國產硬脂酸紅霉素口服固體制劑質量分析

傅蓉 劉楊 易大為 孫苓苓 張亞杰

(遼寧省藥品檢驗檢測院，沈陽 110036)

硬脂酸紅霉素(erythromycin stearate)為第一代大環內酯類抗菌藥，是紅霉素的硬脂酸鹽，其合成工藝為紅霉素鹽基在丙酮(或95%乙醇)溶液中和過量的硬脂酸反應，再加水沉淀得到不溶性的鹽。片劑由美國Arbor Pharmaceuticals LLC公司生產研制，目前國內已有3家原料藥和36家制劑生產企業。未列入國家基本藥物。本品系抑菌劑，在高濃度時對某些細菌也具殺菌作用，但僅對分裂活躍的細菌有效。主要機理為：透過細菌細胞膜，與細菌核糖體的50S亞基成可逆性結合，從而使細菌蛋白質合成受抑制。硬脂酸紅霉素片(膠囊、顆粒)是2018年國家藥品抽驗品種。本文通過對上市硬脂酸紅霉素片(膠囊、顆粒)的標準檢驗與探索性研究，從安全性、有效性和質量可控性等方面對其進行全面質量分析評價。

1 材料與方法

1.1 藥品

據國家食品藥品監督管理總局網站數據庫檢索，硬脂酸紅霉素片的國內生產企業共28家，批準文號49個；硬脂酸紅霉素膠囊的國內生產企業共7家，批準文號8個；硬脂酸紅霉素顆粒的國內生產企業共1家，批準文號1個。本次抽驗從全國20個省(直轄市、自治區)共抽到59批次樣品，其中片劑11批，涉及1個生產企業；膠囊劑15批，涉及2個生產企業；顆粒劑33批，涉及1個生產企業。59批樣品抽樣環節統計分別為生產企業1.7%，經營單位39.0%，醫療機構59.3%。本次抽取硬脂酸紅霉素片的規格為0.125g；硬脂酸紅霉素膠囊的規格為0.1g和0.125g；硬脂酸紅霉素顆粒的規格為50mg。1家硬脂酸紅霉素原料藥生產企業提供3批原料藥。

1.2 對照品

紅霉素對照品(以紅霉素計含量為93.3%，批號：130307-201417)，紅霉素系統適用性對照品(批號：130670-201501)，購自中國食品藥品檢定研究院；紅霉素A(純度：96.7%，批號：E130500)為歐洲藥典標準物質；紅霉素B(純度：98%，批號：R05250)，紅霉素C(純度：97%，批號：F4L354)，N-去甲基紅霉素A(雜質B，批號：H0L401)為美國藥典標準物質；脫水紅霉素A(雜質D，批號：3-GAB-37-1)，紅霉素F(雜質A，批號：IHMS-FCP-20170812-07)，紅霉素E(雜質C，批號：IHMS-ECP-20170823-01)，紅霉素A烯醇醚(雜質E，批號：6-GAC-65-1)，偽紅霉素A烯醇醚(雜質F，批號：3-ZPK-76-1)來源于加拿大Toronto research chemical；硬脂酸(分析純，批號：F20080821)國藥集團化學試劑有限公司產品；棕櫚酸(分析純，批號：850726)北京化工廠產品。

1.3 試藥和試劑

乙腈、甲醇為色譜純，美國天地公司產品；磷酸氫二鉀、磷酸、乙酸銨為分析純，國藥集團化學試劑有限公司產品。

1.4 儀器

Waters 2695_2480系列高效液相色譜儀；Shimadzu液相色譜系統，LC-20A，SIL-20A，CTO-20A，SPD-20A，LC solution色譜工作站；Waters G2 Q-TOF飛行時間質譜；Mettler XP-205電子分析天平；Waters XBridge C18柱(250mm×4.6mm, 5μm)；Waters XTerra RP C18柱(4.6mm×250mm, 3.5μm)；Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm, 5μm)。

1.5 法定檢驗方法

按照ChP 2015二部進行法定檢驗。

1.6 探索性研究方法

根據專題調研、文獻檢索和標準檢驗結果及分析等情況，開展了組分及有關物質、溶出度檢查等研究。

1.6.1 有關物質

參考ChP2015紅霉素項下組分及有關物質檢查液相色譜條件，對4家生產企業59批抽檢樣品、及3批原料藥的組分及有關物質進行考察，研究雜質來源，對結果進行評價。兩種方法色譜條件見表1。

