熒光定量PCR在預(yù)測(cè)微生物學(xué)中的應(yīng)用

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(1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306;2.農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室,上海 201306;3.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心,上海 201306;4.上海海洋大學(xué)食品熱加工工程技術(shù)研究中心,上海 201306)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最早由Mullis等[1]發(fā)明的體外模擬核酸擴(kuò)增的基因拷貝技術(shù),因核酸呈幾何級(jí)數(shù)暴增,進(jìn)而使得微觀分子達(dá)到宏觀可視化效果。隨著科技發(fā)展,生物科學(xué)等對(duì)于PCR技術(shù)也提出了更高要求,熒光定量PCR(Fluorescent quantitative PCR)應(yīng)運(yùn)而生,也因其特異、高效、快速等優(yōu)異的特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、政治法律等領(lǐng)域[2-5]。

20世紀(jì)80年代初,Ross等首次提出了“微生物預(yù)測(cè)技術(shù)”。從此預(yù)測(cè)微生物學(xué)運(yùn)應(yīng)而生,正式拉開了預(yù)測(cè)微生物研究的序幕[6-7]。1990年,歐盟等一些國(guó)家對(duì)微生物預(yù)測(cè)技術(shù)進(jìn)行大量研究,建立了相應(yīng)的微生物數(shù)據(jù)庫(kù),后來(lái),英國(guó)、美國(guó)、澳大利亞等,開始致力于微生物預(yù)測(cè)軟件的開發(fā)與研究。直到現(xiàn)在,世界上最大的微生物預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)Combase已經(jīng)被建立起來(lái),并持續(xù)更新數(shù)據(jù)庫(kù)。預(yù)測(cè)微生物學(xué)對(duì)企業(yè)的生產(chǎn)、人們生活等各個(gè)方面都具極大作用,以危害分析的臨界控制點(diǎn)(Hazard Analysis and Critical Control Point,HACCP)和定量微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(Quantitative Microbiological Risk Assessment,QMRA)表現(xiàn)尤為顯著[8-9]。

本文主要綜述了熒光定量PCR技術(shù)和預(yù)測(cè)微生物學(xué)的發(fā)展史以及熒光定量PCR在預(yù)測(cè)微生物學(xué)中應(yīng)用的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀,以期推動(dòng)熒光定量PCR技術(shù)在預(yù)測(cè)微生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用,進(jìn)而推動(dòng)預(yù)測(cè)微生物學(xué)的發(fā)展。

1 熒光定量PCR

1.1 熒光定量PCR的分類及其基本原理

傳統(tǒng)的微生物定量檢測(cè)原理是微生物在特定的培養(yǎng)基上產(chǎn)生相應(yīng)的代謝產(chǎn)物從而進(jìn)行計(jì)數(shù),整個(gè)檢測(cè)過程需要培養(yǎng)基制備、平板培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)、生化鑒定等步驟,極其復(fù)雜、耗時(shí)、耗力[10-12]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),即在反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),通過熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)積累進(jìn)而監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過已知標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。一般常用的定量PCR,包括熒光染料法和水解探針法。

染料法(SYBR Green Ⅰ)[13]:染料法中以SYBR Green I法的應(yīng)用最為廣泛。一種只與雙鏈DNA小溝結(jié)合的具有綠色激發(fā)波長(zhǎng)的染料,結(jié)合所有DNA雙鏈小溝。反應(yīng)體系中,過量的SYBR染料,結(jié)合時(shí),SYBR特異摻入DNA雙鏈小溝,發(fā)射熒光信號(hào),多余的SYBR不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),保證收集的熒光信號(hào)與PCR產(chǎn)物的增加量保持一致。

