銅綠假單胞菌多重耐藥情況分析

葉秋英，許春，付名豐，丁嵐

1.江西醫學高等專科學校，江西 上饒 334000；2.江西醫專第一附屬醫院，江西 上饒 334000

銅綠假單胞菌，即綠膿桿菌，廣泛分布于自然界，存在于人體皮膚、腸道、呼吸道等連通外界的腔道中，銅綠假單胞菌為非發酵革蘭陰性桿菌，有鞭毛，運動活潑，屬于條件致病菌，為醫院感染的一種主要病原菌[1]。對于惡性腫瘤患者、血液疾病患者、基礎性疾病患者，以及長期應用抗生素治療者，極易發生銅綠假單胞菌感染，進一步引發菌血癥、敗血癥等，嚴重者出現死亡。本文將對銅綠假單胞菌多重耐藥情況進行分析，為臨床實踐提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究涉及100株多重耐藥銅綠假單胞菌，研究時間為2017年2月-2019年1月。標本類型包含痰液、血液、腹腔積水、傷口分泌物、腹水等。

1.2 方法 使用設備：全自動細菌生化鑒定和藥敏分析儀（系統：vitek2compact系統；生產廠家：法國梅里埃）；PCR擴增試劑盒、DNA marker擴增試劑盒，生產廠家均為：上海生工公司。

所有患者均行微生物病原菌檢驗：以臨床操作規范為指導，對患者標本進行收集，并立即送檢，確保檢驗環境無菌，采用微生物檢驗方法分離與檢查。以有關標準為依據，進一步試驗，以紙片擴散原理性藥敏試驗檢驗，檢查病原菌耐藥性，測量結果的判讀嚴格執行臨床與實驗室標準化協會規定（2014年）。耐藥基因檢測：其目的基因為：膜孔蛋白oprD2等基因。應用煮沸法進行多重耐藥菌株的DNA提取，選取單個菌落置Ep管內，使用100 ℃煮沸約10 min，離心操作取上清液，作為PCR擴增模板使用。PCR反應體系由以下組成：50 uL的VIM-2基因檢驗體積，0.25 uL的Tap酶、5 uL的10＊PCR buffere、5 uL的dNTP、5 uL的模板、1 uL的上游引物，1 uL的下游引物F，32.75 uL的超純水；反應條件為：5 min的95 ℃預變性，1 min的95 ℃預變性，40 s的55 ℃退火，40 s的72 ℃延伸，10 min的72 ℃延伸，循環30個，中止保存環境為4 ℃。PCR擴增產物5 uL與瓊脂糖凝膠電泳（含12%的溴化乙錠）混合，對其結果詳細記錄。

1.3 觀察指標 分析科室分布、標本來源、耐藥模式分析。

2 結果

2.1 科室分布分析 100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，科室分布重癥醫學科18例（18%），燒傷整形科15例（15%），呼吸科30例（30%），急診科7例（7%），心胸外科5例（5%），介入病房7例（7%），胃腸外科8例（8%）。

2.2 標本來源分析 所有患者的標本來源痰35例（35%），全血14例（14%），傷口分泌物23例（23%），胸腔積液或者腹水9例（9%），咽拭子10例（10%），其他9例（9%）。

2.3 耐藥模式分析 100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，對頭孢菌素類、青霉素類具有耐藥性，另外，對于碳青霉烯類具有較高的耐藥率，多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥率為13.2%，其中亞胺培南耐藥率最高為30.2%，其次為氨曲南20.1%，多黏菌素B未出現耐藥菌株。

3 討論

本次研究結果顯示：100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，高發于呼吸科、重癥監護室，主要由于該部分患者呼吸道伴隨基礎性疾病，以及傷口愈合不佳、長期用藥者[2]。研究結果，標本以痰液、傷口分泌物為主，這主要由于部分慢性疾病患者或者血液系統疾病患者，特別是老年患者易引發肺部感染，存在肺炎可能，用藥效果不佳，可采用痰液標本進行培養。臨床在治療感染性疾病時主要采用抗菌藥物，而長期應用抗菌藥物治療極易出現耐藥性[3]，或者引起腸道內菌群失調，引發感染。在銅綠假單胞菌菌株的分離檢驗中，存在產粘液性，對檢驗結果產生影響，同時還不利于治療，這主要由于粘液形成為銅綠假單胞菌出現耐藥性的一個機制。因此應用銅綠假單胞菌治療成為臨床關注的重點[4]。研究結果中，碳青霉烯類具有較高的耐藥率，多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥率為13.2%，其中亞胺培南耐藥率最高為30.2%，其次為氨曲南20.1%，多黏菌素B未出現耐藥菌株。

綜上，銅綠假單胞菌感染建議少用碳青霉烯類藥物，同時在治療上需制定感染控制措施，持續耐藥監測銅綠假單胞菌，避免多重耐藥性銅綠假單胞菌擴散與流行。