蒲地藍消炎片定性定量研究

姜慧禎，劉學杰,王軍棟，崔小菲，劉曉靜，李星辰，李俊強

(煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東 煙臺 264670)

蒲地藍消炎片是由黃芩、蒲公英、苦地丁、板藍根4味藥材制成的中藥復方制劑，具有清熱解毒、抗炎消腫的作用,臨床上主要用于治療癤腫、腮腺炎、咽炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等癥[1-2]。該制劑現執行標準為衛生部頒藥品標準第三冊(標準編號為WS3-B-0649-91)和各企業申請原國家食品藥品監督管理局批準的單頁標準，部頒標準收載項目包括性狀和常規檢查項，其他各企業自己申請的企業標準，檢驗項目設置參差不齊，存在個別企業利用質量標準的缺陷，少投或投劣質藥材的風險，本研究在充分考察了蒲地藍質量標準和相關文獻的基礎上[3-5]，采用了顯微及薄層色譜對處方中的黃芩進行了鑒別，采用簡單易操作且受干擾較少的薄層色譜法對蒲公英、苦地丁以及板藍根進行定性分析，本文用高效液相色譜(HPLC)方法對黃芩中黃芩苷的含量測定進行了研究，結果表明，HPLC法能夠有效地測量蒲地藍消炎片中黃芩苷的含量，通過此方法能夠較好的對蒲地藍消炎片的質量進行控制。

1 儀器與試藥

奧林巴斯 BX51 電子顯微鏡；安捷倫1200高效液相色譜儀；島津 Auw120D電子天平；昆山市超聲儀器有限公司KQ-300DE型數控超聲波清洗器。硅膠G板購自青島基億達硅膠試劑有限公司；甲醇為色譜純(Honeywell)；水為Millipore制水機制備；其他試劑為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。

黃芩對照藥材(批號：120955-201309)、黃芩苷(批號：110715-201720，供含量測定用，含量以93.5%計)、咖啡酸對照品(批號：110885-200102)、苦地丁對照藥材(批號：120990-201406)、板藍根對照藥材(批號：121177-201608)、(R，S)-告依春對照品(批號：111753-201706,含量以100.0%計)均購自中國食品藥品檢定研究院。試驗中所用蒲地藍消炎片(批號：170901、170902、170903)及陰性樣品由煙臺渤海藥物研究院自制。

2 黃芩的顯微鑒別

取本品10片，除去包衣，研細，取約2 g，加10倍量水攪勻，放置，棄去上清液，取沉淀物，采用水合氯醛裝片，置顯微鏡下觀察：韌皮纖維單個散在或數個成束，梭形，長60～250 μm，直徑9～33 μm，壁厚，孔溝細。石細胞類圓形、類方形或長方形，壁較厚。木栓細胞棕黃色，多角形。網紋導管多見，直徑24～72 μm。木纖維多碎斷，直徑約12 μm，有稀疏斜紋孔[6]。

3 薄層色譜鑒別

3.1 黃芩 取本品適量，研細，取本品粉末2 g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30 mL，置100 mL圓底燒瓶水浴回流30 min，放冷至室溫，濾過，濾液置蒸發皿蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，上清液濾過作為供試品溶液[1]。另取黃芩對照藥材1 g及缺黃芩藥材的陰性樣品2 g，同法制成對照藥材溶液及黃芩陰性對照溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結果見圖1。

3.2 蒲公英 取本品適量，研細，取粉末約2 g，置100 mL具塞錐形瓶，取約20 mL 5%甲酸的甲醇溶液至錐形瓶，超聲，20 min后取出錐形瓶，濾過，濾液置蒸發皿揮干，殘渣加水10 mL使溶解，將溶液轉移至100 mL分液漏斗，加乙酸乙酯2次，每次10 mL，振搖提取，合并乙酸乙酯層溶液置蒸發皿揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液[6]。同法取缺蒲公英藥材的陰性樣品2 g，制備缺蒲公英的陰性對照溶液。另取咖啡酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結果見圖2。

1.黃芩對照藥材；2.缺黃芩陰性樣品；3～5.蒲地藍消炎片樣品圖1 黃芩鑒別薄層色譜圖

1.咖啡酸對照品；2.缺蒲公英陰性樣品；3～5.蒲地藍消炎片樣品圖2 蒲公英鑒別薄層色譜圖

3.3 苦地丁 取本品適量，研細，取粉末約2 g，置100 mL具塞錐形瓶，濃氨試液0.5 mL使潤濕，加三氯甲烷10 mL，放置12 h，濾過，濾液置蒸發皿揮干，殘渣加三氯甲烷1 mL溶解，作為供試品溶液[6]。另取苦地丁對照藥材1 g及缺苦地丁藥材的陰性樣品2 g，同法制成對照藥材及缺苦地丁陰性溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結果見圖3。

