女貞子多糖抑制MDA緩解CCl4致小鼠肝損傷

朱 琪， 梁世岳， 王 倩， 王建國(guó)， 周志江， 李海花

（1.天津大學(xué)化工學(xué)院，天津津南300350；2.天津市畜牧獸醫(yī)研究所，天津西青300381；

3.天津師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，天津西青300387；4.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津西青300384）

女貞子多糖（LLPS）是女貞子的重要活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗癌和調(diào)節(jié)免疫等多重功效（Yin等，2017）。由四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)的小鼠化學(xué)性肝損傷模型主要損害肝實(shí)質(zhì)組織，其機(jī)理十分復(fù)雜，與脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)相關(guān) （Jiang等，2018）。本試驗(yàn)研究女貞子多糖對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能、肝損傷后肝臟指數(shù)、肝功能和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）的影響，旨在探明其保肝的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，清潔級(jí)昆明雄性小鼠36只，體重18 g左右，天津市畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物房飼養(yǎng)，預(yù)飼期1周。飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》執(zhí)行。

1.2 藥品的準(zhǔn)備

1.2.1 女貞子多糖的制備 根據(jù)水提純的原理進(jìn)行女貞子多糖的提取，稱(chēng)取40 g的女貞子粉放于320 mL的蒸餾水中，100℃加熱回流2 h，用真空泵抽濾，把分離出的水溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀脫除水分濃縮至濃度約3 g/mL時(shí)停止，此時(shí)加入一定量乙醇（約67 mL），讓乙醇的體積分?jǐn)?shù)占70%，再用玻璃棒進(jìn)行攪拌15 min，后靜置沉淀6 h。真空泵抽濾析出沉淀物，抽濾出得到的濾餅為女貞子多糖，最后放于烘箱中烘干，稱(chēng)重得到4.1 g女貞子多糖，得糖率為10.25%。

1.2.2 四氯化碳注射液的制備 0.1 mL的CCl4添加9.9 mL的液體石蠟混勻，制得1%的CCl4注射液。

1.3 試驗(yàn)分組與造模 攻毒前：清潔型試驗(yàn)昆明小白鼠36只，均雄性，隨機(jī)分為6組，每組6只，即空白對(duì)照組（正常飲水），模型組（CCl4肝損傷），陽(yáng)性藥物組（飲水添加0.25%肝太樂(lè)0.1g/片），女貞子高、中、低劑量組（飲水中添加0.2%、0.1%和0.05%的女貞子多糖）。自由飲水采食，每天記錄體重、飲水量和采食量。

攻毒后：在第14、16、19天和第21天對(duì)除對(duì)照組外的每一只小白鼠皮下注射1%的CCl4液體石蠟溶液10 mL/kg。末次攻毒后全部小鼠禁食12 h后處死解剖分離肝臟稱(chēng)重，按當(dāng)日體重計(jì)算肝臟指數(shù)（mg/g），用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清生化指標(biāo)及MDA。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件錄入，然后用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的單因素方差分析（one-way ANOVA），結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 女貞子多糖對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響 在飲用女貞子多糖試驗(yàn)第14天，攻毒前對(duì)各組小鼠稱(chēng)重，記錄飲水量和采食量，所得結(jié)果見(jiàn)表1。由此可知，添加女貞子多糖中劑量組料重比最低，但與各組比較差異不顯著（P＞0.05）。

表1 女貞子多糖對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響

2.2 女貞子多糖對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響 由表2可知，模型組小鼠肝臟重量與對(duì)照組比較差異極顯著（P＜0.01），與其余各組比較差異顯著（P＜0.05）。從肝臟指數(shù)來(lái)看，模型組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），其他各組均能不同程度的對(duì)抗肝臟指數(shù)的升高，且除低劑量組與模型組比較差異顯著（P＜0.05）外，其余各組與模型組比較均差異極顯著（P＜0.01）。