TaqMan探針法[14-15]:TaqMan探針的基本原理是利用Taq酶的5′核酸外切酶活性,切割與靶序列結(jié)合的寡核苷酸探針。探針由5′端標(biāo)記報(bào)告基團(tuán),3′端標(biāo)記淬滅基團(tuán)構(gòu)成。反應(yīng)前,熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)形成共振體系,3′淬滅基團(tuán)抑制5′熒光基團(tuán)的熒光發(fā)射。反應(yīng)時(shí),當(dāng)引物延伸至探針結(jié)合位置時(shí),Taq酶可以將其切割成小片段,破壞了探針的完整性,穩(wěn)定的能量傳遞結(jié)構(gòu)瓦解,發(fā)出熒光信號(hào),PCR反應(yīng)一輪,熒光信號(hào)被收集一次,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)反應(yīng)過程。需要特別提出的兩個(gè)概念:熒光閾值和CT(cycle theshold)值,熒光閾值即預(yù)先設(shè)定的閾值,通常以PCR反應(yīng)的第3～15個(gè)循環(huán)的熒光值作為熒光本底信號(hào),同時(shí)以3～15個(gè)循環(huán)的熒光值增加量標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍設(shè)置為熒光閾值。CT值即熒光信號(hào)到達(dá)該閾值時(shí)的循環(huán)次數(shù)。圖1為Taqman探針反應(yīng)原理圖。

圖1 Taqman探針反應(yīng)原理Fig.1 Reaction principle of taqman probe

1.2 熒光定量PCR的特點(diǎn)

熒光定量的靶序列由引物和探針雙重保障,確定了其高度特異性,熒光信號(hào)的產(chǎn)生和實(shí)時(shí)收集確定了其高效快速。相比較傳統(tǒng)涂布計(jì)數(shù)法,熒光定量PCR除了快速高效、特異性強(qiáng)、高通量等優(yōu)勢(shì),熒光定量PCR還在以下方面發(fā)揮重要作用:檢測(cè)環(huán)境中VBNC(viable but non-culturable)微生物[16-18],確定微生物群落組成以優(yōu)勢(shì)類群,對(duì)功能微生物類群進(jìn)行量化[19-21]。PCR-DDGE能確定微生物多樣性,Chao等[22]也嘗試用PCR-DDGE技術(shù)定量建模,但是其也只能是半定量,并不能絕對(duì)定量。宏基因組測(cè)序技術(shù)也能確定微生物種類,但是無(wú)法量化[23]。流式細(xì)胞儀也可用于計(jì)數(shù),但儀器昂貴,操作復(fù)雜,進(jìn)樣速度差異,共存雜質(zhì)等對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果的影響都限制了該技術(shù)的應(yīng)用[24]。

熒光定量PCR是基于DNA的擴(kuò)增技術(shù),因此可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,最近有研究人員采取RNA反轉(zhuǎn)錄進(jìn)而對(duì)目標(biāo)樣品定量分析[25],新型核酸染料結(jié)合死菌DNA以阻止其隨后的擴(kuò)增[26]。RNA不易提取,且易降解,核酸染料操作簡(jiǎn)單方便,更適合實(shí)驗(yàn)室使用。總之,熒光定量PCR應(yīng)結(jié)合其他新技術(shù)新材料才能獲得更廣闊的應(yīng)用潛力。

2 預(yù)測(cè)微生物學(xué)

2.1 基本原理及其分類

預(yù)測(cè)微生物學(xué)(Predictive Microbiology)是基于微生物學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、計(jì)算機(jī)學(xué)和數(shù)學(xué)為基礎(chǔ)而建立起來(lái)的一門新學(xué)科,旨在通過用數(shù)學(xué)的語(yǔ)言來(lái)定量描述或預(yù)測(cè)處在特定的環(huán)境下微生物的生長(zhǎng)和衰亡規(guī)律[27]。預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型分類方法很多。依據(jù)描述微生物的生長(zhǎng)衰亡情況,可分為微生物生長(zhǎng)模型和微生物失活模型,依據(jù)生長(zhǎng)模型的建立方式分類,可分為概率模型和動(dòng)力學(xué)模型。概率模型旨在預(yù)測(cè)特定事件發(fā)生的概率,如在給定時(shí)間內(nèi)某類食品中特定的腐敗菌、病原菌或毒素出現(xiàn)或形成的概率,一般用于食品安全性評(píng)估。動(dòng)力學(xué)模型描述不同環(huán)境因子對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響,即構(gòu)建相關(guān)微生物的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)和環(huán)境因子之間關(guān)系的數(shù)學(xué)模型,一般用于食品品質(zhì)預(yù)測(cè)。