1.苦地丁對照藥材；2.缺苦地丁陰性樣品；3～5.蒲地藍消炎片樣品圖3 苦地丁鑒別薄層色譜圖

3.4 板藍根 取本品適量，研細，取粉末約3 g，置100 mL具塞錐形瓶，加80%甲醇20 mL，超聲30 min，濾過，濾液置蒸發皿揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取(R，S)-告依春對照品，加甲醇制備成每1 mL含0.5 mg對照品的溶液，作為對照品溶液[6]。另取板藍根對照藥材1 g及缺板藍根藥材的陰性樣品3 g，按照供試品制備方法制備成對照藥材溶液及缺板藍根陰性溶液。取上述制備液于同一色譜板展開，結果見圖4。

1.板藍根對照藥材；2.(R,S)-告依春對照品；3.缺板藍根陰性樣品；4～6.蒲地藍消炎片樣品圖4 板藍根鑒別薄層色譜圖

4 黃芩苷的含量測定

4.1 色譜條件及系統適用性 采用Capcell PAK C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)為色譜柱，采用甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動相，流動相流速為1.0 mL·min-1，紫外檢測器，檢測波長為280 nm，柱溫為30 ℃[7-8]。黃芩苷及相鄰峰的分離度應大于1.5，理論塔板數按照黃芩苷峰計算不應低于3 000。

4.2 溶液的制備

4.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品12.52 mg，置250 mL容量瓶，加甲醇適量超聲使溶解，冷卻至室溫，加甲醇制成每1 mL含黃芩苷46.82 μg的溶液，作為對照品溶液。

4.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項下的本品20片(糖衣片除去包衣)，精密稱定，研細，取約0.5 g，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶，加70%的乙醇40 mL，置水浴回流3 h，放冷置室溫，濾過，將圓底燒瓶用少量70%乙醇分次洗滌并同濾液轉移至100 mL量瓶并定容至刻度，混合均勻后，精密量取1 mL儲備液置10 mL量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液[3]。

4.2.3 陰性供試品溶液 取缺黃芩藥材的陰性樣品0.5 g，按照“4.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

4.3 陰性干擾試驗 吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，按照“4.1”項下色譜條件進行測定，結果表明：樣品溶液及黃芩苷對照品溶液色譜峰表現良好，且樣品中黃芩苷色譜峰分離度符合系統適用性要求，陰性樣品在相應位置無干擾，結果見圖5。

A.黃芩苷對照品；B.樣品；C.陰性對照圖5 HPLC色譜圖

4.4 方法學考察

4.4.1 線性關系考察 取對照品溶液，分別按照“4.1”項下色譜條件進樣1、5、10、15、20 μL，記錄色譜圖，以進樣量(μg)為橫坐標和峰面積為縱坐標進行回歸，回歸方程Y=12.193X-0.957 5，R2=0.999 7。結果表明，在此試驗條件下，黃芩苷進樣量在5.008～100.16 μg時與峰面積呈良好的線性關系。

4.4.2 精密度試驗 精密吸取供試品溶液10 μL，按照上述“4.1”項下色譜條件進樣5次，精確記錄黃芩苷色譜峰峰面積，結果RSD為0.42%(<2%),表明儀器精密度良好。

4.4.3 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號：170901)10 μL，按照“4.1”項下色譜條件進行測定。每隔2 h測定1次，共測定5次，結果供試品峰面積RSD為0.52%。表明供試品溶液在10 h內穩定。

4.4.4 加樣回收率試驗 分別精密稱取同一批號已知含量的蒲地藍消炎片(批號：170901，含量45.53 mg·g-1)9份，每份0.25 g，精密加入黃芩苷對照品分別為5.56、11.12、16.68 mg，按照“4.1”項下色譜條件測定黃芩苷，計算回收率，結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果

由表1可知本測定方法的回收率高，平均加樣回收率為98.87%(n=9)，RSD為0.95%,符合含量測定的要求。

4.5 樣品的測定 按“4.1”項下色譜條件，取不同批號的自制樣品制成供試品溶液，將對照品和供試液進樣10 μL，求得含量，結果見表2。

表2 自制蒲地藍消炎片黃芩苷含量測定結果

5 結果與討論

5.1 本次試驗共檢測9批蒲地藍消炎片樣品(3批自制，6批市售)的黃芩苷含量，3批自制樣品所用黃芩藥材為3批，含量分別為8.1%、6.7%、8.9%，自制樣品中測得的黃芩苷結果在11.38～15.11 mg/片,市售6批樣品中黃芩苷的含量分別為14.17～18.21 mg/片。

蒲地藍消炎片樣品在制備以及后期處理過程中黃芩苷按照損失20%計，按照《中國藥典》2015年版(一部)黃芩中黃芩苷含量不得低于8.0%，蒲地藍消炎片每片含黃芩苷(C11H19O11)不得低于10.0 mg應為合理限度。

5.2 本研究所建立的質量控制方法簡便、專屬性強、重現性好，準確可靠，可有效控制蒲地藍消炎片的質量。