1.6.2 溶出度

參考ChP2015、美國藥典40版(以下簡稱USP40)、BP2017標準，溶出度檢查法，進行溶出條件和測定方法的篩選和確認。分別考察不同溶出方法，不同溶出介質，不同轉速及不同測定方法對測定結果的影響。采用新建立的溶出度檢查方法，對19批樣品溶出度進行測定。國內外標準及新修訂標準溶出度檢查條件見表2。

2 結果

2.1 法定檢驗結果及分析

硬脂酸紅霉素片(膠囊、顆粒)現行法定標準為ChP2015二部，片劑檢驗項目包括：性狀、鑒別、紅霉素B、C組分及有關物質、溶出度、重量差異、含量測定；膠囊劑檢驗項目包括：鑒別、紅霉素B、C組分及有關物質、溶出度、重量差異、水分、含量測定；顆粒劑檢驗項目包括：性狀、鑒別、紅霉素B、C組分及有關物質、酸堿度、干燥失重、裝量差異、含量測定。對全部樣品按法定標準檢驗， 59批次樣品有51批次結果符合規定，合格率86.4%；有8批次結果不符合規定，不合格率13.6%，不合格項目為水分和(或)溶出度檢查項。法定檢驗性狀及定量指標結果見表3，對與產品質量密切相關的主要定量檢查項目如有關物質、水分(干燥失重)、溶出度和含量測定等結果進行統計分析如下。

2.1.1 組分和有關物質

按法定標準檢驗，11批硬脂酸紅霉素片的紅霉素B、C組分分別在0.8%～1.0%、0.3%～1.9%之間；雜質I、烯醇醚、單個雜質分別在0.02%～0.06%、未檢出～0.4%、0.7%～1.1%之間；雜質總量分布在1.0%～3.3%的范圍內，均符合規定，合格率100%。11批片劑樣品均為A廠產品，對樣品雜質測定結果進行統計分析，結果顯示，紅霉素B、雜質I、其他雜質總量的測定結果比較集中，紅霉素C、紅霉素A烯醇醚、其他單個雜質各有1批次的檢測數據離群，但這些離群數據均低于群數據的中間值。硬脂酸紅霉素片組分及有關物質各批次樣品數據相對比較較集中，生產工藝控制較好。

表1 色譜條件比較Tab.1 Comparison table of chromatographic condition

表2 溶出度檢查方法比較Tab.2 Comparison of the method of dissolution

表3 硬脂酸紅霉素片(膠囊、顆粒)法定檢驗定量指標結果Tab.3 Statutory inspection indexes of erythromycin stearate tablets (capsules and granules)

15批硬脂酸紅霉素膠囊的紅霉素B、C組分分別在0.4%～1.2%、1.6%～2.7%之間；雜質I、烯醇醚、單個雜質分別在未檢出～0.1%、0.3%～0.6%、0.8%～1.7%之間；雜質總量分布在0.9%～2.0%的范圍內，均符合規定，合格率100%。其中2批樣品為B廠生產，其余13批為C廠生產，對C廠生產的13批樣品雜質測定結果進行統計分析，結果顯示，各批次產品組分及有關物質的檢測結果均低于限度值，紅霉素C、單個雜質和其他雜質和項有向上離群數據，提示這些批次樣品中組分和雜質含量較大，偏離中心值較高。但總體來看，該廠家各批次產品數據較集中，組分及有關物質在可控范圍內。

33批硬脂酸紅霉素顆粒的紅霉素B、C組分分別在0.6%～2.1%、0.4%～3.2%之間；雜質I、烯醇醚、單個雜質分別在未檢出～2.3%、0.1%～3.0%、0.7%～2.3%之間；雜質總量分布在0.9%～4.9%的范圍內，均符合規定，合格率100%。33批樣品均為C廠產品，對樣品雜質測定結果進行統計分析。結果顯示，樣品各組分及有關物質的檢測結果均低于限度值，但雜質I、紅霉素烯醇醚以及其他單個雜質均有向上離群數據。顆粒劑的雜質水平較片劑、膠囊劑大。硬脂酸紅霉素口服固體制劑組分及有關物質典型色譜圖見圖1。

