注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉質量評價

李一蘭 周曉溪 姚羽 田方 張玲變 秦愛方

(山西省食品藥品檢驗所，太原 030001)

注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉為氨芐西林鈉和氯唑西林鈉等量混合的無菌粉針劑，即對革蘭陽性菌和陰性菌有廣譜殺滅作用，又對耐青霉素的金黃色葡萄球菌有效[1-2]，適用于敏感菌所致的呼吸道感染、胃腸道感染、尿路感染、軟組織感染、心內膜炎、腦膜炎、敗血癥等，也可用于化膿性鏈球菌或肺炎球菌與耐青霉素葡萄球菌所致的混合感染。注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉均由無菌原料藥直接分裝而成，規格為0.5g、1.0g、1.5g和2.0g。

注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉為2016年國家評價性抽驗品種，此次抽驗的目的在于客觀地評價國內藥品的質量現狀；客觀分析產品存在的主要質量問題，進而為進一步提高產品質量指明方向[3-5]。氨芐西林鈉有溶媒結晶、冷凍干燥、噴霧干燥3種生產工藝[6]。氯唑西林鈉為溶媒結晶生產工藝。依據氨芐西林鈉原料的生產工藝，本次評價樣品可分為兩種：溶媒結晶氨芐西林鈉樣品與冷凍干燥氨芐西林鈉樣品，分別簡稱為結晶氨芐樣品與凍干氨芐樣品。本文對國內市場上的注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉依據現行藥品質量標準進行檢驗并進行探索性研究，結合標準檢驗及探索檢驗結果對質量進行系統地分析，從而對現行藥品質量標準提出合理的改進建議，為注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉質量標準的進一步完善和今后的監督管理提供重要依據[7-8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters E2695高效液相色譜儀；Mettler AE240電子天平； Mettler Toledo SevenMulti酸度計；Mettler Toledo DL38水分滴定儀；溫控水分活度儀(Novasina，Awsprint)；Ultimate 3000 高效液相色譜儀系列；Thermo Scientific公司Q ExactiveFocusTM組合型四極桿OrbitrapTM質譜儀。

1.2 試藥

氨芐西林對照品：批號130410-201207，含量86.5%；氯唑西林對照品：批號130423-200903，含量91.0%；氨芐西林系統適用性對照品：批號130618-201202；均購自中國食品藥品檢定研究院。45批次注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉為2016年國家藥品評價性抽驗樣品(其中凍干氨芐樣品43批次，結晶氨芐樣品2批次)，另有2批次結晶氨芐樣品為調研樣品，分別抽自國內6家生產企業。水為自制超純水，乙腈為Dikma公司生產的色譜純，其余所用試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 法定檢驗

本次抽驗的樣品按照國家藥品標準化學藥品地方標準上升國家標準第七冊[9]進行檢驗。主要檢驗項目為水分、有關物質、含量測定等。

2.2 探索性研究

根據法定檢驗結果，結合文獻報道[8,10-11]以及品種特點、專題調研等情況，重點開展晶型、水分與水活度、有關物質等項目的探索性研究。

2.2.1 晶型測定

選取不同生產工藝樣品及原料，采用粉末X-射線衍射測定晶型。

2.2.2 水分與水活度

分別將不同生產工藝的樣品各2批次置于相對濕度75%的環境中，開蓋放置，取樣時間為間隔2h，分別選用水分測定儀和溫控水分活度儀測定其水分和25℃水活度。

管道輸水灌溉和滴灌的單井控制面積應根據公式（1）計算，并結合片區的空間分布確定，原則上采用的單井控制灌溉面積不小于計算值的10畝。噴灌工程的單井控制面積的確定還應結合噴灌機的選型確定。審查中要嚴格控制單井控制面積，一方面盡量少打井減少投資，另一方面可促進節水，避免水資源的浪費。

