復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿對脾虛型功能性消化不良大鼠的影響

趙優(yōu)琴，任強強，張小琴，許文，黃鳴清

(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122)

功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種臨床常見的非器質(zhì)性胃腸道疾病，典型癥狀包括腹痛、飽脹、噯氣、嘔吐等。研究顯示，我國FD發(fā)病率為18%～45%，約占消化專科門診的20%～50%[1]。FD發(fā)病因素較為復(fù)雜，常見誘因包括腸動力障礙、內(nèi)臟高敏、黏膜通透性升高等[2-3]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，胃腸激素在胃腸動力障礙性疾病方面起著重要作用，尤其是胃泌素(GAS)、血管活性肽(VIP)等腦-腸肽類激素。FD在中醫(yī)學(xué)中屬于“痞滿”“胃脘痛”等范疇，其主要與情志不遂、飲食失節(jié)、寒溫失調(diào)等因素有關(guān)，并有研究表明脾虛是FD最主要和基本的證型[4]。

復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿(以下簡稱為復(fù)方糖漿)是一種中藥復(fù)方制劑，由維生素B1、B2、B6、煙酰胺、右旋泛酸鈣及黨參、白術(shù)、茯苓、薏苡仁、芡實、山楂、山藥等多味中藥組成，臨床可用于改善消化不良和小兒厭食等癥狀[5]。方中B族維生素是一類維持機體正常代謝活動的水溶性維生素，可促進體內(nèi)糖、脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的代謝，促進腸道組織的吸收能力，提高胃黏膜消化功能并增進食欲。同時，該方中還含有黨參、白術(shù)、茯苓、薏苡仁、芡實、山楂、山藥等多味中藥，具有運脾除濕、健脾益氣、消食開胃的功效。復(fù)方糖漿在調(diào)理脾胃、扶助運化、和胃進食方面有突出優(yōu)勢[5-6]，但目前尚無復(fù)方糖漿治療FD及相關(guān)機制的研究。因此，本研究以脾虛型FD大鼠為實驗對象，連續(xù)給予不同劑量復(fù)方糖漿14 d后，檢測FD大鼠的尿D-木糖排泄率及血清淀粉酶(AMS)、GAS、VIP水平，進而探討該復(fù)方制劑在治療FD過程中發(fā)揮的作用及可能機制，為其臨床治療FD提供充分實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠購于上海斯萊克實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(滬)2017-0005。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，室溫(25±1)℃，自由飲水?dāng)z食。

1.2 藥物及試劑 大黃飲片(閩侯縣上街致誠醫(yī)藥商店，批號：171208)；復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿[國藥控股星鯊制藥(廈門)有限公司，批號:20970104]；健胃消食片(江中藥業(yè)股份有限公司，批號:17040109)；D-木糖(上海源葉生物科技有限公司，批號:D20O8S45497)；大鼠胃泌素ELISA 試劑盒(武漢基因美生物科技有限公司，批號:GR201804-1)；大鼠VIP酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(上海西塘生物科技有限公司，批號1804071)；D-木糖試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:20180418)；AMS試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:20180417)。

1.3 儀器 XY2000C電子天平(常州市幸運電子設(shè)備有限公司)；3M12B440冷藏收集架(TECNIPLAST)；Primo R高速臺式冷凍離心機 (美國賽默飛世爾科技有限公司)；SK-1快速混勻器(常州國華電器有限公司)；Infinite 200 PRO多功能酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司)。

2 方法

2.1 實驗樣品制備 大黃水煎劑：稱取大黃飲片適量，粉碎，過40目篩，加8倍超純水，浸泡30 min，微沸煎煮10 min，濾過，濾渣再加8倍超純水微沸煎煮30 min，合并兩次濾液，減壓濃縮至生藥含量為1 g·mL-1。炭餐指示劑：稱取羧甲基纖維素鈉4.85 g，溶于92.15 g蒸餾水中，加入活性炭粉3 g，混勻，制成3%活性炭懸浮液。