圖1 硬脂酸紅霉素口服固體制劑組分及有關物質典型色譜圖Fig.1 Components and related substances chromatogram of erythromycin stearate for oral solid preparations

由前期調研可知，目前國內硬脂酸紅霉素只有1家原料藥生產企業還在生產，此次國家藥品抽驗工作抽到的制劑樣品所用的原料，以及探索性研究所用的原料藥，均來自該企業，但生產批號不同。硬脂酸紅霉素起始原料為紅霉素，紅霉素A、B、C 3個組分是發酵菌種決定的，在硬脂酸紅霉素中變化應不大。從原料藥生產企業提供的材料看，起始原料紅霉素也是該企業自己發酵生產的。統計片劑、膠囊劑和顆粒劑企業的紅霉素B、C組分的測定結果，紅霉素B組分總體在0.4%～2.1%之間，紅霉素C組分在0.3%～3.2%之間，對結果進行統計分析，紅霉素B組分均值為1.04，紅霉素C組分均值為2.12，二者均基本呈正態分布，原料藥生產工藝較穩定。

從測定結果看，顆粒劑的雜質水平總體較片劑、膠囊劑大，尤其是烯醇醚雜質。有研究表明烯醇醚是工藝的降解雜質，在顆粒劑中變異最大，提示與其制劑工藝控制有關，顆粒劑企業應關注生產工藝，控制烯醇醚產生的關鍵步驟。

2.1.2 水分或干燥失重

硬脂酸紅霉素片，現行法定標準無水分檢查項。硬脂酸紅霉素膠囊，15批樣品水分測定結果分布在2.5%～5.2%的范圍內?，F行標準規定，水分限度值為不得過4.0%，有8批次不符合規定，不合格率53.3%，不合格樣品均為C廠產品。對C廠13批樣品水分測定結果進行統計分析，測定結果比較集中，離散程度較小，但中值為4.2%，已經超出限度值。分析水分不合格原因，主要因素為處方影響，次要因素為樣品運輸及貯存環境控制不好。除不合格批次外，C廠其余5批次水分測定結果也都是處于“邊緣合格”。該廠產品處方中含有幾種具有較強引濕性的輔料，在樣品運輸及貯存過程中未嚴格控制環境條件，易造成樣品吸水，可能導致產品水分超限。此外，通過SPSS軟件分析膠囊劑水分與有關物質相關性，結果表明水分與雜質I、烯醇醚、單雜及總雜均無明顯相關性。即水分大的樣品，有關物質未見明顯增加。

硬酯酸紅霉素顆粒，33批樣品干燥失重測定結果分布在0.1%～0.7%的范圍內?，F行標準規定，減失重量不得過2.0%，結果均符合規定，合格率100%。對33批樣品進行頻數分布圖分析，減失重量均值為0.43%，最小值為0.1%，最大值為0.7%，69.7%的樣品減失重量為0.4%～0.6%。干燥失重結果的頻數分布圖基本呈正態分布，該項目限度設置合理。

2.1.3 溶出度

硬脂酸紅霉素片，11批樣品按法定標準檢驗溶出度，結果全部符合規定，合格率為100%。以每批樣品的平均溶出量為變量，對11批樣品溶出度結果統計分析，結果表明，所有抽樣批次平均溶出量均值為96%，最小值為92%，最大值為106%，全部樣品平均溶出量大于90%，測定結果基本呈正態分布，各批次產品數據較集中，批間差異不大；以每批6片樣品的溶出量RSD為變量，進行統計分析，RSD結果在1.09%～4.8%范圍內，均小于5%?？傮w上看，各批次批內差異較小。按法定標準檢驗，硬脂酸紅霉素片總體溶出情況較好，產品工藝較穩定。