一般,基于變量的類型,按照根據(jù)美國(guó)的Buchanan和Whiting等[28]的分類方法可把預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型分為一級(jí)模型或初級(jí)模型(Primary Model)、二級(jí)模型或次級(jí)模型(Secondary Model)和三級(jí)模型或?qū)＜夷Ｐ?Tertiary Model)。一級(jí)模型,即描述微生物量與時(shí)間的函數(shù)關(guān)系,一般為S型曲線,有Gompertz函數(shù)、Logistic模型、Baranyi模型、Huang模型、Stannard方程等。二級(jí)模型,即旨在表征一級(jí)模型的動(dòng)力學(xué)參數(shù)與環(huán)境因子之間作用的函數(shù)關(guān)系,有平方根模型(Square Root Model)或叫Ratkowsky模型、Arrhenius/davery指數(shù)模型和響應(yīng)面方程(Response surface equation)等。三級(jí)模型則是依據(jù)一級(jí)和二級(jí)模型的基礎(chǔ)建立起來(lái)的面向用戶的微生物預(yù)測(cè)軟件或數(shù)據(jù)庫(kù)，有PMP(Pathogen Modeling Program)、FSP(Food Spoilage Predictor)、FM(Food Micromodel)、FSLP(Fish Shelf Life Predictor)以及最大的Combase網(wǎng)站等,詳見表1。

表1 預(yù)測(cè)微生物模型的分類及其簡(jiǎn)介[6,27-33]Table 1 Classification of predictive microbiological models and their introduction[6,27-33]

2.2 特點(diǎn)

簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),一級(jí)模型描述在特定環(huán)境下菌量隨時(shí)間的變化,包括生長(zhǎng)模型和失活模型,比較簡(jiǎn)單最常用的有Baranyi模型和Gompertz方程等。二級(jí)模型,描述的是培養(yǎng)過程中的環(huán)境因子對(duì)微生物生長(zhǎng)或存活特性的影響,稍微復(fù)雜。三級(jí)模型是一級(jí)和二級(jí)模型的綜合,一般表現(xiàn)為方便的電腦應(yīng)用程序或者數(shù)據(jù)庫(kù),面向用戶能提供更加有效直接的預(yù)測(cè)工具。

3 熒光定量PCR在預(yù)測(cè)微生物學(xué)中的應(yīng)用現(xiàn)狀

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR代替?zhèn)鹘y(tǒng)平板計(jì)數(shù)法具有極大的優(yōu)勢(shì):快速,高效,節(jié)約人力物力等。能檢測(cè)實(shí)際食品基質(zhì)樣品,對(duì)于檢測(cè)大批量樣品更顯優(yōu)勢(shì)。以qPCR+microbiological為關(guān)鍵詞在web of science核心集合上檢索,共有296篇文獻(xiàn)。近十一年的文獻(xiàn)分布如圖2,從2008年的只有6篇到2011的20篇,直到最近5年(2013～2017年)的年文章數(shù)量平均在40篇左右。足以顯示出熒光定量PCR技術(shù)在科研領(lǐng)域的重要地位。而用qPCR+predictive model為關(guān)鍵詞在web of science核心集合上檢索,則共有164篇文獻(xiàn)。近十一年的文獻(xiàn)分布如圖3。2008年只有6篇2016年達(dá)到29篇,近5年(2013～2017年)的年文章數(shù)量平均也達(dá)到23.4篇。值得提出的是,因?yàn)槭且躁P(guān)鍵字檢索,所以這兩組數(shù)據(jù)(文獻(xiàn))并非實(shí)際研究情況,實(shí)際對(duì)于用qPCR在預(yù)測(cè)微生物學(xué)方面的研究還是比較欠缺。以qPCR 和預(yù)測(cè)微生物模型為關(guān)鍵詞在web of science(所有集合)上檢索一共只有38篇文章,具體見圖4。可知qPCR在預(yù)測(cè)微生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用仍有很大潛力。

