GC-MS法測定鹽酸金霉素眼膏中的15種鄰苯二甲酸酯

陳希 段和祥 劉緒平

(江西省藥品檢驗檢測研究院，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029)

鄰苯二甲酸酯類物質(phthalate acid esters, PAEs)作為增塑劑被普遍應用于食品包裝材料、塑料玩具和塑料醫療器械中[1-3]。對PAEs的安全性評估表明，其對動物明確的有致畸和致突變作用，且具有類環境激素功效，對機體顯示出較強的內分泌干擾性[4-8]。衛生部公告(2011年第16號)已明確將鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)等17種PAEs規定為違法添加的非食品物質，禁止在食品中使用。但由于食品包裝材料中的PAEs在使用中會遷移到食品中，衛辦監督函(2011年第551號)又進一步規定食品包裝材料中的PAEs應當嚴格執行《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛生標準》(GB9685)中規定的種類、范圍和特定遷移量或殘留量的要求，且不得用于油脂類食品和嬰幼兒食品；同時規定食品、食品添加劑中的DEHP、DINP和DBP最大殘留量分別為1.5、9.0和0.3mg/kg[9-11]。

鹽酸金霉素眼膏中凡士林和液體石蠟占處方量的95%以上，上述輔料收載于中國藥典2015年版，但均未對PAEs進行控制[12-13]。凡士林和液體石蠟均為弱極性化合物，易富集PAEs，如采用了不恰當的包裝材料等，可能導致PAEs污染藥品。本文采用氣相色譜-質譜法(GC-MS)對鹽酸金霉素眼膏中的PAEs進行檢測，以評價產品是否有被PAEs污染的風險。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B-7000C氣相色譜質譜聯用儀(Aglient公司)，MS205DU電子天平(Mettler Toledo公司)，N-EVAP24氮吹儀(Organomation公司)，DL-6000B離心機(上海安亭科學儀器廠)，GENIUS 3渦旋振蕩器(IKA公司)。10mL具塞刻度試管，所用玻璃儀器清凈后，用超純水清洗3次，丙酮浸泡1h后再在200℃下烘烤2h，冷卻后備用。

1.2 材料和試劑

正己烷、乙腈為色譜純，鄰苯二甲酸酯混合標準溶液(15種組分名稱詳見表1，來源：上海安譜試驗科技股份有限公司，批號：312542，各組分濃度均為1000μg/mL)。混合標準儲備溶液：移取鄰苯二甲酸酯混合標準溶液0.5mL置于50mL量瓶中，用乙腈稀釋并定容至刻度，作為混合標準儲備溶液(10μg/mL)。樣品為210批次鹽酸金霉素眼膏(2018年國家藥品計劃抽驗樣品)。

2 方法與結果

表1 鄰苯二甲酸酯定量和定性選擇離子表Tab.1 Quantitative and qualitative selection of PAEs ion meter

2.1 儀器條件

色譜條件：DB-5MS毛細管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，載氣：高純氦氣。進樣口溫度：260℃；進樣方式：直接進樣(不分流)；進樣體積：1μL；流速：1.0mL/min。升溫程序：初始柱溫60℃，保持1min；以20℃/min升溫至220℃，保持1min；再以5℃/min升溫至250℃，保持1min；再以20℃/min升溫至290℃，保持7.5min。

質譜條件：離子源溫度：230℃；電離能量：70eV，GC/MC傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：7min；電離方式：電子轟擊源；監測方式：選擇離子監測，監測離子詳見表1。

2.2 樣品提取

稱取混合均勻的眼膏1.0g，置于10mL具塞刻度試管中，加乙腈飽和的正己烷6mL，渦旋振蕩使基質溶解，2000r/min離心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度試管中，加正己烷飽和的乙腈3mL，振蕩提取1min，收集乙腈層。再用正己烷飽和的乙腈按上述步驟提取2次，合并乙腈層，渦旋混勻，氮吹盡干，再補加乙腈至1mL，渦旋混勻作為待測溶液(必要時離心)。

2.3 線性

移取混合標準儲備溶液適量，加乙腈稀釋成濃度為50、100、250、500、750、1000、2000和4000ng/mL的混合標準曲線系列溶液。

分別精密量取上述系列混合標準溶液各lμL，分別注入GC-MS儀，記錄質譜圖。以系列各組分標準溶液的濃度為橫坐標，各組分峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。各組分分離效果較好，且能在30min內完成分析，各組分的總離子流圖詳見圖1。繪制的標準曲線結果表明，各組分在相應濃度范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.997，詳見表2。