硬脂酸紅霉素膠囊，15批樣品按法定標準檢驗溶出度，結果有11批符合規定，合格率為73.3%；4批不符合規定，不合格率為26.7%，不合格樣品均為C廠產品。以每批樣品的平均溶出量為變量，對15批樣品頻數分布圖分析。結果表明，平均溶出量均值為80%，最小值為61%，最大值為94%，由檢驗結果看，按法定標準檢驗，硬脂酸紅霉素膠囊總體溶出情況較差。以每批6粒樣品的溶出量RSD為變量，對15批樣品進行頻數分布圖分析，RSD結果在2.3%～14.1%范圍內。其中，6粒溶出量RSD結果在5%以上的占比73.3%，且均來自于C廠。進一步對C廠13批樣品溶出度測定結果進行統計分析，測定結果在61%～91%范圍內，數據結果差異較大，提示各批次樣品批間差異大。分析溶出度不合格原因，主要因素為處方影響，次要因素為工藝影響。輔料種類和配比的不當，可能導致藥物在溶出條件下不能有效崩解釋放。檢驗過程中發現，該企業樣品囊殼溶解后，膠囊內容物在轉籃內呈塊狀且不分散，導致樣品不能有效崩解釋放，樣品溶出不完全。鑒于該廠產品處方中含有幾種具有較強引濕性的輔料，提示C廠產品批內和批間差異較大，可能與其在生產過程中對工藝等細節控制不夠有關。

硬脂酸紅霉素顆粒，現行法定標準中無溶出度檢查項。

2.1.4 含量測定

硬脂酸紅霉素片，依據現行標準對11批樣品進行檢驗，均符合規定，合格率為100%。以每批樣品的含量為變量，對檢驗結果進行統計分析。11批樣品的含量均值為103.65%，測定結果在102.3%～106.3%范圍內，均在均值±2σ(100.9%～106.4%)范圍內，離散程度較小，總體上看，各批次產品數據較集中。檢測方法及限度制定較合理。

硬脂酸紅霉素膠囊，依據現行標準對15批樣品進行檢驗，均符合規定，合格率為100%。以每批樣品的含量為變量，對檢驗結果進行統計分析。15批樣品的含量均值為104.28%，含量的測定結果在102.3%～106.3%范圍內，均在均值±2σ(100.1%～107.5%)范圍內，離散程度較小，總體上看，各批次產品數據較集中。檢測方法及限度制定合理。

硬脂酸紅霉素顆粒，依據現行標準對33批樣品進行檢驗，均符合規定，合格率為100%。以每批樣品的含量為變量，對檢驗結果進行統計分析。33批樣品的含量均值為103.21%，含量的測定結果在100.0%～106.2%范圍內，均在均值±2σ(100.0%～106.2%)范圍內，離散程度較小，總體上看，各批次產品數據較集中。檢測方法及限度制定合理。

2.2 探索性研究結果及分析

2.2.1 組分及有關物質

新修訂組分和有關物質測定方法與現行標準差別較大，方法學研究和樣品的檢測結果表明，新修訂方法較現行標準方法分離并檢出的已知雜質更多，檢測靈敏度更高，適用性更好。現行標準原料藥控制紅霉素A、B、C組分、偽紅霉素A烯醇醚、紅霉素A烯醇醚、其他單個雜質和其他雜質和，共7項；制劑控制紅霉素B、C組分、偽紅霉素A烯醇醚、紅霉素A烯醇醚、其他單個雜質和其他雜質和，共6項。新方法原料控制紅霉素A、B、C組分，雜質A～D、偽紅霉素A烯醇醚、紅霉素A烯醇醚、其他單個雜質和其他雜質和，共11項；制劑控制紅霉素A、B、C組分，雜質A～D、偽紅霉素A烯醇醚、紅霉素A烯醇醚、其他單個雜質，共10項。典型色譜圖見圖2。該圖為按新修訂檢驗硬脂酸紅霉素組分及有關物質系統適用性典型色譜圖。

從破壞性試驗的結果顯示，本品制劑對酸、堿、加熱和氧化條件均較為敏感，提示該品種在生產、銷售、儲運環節，均應注意避免接觸上述不利因素，保證藥品質量。

2.2.2 溶出度

前期標準比對發現，USP、BP與ChP溶出度測定方法差別較大，具體見表2。而現行標準中，溶出度檢查方法存在一定缺陷，主要表現為：硬脂酸紅霉素膠囊采用籃法，在檢測過程中發現，部分廠家樣品，膠囊殼溶解后，內容物易堵塞籃網孔，造成崩解釋放不完全，導致溶出量較低；測定方法為硫酸顯色法，方法靈敏度不高、專屬性不強；此外，硬脂酸紅霉素顆粒無溶出度檢查項。為此，對硬脂酸紅霉素制劑溶出度檢查方法進行考察研究，建立新的溶出度檢查方法。以pH6.0磷酸鹽緩沖液為溶出介質，采用槳法，測定方法選用靈敏度專屬性更強的HPLC方法，采用標準品，按外標法以紅霉素A組分計算溶出量。