圖3 以qPCR和預(yù)測(cè)模型為關(guān)鍵詞的近十一年的SCI文章數(shù)Fig.3 SCI paper number based on qPCR and predictive models in recent eleven years

圖4 以qPCR和預(yù)測(cè)微生物模型為關(guān)鍵詞的近十年的文章數(shù)Fig.4 Papers number based on qPCR and predictive microorganism models in recent ten years

3.1 國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀

我國(guó)國(guó)內(nèi)常見的食源性致病菌有:副溶血性弧菌、沙門氏菌、單增李斯特氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌O157等[34]。李苗云等[35]用傳統(tǒng)涂布計(jì)數(shù)法來(lái)建立冷卻豬肉中單增李斯特氏菌生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)模型。胡燕等[36]采用平板涂布計(jì)數(shù)法建立了大腸埃希氏菌在熟肉制品中生長(zhǎng)預(yù)測(cè)模型。于艷艷等[37]利用平板計(jì)數(shù)法構(gòu)建原料乳中金黃色葡萄球菌的預(yù)測(cè)生長(zhǎng)模型。李金春等[38]基于平板計(jì)數(shù)法構(gòu)建了營(yíng)養(yǎng)肉湯中金黃色葡萄球菌的致死模型。國(guó)內(nèi)研究人員基本上以涂布計(jì)數(shù)法為主,構(gòu)建相應(yīng)微生物的生長(zhǎng)衰亡模型,這種方法耗費(fèi)大量人力物力。熒光定量PCR技術(shù)則多用于定性定量檢測(cè)。比如郭川等[39]檢測(cè)了VBNC狀態(tài)的副溶血性弧菌。於穎等[40]用熒光定量PCR結(jié)合核酸染料研究了沙門氏菌和金黃色葡萄球菌等。他們都沒有充分把該技術(shù)運(yùn)用于預(yù)測(cè)微生物模型的構(gòu)建,一般相關(guān)檢測(cè)部門也僅利用該技術(shù)用于樣品的抽查與檢測(cè)。彭織云等[41]率先運(yùn)用熒光定量PCR方法建立副溶血性弧菌在即食蝦中的生長(zhǎng)預(yù)測(cè)模型,該方法省時(shí)省力、特異性好等優(yōu)點(diǎn),并指出該方法建立微生物預(yù)測(cè)模型是未來(lái)預(yù)測(cè)微生物學(xué)領(lǐng)域的一種發(fā)展趨勢(shì)。

