Bmal1、eIF4E基因在兒童急性淋巴細胞性白血病中的表達 及臨床意義

史利歡 劉 煒 田 亮 劉俊閃 郭明發

河南省兒童醫院，鄭州兒童醫院(河南 鄭州450000)

急性淋巴細胞白血病(ALL)是兒童最常見的惡性腫瘤，占兒童白血病的70%～85%，發病高峰發生在學齡前兒童[1]。患者發病后自身造血干細胞增殖分化功能異常，以至于淋巴細胞數量減少，屬于兒童時期惡性克隆性疾病。針對該疾病的發病機制及疾病原因尚處于研究狀態，但是國外研究人員發現該病可能與基因以及細胞死亡等方面有一定關聯性[2-3]。有報道指出[4-5]，白血病的發生及發展進程中與機體多種基因之間存在關聯性，本次研究對急性淋巴細胞性白血病患兒治療前后Bmal1、eIF4E基因表達水平變化進行研究并分析其相關性，特作以下報道。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月～2017年8月我院收治30例未經任何臨床治療的初治確診急性淋巴細胞性白血病患兒作為研究組，其中男16例，女14例，年齡1～11歲，平均年齡(5.6±1.2)歲，該組患兒經過臨床治療后，采取骨髓形態學、免疫學、遺傳學及分子生物學等檢查其骨髓緩解情況，另選擇健康兒童30例作為對照組，其中男15例，女15例，年齡1～11歲，平均年齡(5.4±1.5)歲，所有患兒均排除心、肝、腎器質性病變，患兒家屬自愿加入本次研究，并簽署相應知情同意文件。患兒一般資料無統計學差異(P>0.05)，醫院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1 樣本：研究組化療前、研究組化療后及對照組兒童留取靜脈血2ml，EDTA抗凝，所有操作在無菌環境下進行。

1.2.2 對血液樣本單個核細胞進行分離：靜脈全血與無菌生理鹽水1∶1混勻稀釋至4ml，血液稀釋液與淋巴細胞分離液以2∶1比例分離單個核細胞，離心20min提取中間白膜層。無菌鹽水反復洗滌后，制備單個核細胞懸液。

1.2.3 RNA提取：單個核細胞懸浮液加入1ml Trizo混勻，常溫靜置5min，加入200μL的氯仿，震蕩混勻，靜置5min后離心15min，取無色水相至離心管內并加入等量異丙醇，10min后再次離心，棄上清靜置3min，加DEPC水20ul，最終選取RNA后逆轉錄合成cDNA。

1.2.4 定量RT-PCR檢測Bmal1、eIF4E mRNA水平：反轉錄用RNA-cDNA試劑盒(ABI，Carlsbad，CA)進行，熒光定量PCR用ABI TaqMan引物和試劑在Roche LightCycler 480II上進行檢測。所有mRNA測量均標準化為β-actin mRNA水平。

2 結果

2.1研究組患兒化療前與化療后Bmal1、eIF4E基因水平對比 研究組患兒化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化療后(P<0.05)，具體見表1。

表1 研究組患兒化療前與化療后Bmal1、eIF4E基因水平對比

2.2研究組患兒化療后與對照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對比 研究組患兒化療后外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對照組(P<0.05)，具體見表2。

表2 研究組患兒化療后與對照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對比

2.3研究組患兒化療前與對照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對比 研究組患兒化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對照組(P<0.05)，具體見表3。

表3 研究組患兒化療前與對照組患兒Bmal1、eIF4E基因水平對比

3 討論

研究發現急性淋巴細胞性白血病患者病情發展受到自身體內多種基因的影響[6]。eIF4E是一種蛋白質合成翻譯起始的限速因子，如細胞核內部的表達超過正常范圍則會加速細胞增生，細胞自身死亡進程受到明顯抑制作用，分裂與死亡失衡狀態下易發生細胞癌變[7]。另外研究還發現多種類型腫瘤細胞內部的eIF4E基因表達均處于升高狀態，充分表明這種基因的表達與腫瘤存在某種關聯性[8-9]。流行病學針對基因的節律性進行大量分析發現，癌癥易感性與之存在一定關聯，并且有研究人員在自身研究結果支持下大膽做出腫瘤的出現與患者機體內晝夜節律的控制基因變化有很大關聯性的設想[10]。并逐步對其進行深入的研究，而Bmal1基因就屬于節律控制的主要核心參與基因之一，對節律的調節起到至關重要的作用，但因內容較為復雜，目前尚處于研究狀態，并未給出準確定量[11]。

研究數據顯示，研究組化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化療后(P<0.05)，研究組化療前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于對照組(P<0.05)，研究組化療后外周Bmal1、eIF4E基因水平高于對照組(P<0.05)。這是因為eIF4E基因是一種單純的限速因子，并不能直接參與癌細胞生成。而研究發現初診患兒該基因表達極高，對于診斷、治療等方面存在明顯的特異性，可作為確診及治療效果判定的主要特異性指標之一，可對患者診斷及預后治療產生積極的影響，具有較高的臨床價值。Bmal1水平變化與患兒疾病進展及化療效果存在明顯的聯系。研究發現50%以上患兒自身Bmal1基因表達處于正常水平，但是另外少部分患兒Bmal1基因則出現甲基化，足以證實該基因表達與疾病發生發展存在關聯性，可在臨床診斷及治療中作為特異性指標使用[12]。

綜上所述，在針對兒童急性淋巴細胞性白血病的初診篩查中，外周血Bmal1、eIF4E基因指標特異性明顯，可作為相關性指標進行篩查診斷，另外因治療對Bmal1、eIF4E基因水平影響效果明顯，也可作為治療效果觀察指標在臨床中使用。