2.2.3 有關物質

(1)有關物質測定：現行標準采用等度洗脫法，不能有效分離雜質，參照2015年版中國藥典二部[12]氨芐西林鈉方法建立本品有關物質梯度洗脫法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠(4.6mm×250mm, 5μm)為填充劑；流動相A為12%乙酸溶液-0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈-水(0.5:50:50:900, V/V/V/V)；流動相B為12%乙酸溶液-0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈-水(0.5:50:400:550, V/V/V/V)；檢測波長為254nm。先以流動相A-流動相B(85:15, V/V)等度洗脫，待氨芐西林峰洗脫完畢后立即按表1進行線性梯度洗脫。

(2)雜質的確證：通過UPLC-MS切換技術在線脫鹽，一維色譜條件參照有關物質測定，二維色譜條件為色譜柱AcclaimTMPolar Advantage ⅡC18(4.6mm×50mm, 3μm)；流速: 0.5mL/min；柱溫:30℃；流動相為水:乙腈=80:20(V/V)。利用質譜進行雜質一級和二級掃描：根據二維上的出峰時間，設置質譜閥切換參數，進行一級和二級掃描。質譜條件：鞘氣流速：40L/min；輔氣流速：5L/min；反吹氣流速：1L/min；噴霧電壓：3.5kv；毛細管溫度：320℃；輔氣加熱溫度：400℃；全掃描：分辨率：35000；掃描范圍：200-2000。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Linear gradient elution program

2.2.4 穩定性試驗

分別將不同生產工藝樣品進行加速試驗，在40℃條件下分別放置10、20和30d，對溶液的澄清度與顏色、含量、有關物質等進行測定。

3 結果與討論

3.1 法定檢驗結果

47批次樣品按現行藥品質量標準檢驗均符合規定，合格率為100%。水分、有關物質等主要檢查項目與產品質量密切相關，因此對其結果進行統計分析。

3.1.1 水分

對47批次樣品的水分數據進行統計分析，結晶氨芐樣品為1.98%～2.02%，凍干氨芐樣品為2.35%～2.64%，結晶氨芐樣品水分低于凍干氨芐樣品。

3.1.2 有關物質

對47批次樣品的總雜質數據(等度洗脫)進行統計分析，結晶氨芐樣品總雜質量為0.54%～0.63%，凍干氨芐樣品總雜質量為1.34%～2.07%，結晶氨芐樣品總雜質量低于凍干氨芐樣品。

3.2 探索性研究

3.2.1 晶型測定

結晶氨芐西林鈉原料具有多個特征衍射峰為結晶型粉末，凍干氨芐西林鈉原料無特征衍射峰出現為無定型粉末；氯唑西林鈉原料為結晶型粉末。結晶氨芐樣品均具有相應特征衍射峰，凍干氨芐樣品僅呈現氯唑西林鈉特征衍射峰(圖1)。

3.2.2 水分與水活度

圖1 粉末X-射線衍射圖Fig.1 Powder X-ray diffraction

凍干氨芐樣品與結晶氨芐樣品8h水活度和水分平均上升率均存在一定差異，結晶氨芐樣品8h水分平均增長率1.15%/h，水活度平均增長率0.034/h；凍干氨芐樣品8h水分平均增長率1.22%/h，水活度平均增長率0.056/h；凍干氨芐樣品初始水活度明顯低于結晶氨芐樣品，8h時其水活度與結晶氨芐樣品一致，其增長速率高于結晶氨芐樣品(圖2)；一般認為樣品在水活度越小時質量越穩定，本次試驗發現，初始水活度低的凍干氨芐樣品穩定性次于初始水活度高的結晶氨芐樣品，提示晶型對本品質量的影響大于水活度的影響[13]。

圖2 不同生產工藝樣品水活度及水分測定結果比較圖Fig.2 The comparison of water activity and water determination results in samples of different production processes

3.2.3 有關物質

為了能夠更好地反映樣品的雜質譜，對現行標準的有關物質測定方法進行改進，建立了洗脫能力更強，分離效果更好的梯度洗脫法，與現行標準的等度洗脫法(圖3)比較，其洗脫能力更強，檢出的雜質總量更多(圖4)。47批次樣品雜質個數和雜質總量均明顯增加(雜質總量增加了0.02%～1.67%)。