3.2 國(guó)外研究現(xiàn)狀

自從預(yù)測(cè)微生物模型興起以來(lái),國(guó)外就開始以實(shí)際食品基質(zhì)研究各種微生物預(yù)測(cè)模型。早在1988年Gibson等構(gòu)建了溫度、pH和水分活度對(duì)沙門氏菌的影響生長(zhǎng)模型[42]。1995年Sutherland等就建立了大腸桿菌O157∶H7在禽肉產(chǎn)品上生長(zhǎng)的模型[43]。2001年Lindqvist等用煙熏鮭魚和鱒魚為基質(zhì)構(gòu)建了李斯特菌的預(yù)測(cè)模型并評(píng)估了其風(fēng)險(xiǎn)[47],Vialette M等在2003年應(yīng)用建立了在pH、NaCl、溫度的相互作用下水產(chǎn)品中李斯特菌的生長(zhǎng)模型[48],2005年P(guān)arsons D等以家禽肉為培養(yǎng)基質(zhì)研究沙門氏菌預(yù)測(cè)模型[49]。Juneja等在2007年運(yùn)用了Gompertz、Baranyi和Logistic模型研究不同溫度下雞肉中沙門氏菌的生長(zhǎng)情況[50]。2008年Hwang等用soudjouk式發(fā)酵香腸為基質(zhì)研究大腸桿菌O157∶H7、李斯特菌鼠傷寒沙門氏菌失活模型[51]。2009年Valero等構(gòu)建了金黃色葡萄球菌模型研究了溫度、pH和水分活度對(duì)其的影響等(詳見表2)[52]。這些模型大多都基于平板涂布計(jì)數(shù)法來(lái)構(gòu)建,其難度大且耗費(fèi)巨大人力、物力和財(cái)力。

表2 預(yù)測(cè)微生物模型構(gòu)建的部分研究(國(guó)外)Table 2 Some studies of predictive microbial models(international)

直到Reichert等在2009年運(yùn)用平板計(jì)數(shù)和Real time PCR技術(shù)描述了純培養(yǎng)條件下的單增李斯特菌的生長(zhǎng)情況[53],并得出相同結(jié)果。為模型構(gòu)建提供了新的數(shù)據(jù)獲取方式。Ye等在2012年運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)構(gòu)建了豬肉中單增李斯特菌的一級(jí)模型,并提出分子預(yù)測(cè)模型(molecular predictive model)這個(gè)概念[54],肯定了分子預(yù)測(cè)模型意義。2013年Wang等運(yùn)用熒光定量PCR構(gòu)建了電解水處理后的南美白對(duì)蝦的副溶血性弧菌的生長(zhǎng)命運(yùn)[55]。2014年Ye又用該技術(shù)構(gòu)建了單增李斯特菌與乳酸菌的競(jìng)爭(zhēng)抑制模型[56]。2015年Zhang等用熒光定量PCR技術(shù)構(gòu)建副溶血性弧菌與單增李斯特菌兩株在低溫條件下的命運(yùn)[57]。國(guó)外研究人員對(duì)應(yīng)用分子技術(shù)構(gòu)建預(yù)測(cè)模型研究也處于停滯狀態(tài),導(dǎo)致這種局面的原因很大一部分在于PCR技術(shù)都基于DNA的擴(kuò)增,很難排除死菌DNA對(duì)其精確度的影響,為克服這一問題,有研究者[25]對(duì)在死菌中易降解的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,再進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物濃度的間接測(cè)定。也有研究者[58]采用熒光定量PCR結(jié)合核酸染料特異性結(jié)合死菌DNA來(lái)提高其精確度。

另外,還有研究者采用宏基因組的方法建立微生物預(yù)測(cè)模型。Parveen等[59]運(yùn)用DNA探針技術(shù)構(gòu)建鮮活牡蠣中自然存在的副溶血性弧菌的預(yù)測(cè)微生物模型;Korem等[60]在Science上發(fā)表利用宏基因組學(xué)測(cè)序技術(shù)分析人類腸道菌群的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué),拓展了研究人員構(gòu)建預(yù)測(cè)模型的新方式。預(yù)測(cè)食品微生物學(xué)在發(fā)展過程中需要尋求新的數(shù)據(jù)獲取方法,各種先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)需要被應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)室和實(shí)際工廠企業(yè),最終服務(wù)于實(shí)際生產(chǎn)。