表2 女貞子多糖對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

2.3 女貞子多糖對(duì)小鼠肝臟功能（血清生化指標(biāo)）的影響 由表3可知，模型組的血清總蛋白水平比對(duì)照組顯著降低（P＜0.05），其余各組均有明顯減輕這種降低的趨勢(shì)（P＜0.05），但各組間差異不顯著（P＞0.05）。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的變化趨勢(shì)基本一致，各藥物組均有緩解轉(zhuǎn)氨酶升高的作用，且差異顯著（P＜0.05），從AST/ALT的值來(lái)看，模型組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），各藥物組除了女貞子高劑量組與模型組差異不顯著（P＞0.05），其余各藥物組差異均顯著高于模型組（P＜0.05）。

2.4 女貞子多糖對(duì)小鼠肝臟和血清MDA含量的影響 由表4可知，各組小鼠肝臟和血清中的MDA變化趨勢(shì)基本一致，模型組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），各藥物組除肝臟女貞子多糖低劑量組顯著低于模型組（P＜0.05），各組均極顯著低于模型組（P＜0.01）。

表3 女貞子多糖對(duì)小鼠肝功能指標(biāo)的影響

表4 女貞子多糖對(duì)小鼠肝臟和血清MDA含量的影響

3 討論

女貞子多糖作為畜禽補(bǔ)充劑，具有藥用和營(yíng)養(yǎng)雙重功效，其豐富的營(yíng)養(yǎng)成分可促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育，降低腹瀉率，提高平均日增重，同時(shí)調(diào)節(jié)脂類(lèi)代謝，增強(qiáng)其生產(chǎn)性能（黃新蘋(píng)等，2016）。本研究發(fā)現(xiàn)，在飲水中添加女貞子多糖對(duì)小鼠的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，說(shuō)明女貞子多糖對(duì)小鼠生長(zhǎng)并無(wú)毒副作用，飲水安全。研究表明，日糧中添加不同水平女貞子萃取物有提高斷奶仔豬日增重、采食量、降低料重比的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）（張超等，2012）。這與本研究的結(jié)果相一致。肝臟指數(shù)是反映肝臟功能的重要指標(biāo)之一，CCl4所致的小鼠肝損傷模型可出現(xiàn)肝組織充血、水腫，脂肪變性，肝指數(shù)上升等一系列的病變（呂娟濤等，2010）。本研究發(fā)現(xiàn)，女貞子多糖各組均可顯著緩解模型組所致的肝指數(shù)升高，且與肝太樂(lè)組作用相一致，這說(shuō)明女貞子多糖的保肝效果和肝太樂(lè)近似。當(dāng)肝臟發(fā)生病變時(shí)，肝細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的功能減退，血漿中蛋白質(zhì)即會(huì)發(fā)生質(zhì)和量的變化。臨床上用各種方法檢測(cè)血漿蛋白的含量來(lái)協(xié)助診斷肝臟疾患，并作為療效觀察，預(yù)后判斷的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠血清總蛋白比對(duì)照組顯著降低，中藥各組均有緩解這種降低的作用，且效果與肝太樂(lè)相當(dāng)。

ALT與AST主要分布在肝臟的肝細(xì)胞內(nèi)，如果肝細(xì)胞壞死，ALT和AST含量就會(huì)升高，其升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度相一致，因此是目前最常用的肝功能指標(biāo)（Zhang等，2018）。本研究結(jié)果顯示，女貞子多糖可以緩解肝損傷所致的ALT和AST升高，但效果不如肝太樂(lè)。

丙二醛為肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，CCl4所致的肝損傷機(jī)制與自由基密切相關(guān)，生物體內(nèi)，自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，氧化終產(chǎn)物為丙二醛，會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性，丙二醛含量的多少說(shuō)明肝臟細(xì)胞膜受到傷害的程度（Wang等，2018）。由結(jié)果可知，女貞子多糖可以顯著降低CCl4所致的肝臟和血清中MDA含量，通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用起到保肝的效果，這與特女貞苷保肝護(hù)肝的機(jī)理相一致（胡冬梅等，2016）。

4 結(jié)論

飲水中添加不同劑量的女貞子多糖對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能無(wú)影響，但可以緩解CCl4所致小鼠的肝臟損傷，這可能與調(diào)控肝臟指數(shù)、肝功能指標(biāo)和肝臟血清中MDA水平有關(guān)。