2.2 模型制備 隨機抽取8只實驗動物作為正常對照組，其余40只采用大黃+游泳竭力+不規(guī)則飲食法多因素復(fù)合造模法復(fù)制脾虛FD大鼠模型。模型組：大黃給藥劑量梯度增加，即從生藥量每天1 g/100 g(體重)開始，每7 d增加一個梯度，直到最終大黃劑量為2 g/100 g(體重)；每天冷水竭力游泳約30 min；隔日禁食。正常組：每只僅上午灌胃等體積生理鹽水，不進行冷水竭力游泳，飲食自由。14 d后，造模組大鼠的體重增長低于正常組20%～30%，提示造模成功。

2.3 分組與給藥 脾虛FD模型復(fù)制成功后，將40只FD脾虛大鼠，隨機分為5組：FD脾虛模型組，健胃消食片組(0.65 g·kg-1)，復(fù)方糖漿高、中、低劑量組(2.70、5.40、10.80 g·kg-1)。每天下午，正常組和脾虛FD模型組灌胃等體積的生理鹽水，其余4組分別灌胃相應(yīng)的藥物，連續(xù)給藥共7 d。同時，每天上午繼續(xù)灌胃大黃水煎劑造模。實驗過程中觀察各組大鼠體重、糞便、毛色等變化。

2.4 尿液中D-木糖排泄率測定 各組大鼠連續(xù)給藥6 d后，禁食不禁水12 h，于第2天早上8∶00用代謝籠收集5 h尿液，為未服D-木糖尿液。接下來每只大鼠灌胃10 %D-木糖溶液(0.15 g/100 g體重)，放入代謝籠中再收集5 h尿液，為服D-木糖后尿液。以上過程禁食不禁水，采用間苯三酚法測定尿液中D-木糖排泄率。

2.5 小腸推進率測定 末次給藥結(jié)束后，大鼠禁食不禁水12 h，灌胃1 mL的炭餐指示劑，30 min后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血后處死，即刻剖開腹腔，分離上至幽門下至回盲部的腸管，在松弛狀態(tài)下測量并記錄幽門至炭餐指示劑最前端的距離，記為炭餐指示劑推進長度。小腸推進率=炭餐指示劑推進長度/小腸總長度×100%。

2.6 臟器指數(shù)測定 取脾臟和胸腺，并精密稱定脾臟和胸腺重量。脾臟或胸腺指數(shù)=(脾或胸腺重量/大鼠體重)×100%。

2.7 血清AMS、GAS、VIP水平檢測 各組大鼠取血后，于4 ℃，3 500 rpm離心15 min，取上清分裝，于-80 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?yán)格按照試劑盒說明操作，檢測血清中的AMS、GAS、VIP水平。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方糖漿對FD大鼠一般情況的影響 實驗前各組大鼠外觀及一般狀況均無明顯差異。造模3 d后，F(xiàn)D大鼠開始出現(xiàn)大便濕軟，食欲下降，倦怠等癥狀；7 d后，F(xiàn)D大鼠相繼出現(xiàn)糊狀稀便，毛色失去光澤，暴躁，游泳堅持時間縮短，扎堆現(xiàn)象；14 d后，F(xiàn)D大鼠出現(xiàn)溏便，肛門污穢，脫毛，食欲明顯下降，毛色晦暗發(fā)黃，呆納食少癥狀。經(jīng)健胃消食片及復(fù)方糖漿干預(yù)后，大鼠倦怠現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，活動量增加，毛色光澤，大便恢復(fù)正常。

3.2 復(fù)方糖漿對FD大鼠體重的影響 與正常組比較，模型組大鼠的體重明顯降低(P<0.01)。與FD模型組比較，健胃消食片組(P<0.05)和復(fù)方糖漿高劑量組(P<0.05)大鼠的體重明顯升高，復(fù)方糖漿低、中劑量組的體重亦有一定程度的升高，但無統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果見表1。