4 展望

預(yù)測(cè)微生物學(xué)是一門旨在描述和預(yù)測(cè)微生物的生長(zhǎng)衰亡命運(yùn)的科學(xué),為柵欄技術(shù)(Hurdle Technology)、危害分析的臨界控制點(diǎn)(HACCP)、良好操作規(guī)范(GMP,Good Manufacturing Practices)以及微生物定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)(QMRA)中的暴露評(píng)估環(huán)節(jié)都能提供強(qiáng)有力的理論支撐。在繼續(xù)發(fā)展和研究預(yù)測(cè)微生物學(xué)時(shí),下面問題應(yīng)當(dāng)尤其被關(guān)注:a. 更貼近實(shí)際食品的不同培養(yǎng)基質(zhì)的預(yù)測(cè)微生物模型。b. 不同貯藏儲(chǔ)運(yùn)條件下的預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型。c. 不同包裝材料作用下的預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型。d. 多種微生物間復(fù)雜相互作用的預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型。e. 結(jié)合新型分子生物學(xué)技術(shù)以及計(jì)算機(jī)技術(shù)的預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型。

總之,預(yù)測(cè)微生物模型沒有最好,只有更好,無(wú)限趨近于最好,就像數(shù)學(xué)概念“極限”,我們永遠(yuǎn)達(dá)不到“極限”,但能無(wú)限趨近于“極限”。正如預(yù)測(cè)微生物模型,不能因其不是真實(shí)情況而否定其巨大作用。因此,各位歷史前輩在無(wú)限趨近于預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型的“極限”的研究,才顯得更加有意義。

應(yīng)用熒光定量PCR在預(yù)測(cè)微生物模型中的應(yīng)用時(shí),需要人們摒棄其缺點(diǎn)的同時(shí)逐步考慮到更貼合實(shí)際的實(shí)際樣品情形,也應(yīng)該把所得到的研究結(jié)果結(jié)合現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)技術(shù)以可視化形式呈現(xiàn)。一方面,在研究預(yù)測(cè)微生物學(xué)模型過程中仍需要不斷探索、創(chuàng)新,建立更好更適宜的預(yù)測(cè)模型。對(duì)于實(shí)際食品樣品基質(zhì),以及多種菌株共存的情況,仍然需要基于具體情況對(duì)現(xiàn)有的預(yù)測(cè)模型進(jìn)行修正甚至建立新的且更適合實(shí)際情況的模型。隨著計(jì)算機(jī)和網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的發(fā)展,需要人們把各種模型與其結(jié)合,以最終能向人們提供以面向用戶的可視結(jié)果而不是預(yù)測(cè)模型和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的這個(gè)方向努力。另外,面對(duì)傳統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)的涂布技術(shù)法,耗時(shí)、耗力、精確度低等缺點(diǎn),熒光定量PCR技術(shù)在國(guó)內(nèi)外雖然使用已經(jīng)很成熟,但是大多都停在檢測(cè)技術(shù)上面,沒有把它作為工具利用起來(lái),以替代傳統(tǒng)涂布計(jì)數(shù)。對(duì)于熒光定量PCR可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況,建議應(yīng)該用新型核酸染料疊氮碘化丙錠(PMA:propidium monoazide)、疊氮碘化乙錠(EMA:ethidium monoazide)結(jié)合死菌DNA以阻止定量PCR的隨后擴(kuò)增,從而充分發(fā)揮其優(yōu)點(diǎn)。

目前,很少有人把定量PCR技術(shù)與微生物預(yù)測(cè)模型結(jié)合,一定程度上限制了預(yù)測(cè)微生物的發(fā)展。我們倡議研究人員應(yīng)把熒光定量PCR技術(shù)為主的分子生物技術(shù)在擯棄其缺點(diǎn)的同時(shí)加快應(yīng)用到模型構(gòu)建的進(jìn)程中,進(jìn)而推動(dòng)預(yù)測(cè)微生物學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展。總之,各種先進(jìn)的分子生物技術(shù)是相互協(xié)調(diào)互補(bǔ),而不是排斥,都應(yīng)充分應(yīng)用于預(yù)測(cè)模型的構(gòu)建,以期提高模型的建立速度,減少研究人員的時(shí)間和精力,并最終服務(wù)于企業(yè)的生產(chǎn)和人們的生活。