采用該方法對4個廠家、19批次(其中片劑4批、膠囊劑7批，顆粒劑8批)樣品進行溶出度測定，進一步評價硬脂酸紅霉素制劑質量。以75%為限度，按新修訂方法檢驗，19批樣品溶出度均符合規定。

其中片劑和膠囊劑兩種方法測定結果對比見表4。測定結果經SPSS統計分析軟件進行配對t檢驗，硬脂酸紅霉素片P=0.242＞0.05，認為兩種方法不存在顯著性差異。硬脂酸紅霉素膠囊P=0.971＞0.05，認為兩種方法也不存在顯著性差異。兩種方法6粒溶出量RSD結果相當，其中C廠生產的硬脂酸紅霉素膠囊按新修訂方法測定，6粒溶出量RSD結果偏大，提示樣品批內差異較大，和ChP2015方法測定結果一致。

3 討論

本次國家藥品抽驗采取了法定檢驗結合探索性研究模式對國產硬脂酸紅霉素制劑，從標準到質量的現狀、質量影響因素各方面進行了較全面的分析和評價。由法定檢驗可知4個生產企業59批樣品按現行標準檢驗，合格率為86.4%，不合格樣品為C廠膠囊劑，不合格項目為水分和(或)溶出度。按法定標準檢驗目前國內硬脂酸紅霉素制劑的處方和生產工藝有待進一步優化和提高，總體質量情況一般，質量標準有待提高。

修訂了組分和有關物質檢查項，兩種方法比較，新修訂方法分離并檢出的已知雜質更多，檢測靈敏度更高，適用性更好，能夠更好地從安全性方面控制產品質量。

修訂了片劑(膠囊劑)溶出度檢查方法，增加了顆粒劑溶出度測定方法，能夠更好地從有效性方面控制產品質量。比較兩種方法，主要不同點為：所用溶出介質不同(法定標準采用0.1mol/L鹽酸溶液；新修訂標準采用pH6.0磷酸鹽緩沖液)，溶出方法不同(法定標準采用籃法；新修訂標準采用槳法)，測定方法不同(法定標準采用硫酸顯色、紫外測定；新修訂標準采用HPLC法)。相比于法定標準，新修訂標準能相對合理地模擬藥物在體內釋放吸收過程，測定方法準確度和專屬性也較強。

4 存在主要問題及建議

4.1 批準文號閑置問題

圖2 按新修訂檢驗硬脂酸紅霉素組分及有關物質系統適用性典型色譜圖Fig.2 Components and related substances chromatogram of erythromycin stearate

表4 片劑和膠囊劑兩種方法測定溶出度結果對比Tab.4 Result of dissultion of erythromycin stearate tablets and capsules by 2 methods

此次抽取的硬脂酸紅霉素制劑共計59批，共涉及4個生產企業和5個批準文號。抽樣涉及的生產企業數占總生產企業數的11.1%，抽樣涉及批準文號數占總批準文號數的8.6%。這與我們前期調研的情況相吻合，大部分生產企業近3年未生產該品種，硬脂酸紅霉素制劑目前在市場占有率較低，獲取批準文號的生產企業中僅有少數的企業仍在生產，且產量正逐年降低或準備停產。這可能存在一些臨時生產的質量隱患。建議為防止生產企業臨時生產帶來的質量隱患，建議監管部門對閑置批準文號加強整頓。

4.2 處方工藝合理性問題

硬脂酸紅霉素在體內吸收部位主要應在小腸，一般情況下，人體在空腹狀態下，十二指腸pH環境大約在5.5左右，小腸大約為6.0，小腸末端大約6.8。雖然通常認為紅霉素的衍生物(琥乙紅霉素、硬脂酸紅霉素等)較紅霉素對酸穩定，但前期查閱文獻[5]可知，硬脂酸紅霉素易受胃酸破壞；在酸堿破壞試驗中也發現，硬脂酸紅霉素在酸中不穩定，降解雜質較多，因此如何通過合理的劑型設計，保證該類藥物的有效性有待于進一步的研究。

4.3 現行標準問題

按標準檢驗結果分析表明，膠囊劑的水分與有關物質及溶出度無明顯相關性，建議進一步收集樣品，探討膠囊劑水分限度的合理性。