探索性研究結果表明，利用氨芐西林系統適用性對照品、氯唑西林雜質對照品及通過UPLC-MS切換技術在線脫鹽實現磷酸鹽液相條件雜質的定性，研究樣品16個雜質(其中雜質3、9、15、16由UPLCMS確證)并結合原料藥雜質檢出情況和破壞性試驗對雜質結構及來源進行了歸屬(表2)。通過主成分自身對照法計算各雜質含量，分析47批次樣品的雜質檢出和分布情況(圖5)。圖5顯示不同生產工藝樣品均能檢出這9個雜質，其中編號為1(氨芐西林噻唑酸)、5(氨芐西林閉環二聚體)、6(未知雜質6)、9(氨芐西林閉環三聚體)、15(6-氨基青霉烷酸氯唑西林酰胺)、16(未知雜質16)為主要雜質，且各雜質平均含量均大于0.1%；其中5號雜質為凍干氨芐樣品最大單個雜質，16號雜質為結晶氨芐樣品最大單個雜質[14-16]。

樣品生產工藝為無菌原料直接混合分裝，結合原料藥和制劑雜質檢出情況，制劑的雜質均與原料藥及其降解物一致，提示原料藥的質量影響制劑質量。

3.2.4 穩定性考察

圖3 注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉有關物質等度洗脫典型圖譜Fig.3 Isocratic elution program system HPLC chromatogram of ampicillin sodium and cloxacillin sodium for injection in related substances

圖4 注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉有關物質梯度洗脫典型圖譜Fig.4 Gradient elution program system HPLC chromatogram of ampicillin sodium and cloxacillin sodium for injection in related substances

圖5 不同生產工藝樣品較大9個雜質平均含量比較圖Fig.5 Thecomparisonof 9 impurities contents in ampicillin sodium and cloxacillin sodium

兩種生產工藝的樣品在40℃的條件下進行加速試驗[4]。比較樣品中的特定雜質氨芐西林閉環二聚體，總雜質、氨芐西林和氯唑西林純度變化，發現凍干氨芐樣品的閉環二聚體、總雜質量均增加，氨芐西林純度降低，氯唑西林純度無明顯變化；結晶氨芐樣品閉環二聚體，總雜質、氨芐西林和氯唑西林純度無明顯變化。提示凍干氨芐樣品受存儲溫度影響較大，在存儲過程中不穩定。

3.2.5 相關分析

將47批次樣品的水分、氨芐西林閉環二聚體、雜質總量、純度檢驗結果和生產工藝類型等進行多因素相關分析(見表3)表明：①不同氨芐西林鈉原料生產工藝與樣品的水分、氨芐西林閉環二聚體、雜質總量、氨芐西林純度等均顯著相關(P＜0.01)，提示氨芐西林鈉原料的生產工藝是影響本品質量的重要因素；②樣品的氨芐西林純度與水分、雜質總量等均顯著相關，提示水分亦是影響樣品純度變化的主要原因。

表2 注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉雜質的歸屬Tab.2 The impurity ascription of ampicillin sodium and cloxacillin sodium for injection

4 小結

本次評價性抽驗結果顯示，注射用氨芐西林鈉氯唑西林鈉總體質量較好，產品合格率100%，但現行質量標準需進一步完善，建議采用梯度洗脫的方法進行有關物質檢查，并對氨芐西林閉環二聚體等特定雜質進行控制。探索性研究表明采用不同生產工藝氨芐西林鈉原料藥生產的樣品質量存在明顯差異，凍干氨芐樣品質量不及結晶氨芐樣品，且更易受溫度的影響，提示原料藥的質量影響制劑質量。因此，應引導企業首選溶媒結晶工藝氨芐西林鈉原料。

表3 主要項目檢測結果多因素相關分析Tab.3 Multi-factors correlation analysis of the maior items determination results