3.3 復(fù)方糖漿對FD大鼠臟器指數(shù)的影響 與正常組比較，F(xiàn)D模型組大鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，健胃消食片組大鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著升高(P<0.01)，復(fù)方糖漿各劑量組的胸腺指數(shù)均明顯升高(P<0.01)，復(fù)方糖漿高(P<0.01)、中(P<0.01)、低(P<0.05)劑量組大鼠的脾臟指數(shù)顯著升高，結(jié)果見表1。

3.4 復(fù)方糖漿對FD大鼠小腸推進率的影響 與正常組比較，模型組大鼠的小腸推進率明顯降低(P<0.01)。與模型組比較，健胃消食片組(P<0.01)和復(fù)方糖漿中(P<0.01)、高(P<0.01)劑量組的小腸推進率顯著升高，低劑量組大鼠的小腸推進率無顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見表1。

表1 復(fù)方糖漿對FD大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及小腸推進率的影響

注:與正常組比較,*P<0.01；與模型組比較,△P<0.05，▲P<0.01

3.5 復(fù)方糖漿對FD大鼠D-木糖排泄率的影響 與正常組相比，模型組大鼠D-木糖排泄率明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，健胃消食片組的D-木糖水平明顯升高(P<0.01)，復(fù)方糖漿高、中、低劑量組的D-木糖水平均明顯升高(P<0.01)，結(jié)果見表2。

3.6 復(fù)方糖漿對FD大鼠血清AMS的影響 與正常組相比，模型組大鼠血清AMS水平明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，健胃消食片組大鼠血清AMS水平顯著升高(P<0.05)，復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿高劑量組大鼠血清AMS水平顯著升高(P<0.01)，復(fù)方糖漿低、中劑量組大鼠血清的AMS均無顯著性差異(P>0.05)，結(jié)果見表2。

3.7 復(fù)方糖漿對FD大鼠血清GAS和VIP的影響 與正常組相比，模型組大鼠血清中的GAS明顯降低(P<0.01)，VIP水平明顯升高(P<0.01)。與模型組相比，健胃消食片組GAS水平明顯升高(P<0.05)，VIP水平明顯降低(P<0.01)；復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿各劑量組的GAS水平均明顯升高(P<0.01)，VIP水平均明顯降低(P<0.01)，結(jié)果見表3。

表2 復(fù)方糖漿對FD大鼠D-木糖、AMS的影響

注:與正常組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，▲P<0.01

表3 復(fù)方糖漿對FD大鼠GAS和VIP的影響

注:與正常組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，▲P<0.01

4 討論

FD是胃腸道常見的消化系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為消化和吸收障礙，其癥狀有腹痛、腹脹、早飽、惡心、嘔吐等，但無明顯的器質(zhì)性變化。目前，西醫(yī)的治療手段主要有促進胃動力，保護胃黏膜、抑制胃酸分泌等，但方法單一，療效不明顯。中藥具有多成分、多靶點、系統(tǒng)調(diào)節(jié)的優(yōu)點，其在治療脾胃不和等方面療效確切，副作用小，具有明顯優(yōu)勢。但中醫(yī)學(xué)中并無FD這一病名，根據(jù)FD的典型癥狀，可將其歸于中醫(yī)學(xué)中“痞滿”、“胃脘痛”等范疇，主要是由于飲食無度、情志不暢、過度疲勞等因素導(dǎo)致脾胃虛弱、氣機受阻而致。本研究參考多種FD造模方式，最終選定“饑飽失常+勞倦+耗氣破氣”的綜合造模方法，使得動物寒邪內(nèi)侵，脾胃受損、運化失常，導(dǎo)致FD脾胃虛弱癥狀[7-8]。