2.4 檢出濃度和定量濃度

圖1 鄰苯二甲酸酯標準混合溶液總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of PAEs standard mixed solution

表2 鄰苯二甲酸酯線性方程及其相關系數Tab.2 The linear equations of PAEs and their correlation coef fi cients

分別移取混合標準儲備溶液適量，加乙腈稀釋成濃度為15和50ng/mL的混合標準溶液，精密吸取上述兩種標準混合溶液各1μL，注入GC-MS儀，記錄質譜圖。15和50ng/mL的混合標準溶液各組分在定量離子圖譜中信噪比分別滿足1:3和1:10，可以分別作為15種鄰苯二甲酸酯類物質檢測儀器的檢出限和定量限。按“2.2”項步驟制備樣品時，15種鄰苯二甲酸酯類物質檢測檢出濃度可定為0.03mg/kg，定量濃度可定為0.1mg/kg。

2.5 精密度

精密量取濃度約為500ng/mL的混合標準溶液1μL，連續進針6次，記錄質譜圖，計算各組分峰面積的相對標準偏差(RSD)，結果15種鄰苯二甲酸酯的RSD均小于5%，結果表明儀器精密度良好。

2.6 準確度和重復性

取混合均勻的空白試樣1.0g，置于10mL具塞刻度試管中，加乙腈飽和的正己烷6mL，渦旋振蕩使基質溶解，2000r/min離心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度試管中，加濃度為1000ng/mL的混合標準溶液1mL后再加正己烷飽和的乙腈2mL，振蕩提取1min，收集乙腈層。再用正己烷飽和的乙腈按上述步驟提取2次，合并乙腈層，渦旋混勻，氮吹盡干，再補加乙腈至1mL，渦旋混勻作為待測溶液平行制備6份。15種鄰苯二甲酸酯類化合物的平均回收率為71%～117%，回收率的RSD為0.8%～5.2%，表明本方法準確度和重復性結果良好，結果詳見表3。

2.7 樣品測定

對210批鹽酸金霉素眼膏進行檢測，僅27批次未檢出鄰苯二甲酸酯類物質，其余183批次樣品均檢測出一定濃度的的DIBP、DBP和DEHP。樣品中DBP含量大于10mg/kg的共有9批次(最高為48mg/kg)，均為C企業樣品，涉及6個批號；樣品中DEHP含量大于50mg/kg的共有5批次(最高為80mg/kg)，均為F企業樣品，涉及2個批號。統計數據詳見表4～5。

3 討論

3.1 測定方法的優化

本文采用GC-MS測定了鹽酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP等15種PAEs，具有前處理簡單、分析時間快、檢出濃度低、回收率高、重復性好等特點。基于樣品中鹽酸金霉素不能溶于正己烷的特點，樣液制備時先用乙腈飽和正己烷溶解眼膏基質，再通過離心沉淀去除鹽酸金霉素。由于正己烷在乙腈中具有一定的溶解性，如果樣液制備時采用乙腈萃取，可導致正己烷層體積逐漸減少，乙腈層最終提取體積超過9mL，經氮吹液體更加渾濁，基質干擾更強烈；本研究采用正己烷和乙腈相互飽和的溶液溶解基質并萃取，能一定程度解決上述問題。

表3 鄰苯二甲酸酯類物質測定準確度和重復性結果表Tab.3 Determination of accuracy and repeatability of PAEs

表4 鹽酸金霉素眼膏測定數據(1)Tab.4 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (1)

表5 鹽酸金霉素眼膏測定數據(2)Tab.5 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (2)

3.2 DBP、DEHP、DIBP安全性問題

經調研，鹽酸金霉素眼膏的生產工藝中均未涉及到PAEs。此次210批鹽酸金霉素眼膏中，DEHP和DBP含量最高值分別為80和48mg/kg，DEHP和DBP檢出平均值為7.8和2.5mg/kg，遠高于上述成分在我國食品批準中的限值和包裝材料所允許的遷移值。C企業個別批次的DBP和F企業個別批次的DEHP含量異常高，且這兩家企業DBP和DEHP檢出平均濃度也為7家企業中最大。此外，產品中DIBP的檢出率高達55%，檢出濃度平均為0.12mg/kg。鑒于GB 9685-2016已將DIBP從鄰苯二甲酸酯類物質的使用范圍中刪除，提示其可能存在一定的安全風險。上述結果提示，鹽酸金霉素眼膏生產企業尚未意識到產品已被PAEs污染及可能帶來的安全風險。鑒于PAEs存在的致突變、致癌作用和生殖毒性等危害，企業有必要對上述現象進行自查，確定鹽酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP的來源，進而控制產品被PAEs污染的風險。