嫩枝莖段作為外植體材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 材料處理 于8：00—9：00取大果櫸1年生幼嫩枝條作為外植體材料，用塑料保鮮膜保濕帶回實驗室，用加去污粉或洗潔精的水浸泡5 min后，用流動的自來水沖洗30 min，在超凈工作臺上用0.1%升汞滅菌，用無菌水沖洗3次，再用75%的酒精消毒30 s，用無菌水沖洗3次[11-17]。

1.2.2 培養方法

1.2.2.1 培養條件 pH值5.8，培養溫度為（25±1）℃，光照強度為2 500 lx，光照時間為15 h/d。培養20～30 d后，測定組培苗的生長指標。

1.2.2.2 初代培養 外植體材料消毒后剪成1 cm左右帶腋芽的莖段，置于無菌濾紙上吸干水分，接種于起始誘導培養基WPM上，試驗設置不同質量濃度 6-BA（0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L）和 NAA（0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L），研究對大果櫸誘導芽的影響，培養20 d后統計萌發率。

1.2.2.3 繼代培養 在無菌條件下，將初代培養中誘導出的芽苗切成帶芽的1.0 cm左右的莖段，接種到增殖培養基WPM上培養，試驗設置不同質量濃度的 6-BA（0.5，1.0 mg/L）與 NAA（0.1，0.5，1.0 mg/L）組合，研究對大果櫸增殖的影響，20 d后觀察芽苗的生長情況，計算增殖率。

1.2.2.4 生根培養 在無菌條件下，將增殖產生的2～5 cm的叢生芽分切成單株，轉入生根培養基誘導生根，觀察記錄生根時間及生長情況，30 d后統計生根數，計算生根率。生根培養基以MS，1/2 MS，WPM為基本培養基，附加不同質量濃度的IBA（0.05，0.1，0.5，1.0 mg/L）和 6-BA（0.02 mg/L）。

2 結果與分析

2.1 不同激素配比對莖段初代培養的影響

表1 不同質量濃度6-BA，NAA對莖段不定芽誘導率的影響

由表1可知，不同質量濃度6-BA處理下不定芽誘導率差異顯著，在0.1～1.0 mg/L內誘導率呈現升高趨勢。在0.1 mg/L6-BA中加入不同質量濃度NAA處理下的不定芽誘導率差異不顯著，莖段腋芽處有明顯膨大現象（圖1），但是很少成功萌發，并且外植體未見有伸長跡象，莖段有一層黃色愈傷；6-BA為0.5，1.0 mg/L時，誘導率在不同質量濃度的NAA下差異顯著；0.5 mg/L 6-BA＋0.5～1.0 mg/L NAA時，所接莖段有明顯伸長現象，腋芽膨大明顯，一部分所包裹鱗片成功萌發，但是生長狀況不佳，苗較細弱，并且葉片小而卷曲；在1.0 mg/L6-BA＋0.1～0.5 mg/LNAA時，腋芽萌發率較高，有效芽較多，并且生長狀況良好，葉片伸展且顏色較綠（圖2）；在6-BA達到2.0 mg/L時，NAA為0.1，0.5 mg/L時的誘導率差異顯著，誘導率普遍較低，只見腋芽處膨大，很少有萌芽成功，外植體基部膨大，并且變脆，在切割時易碎。

2.2 不同激素配比對再生嫩莖增殖的影響

將消毒后的莖段接種到含不同激素的培養基上，生長20 d后，統計不定芽數目及增殖率（表2）。

由表2可知，當6-BA質量濃度一定時，隨NAA質量濃度升高，增值率出現先升高后降低的趨勢；在NAA0.5mg/L下增殖率最大；6-BA為0.5mg/L時，NAA 0.1 mg/L與1.0 mg/L濃度下大果櫸增殖率差異不顯著；6-BA為1.0 mg/L，NAA在不同質量濃度下的增殖率差異顯著。而在相同質量濃度NAA下，大果櫸嫩莖增殖率在6-BA 1.0 mg/L質量濃度時較0.5 mg/L質量濃度下高，且在NAA為0.5 mg/L與1.0 mg/L時，6-BA1.0 mg/L與0.5 mg/L的分析結果差異性顯著。由此可見，大果櫸嫩莖增殖的最佳培養基為WPM＋1.0 mg/L6-BA＋0.5 mg/LNAA。

表2 不同激素配比對莖段增殖的影響

2.3 不同激素配比對不定芽生根培養的影響

由表3可知，MS，1/2 MS基本培養基無法使不定芽生根，在添加一定量植物生長調節劑后，雖有生根跡象，但生根狀況較差，不定芽在不含任何激素的WPM培養基上有部分苗能生出根，因此，選WPM作為基本培養基較好。

表3 不同培養基及激素對不定芽生根的影響

在相同激素配比下，WPM中的試管苗長勢好于1/2 MS培養基，在IBA 0.1 mg/L時，生根率最高，但是生根慢，根較細弱，試管苗生長較慢；在加入6-BA后，試管苗生根要明顯早于只含有IBA的試管苗，在0.02 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA時誘導率為58.25%，雖不及IBA0.1 mg/L時的生根率高，但是生根早，生根系數最大，且根系較發達（圖3），苗生長健壯（圖4）；但是在生長素濃度較高時（0.5 mg/L），愈傷組織生長過快，在長出根后，愈傷組織仍有明顯增長，但是根生長較慢，致使有生長慢的根又被愈傷包被，影響試管苗的生長。因此，WPM＋0.02 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA為大果櫸莖段生根培養的最適培養基。

3 結論與討論

本試驗對大果櫸的再生體系進行了初步的研究，結果表明，莖段不定芽在0.1～1.0 mg/L 6-BA下誘導率呈現升高趨勢，在6-BA達到2.0mg/L時，誘導率普遍較低，且基部膨大，變脆，在切割時易碎，不利于繁殖。莖段誘導不定芽在1.0 mg/L 6-BA＋0.1～0.5 mg/LNAA生長良好，腋芽萌發率較高，有效芽較多，并且生長狀況良好，葉片伸展且顏色較綠。大果櫸莖段增殖的最佳培養基為WPM＋6-BA1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L。

通過對MS，1/2 MS和WPM這3種培養基和添加激素進行比較得出，最佳培養基為WPM＋0.02mg/L 6-BA＋0.05 mg/LIBA，在該培養基培養下，生根早，且根系發達。