現(xiàn)代研究表明，維生素B1、B2、B6可推動體內(nèi)代謝，缺乏時會引起代謝障礙，表現(xiàn)為機體出現(xiàn)呆滯和食欲不振表征。煙酰胺可促進組織新陳代謝，對維持消化道的完整性具有重要意義。泛酸鈣可參與多種營養(yǎng)成分的吸收和利用。同時復(fù)方糖漿中還含有黨參、白術(shù)、茯苓、薏苡仁、芡實、山楂、山藥等多味中藥。其中黨參、白術(shù)能補氣健脾，可促進脾虛FD大鼠GAS的分泌，改善脾虛大鼠對D-木糖吸收功能及淀粉酶的活性，進而緩解脾虛癥狀[9-10]。茯苓、薏苡仁可健脾滲濕、除痹止瀉，且薏苡仁多糖可抑制血清VIP釋放，減少水液在大腸內(nèi)的停留，從而改善腹瀉[11]。山楂健胃消食，其黃酮類成分對小鼠胸腺指數(shù)有明顯的增強作用[12]。山藥健脾益氣，對胃黏膜有很好的保護作用。以上10味中藥集補、運、升、降于一體，最終達到健脾開胃、除濕止瀉的功效。

尿液中D-木糖排泄率可作為診斷脾虛證的檢測指標(biāo)。D-木糖是一種可口服的戊糖，經(jīng)小腸吸收而不參與肝臟代謝，正常情況下，體液中基本不含此物質(zhì)，故在口服D-木糖一段時間后，尿液中D-木糖的含量可反映小腸的吸收功能。AMS可水解淀粉分子中的糖苷鍵，促進體內(nèi)糖代謝，其主要由唾液腺和胰腺腺泡細(xì)胞分泌。研究表明脾虛動物血清和尿液、小腸組織AMS含量明顯降低[10,13]，脾虛FD大鼠血清淀粉酶降低，會導(dǎo)致消化能力降低。本實驗發(fā)現(xiàn)，復(fù)方糖漿不同劑量組能提高脾虛FD大鼠血清AMS和尿液中D-木糖排泄率，進而改善機體的消化和吸收情況。

GAS是研究最早、最多的胃腸激素之一，主要由胃竇G細(xì)胞分泌，可刺激胃酸的分泌，調(diào)節(jié)胃腸運動功能，是一種可興奮胃腸運動的腦腸肽。VIP是一種對胃腸運動有抑制作用的胃腸激素，其主要作用在于刺激膽汁、小腸水電解質(zhì)的分泌，松弛胃腸道平滑肌，抑制結(jié)腸和直腸的緊張性，介導(dǎo)胃腸蠕動反射，使糞便在結(jié)腸中停留時間縮短，水分不能完全吸收，從而引起腹瀉。故GAS和VIP分泌異常是引起FD脾胃虛弱的發(fā)病機制之一。研究表明，長期苦寒瀉下、飲食不節(jié)和過度疲勞會導(dǎo)致大鼠血清GAS和VIP的分泌異常。本實驗表明，復(fù)方糖漿可促進脾虛FD大鼠GAS分泌，抑制其VIP分泌，這表明復(fù)方糖漿對脾虛FD大鼠的治療作用機制可能是通過調(diào)節(jié)血液中的胃腸激素實現(xiàn)助消化和止瀉的作用。

綜上所述，造模成功的脾虛型FD大鼠體重、D-木糖排泄率、血清AMS和GAS水平均降低，VIP水平升高，經(jīng)復(fù)方糖漿治療后，這些異常指標(biāo)恢復(fù)至接近正常狀態(tài)，表明復(fù)方糖漿對于治療FD脾胃虛弱癥具有較好的療效，其治療機制可能是：①通過促進GAS分泌，刺激胃酸、胃蛋白酶的分泌，從起到助消化的作用；②通過抑制VIP分泌，減少膽汁、小腸水電解質(zhì)的分泌，使糞便在結(jié)腸中停留時間延長，水分得到充分吸收，從而改善腹瀉狀況；③通過促進機體AMS等消化酶的分泌，從而促進體內(nèi)的糖代謝水平，改善機體的能量代謝；④通過增強小腸的吸收、分泌功能，從而改善機體的消化和吸收情況，其詳細(xì)藥效學(xué)機理有待進一步研究。