筋舒膠囊抗炎藥效學研究*

劉渝松 ，郭 亮 ，劉才英 ，李 蘭 ，馬善治 ，李 卿 ，葉承莉 ，文 巧 ，郭劍華 △

（1.重慶市中醫骨科醫院，重慶 400012； 2.重慶市中藥研究院，重慶 400065）

筋舒膠囊是全國名中醫郭劍華主任中醫師治療慢性軟組織損傷的經驗方筋舒湯改良劑型而成，具有舒筋活血、養血通絡、補肝益腎的作用，經前期臨床應用，對緩解軟組織腫脹、疼痛療效顯著。本研究中將湯劑改良為膠囊劑，在優選制備工藝參數的基礎上，驗證其對慢性軟組織損傷的抗炎作用，以期為筋舒膠囊的臨床應用提供參考。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試藥與儀器

動物：KM小鼠，SPF級，50只，雌雄各半，動物生產許可證號為 SCXK（渝）2017－0003，動物合格證號為0005271；SD 大鼠，SPF級，140只，雌雄各半，實驗動物生產許可證號為SCXK（渝）2017－0003，動物合格證號分別為 0005274，0005286，0005300。均由重慶市中藥研究院實驗動物研究所提供，分籠飼養，自由攝取自來水，定期更換墊料，室溫 20.4～24.5℃，相對濕度 41% ～58%；壓力37～43 Pa。本研究方案符合動物實驗倫理學原則。

試藥：筋舒膠囊提取物(重慶市中醫骨科醫院，批號為20171001）；醋酸地塞米松片（安徽金太陽生化藥業有限公司，批號為1603142）；云南白藥（云南白藥集團股份有限公司，批號為ZKA1643）；二甲苯（重慶川東化工＜集團＞有限公司，批號為20170301）；戊巴比妥鈉（Sigma公司，批號為908M031）。大小鼠維持飼料（北京科澳協力飼料有限公司，生產許可證為SCXK＜京＞2014－0010，批號為 17103213）。

儀器：R2000－3型電子計重計數秤（奧帝斯儀器＜常州＞有限公司）；BS224S型電子天平，BSA3202S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統公司)；YXQ－LS－50G型立式高溫高壓滅菌器（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；CLW－1020型純水機（重慶乾崍儀器有限公司）；DGF型電熱鼓風干燥箱（重慶銀河試驗儀器有限公司）；S.VS－1300U型凈化工作臺（上海躍進醫療器械有限公司）；FASCO－5010BX型血流變快測儀（重慶大學維多生物工程研究所）；RM2235型輪轉切片機（德國徠卡儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[1－2]

KM小鼠50只，雌雄各半，按體質量分為5組，各10支，即空白對照組，醋酸地塞米松片組（4 mg／kg)，筋舒膠囊高、中、低劑量組（每 1 kg 體質量 20.8，10.4，5.2 g生藥），每組10只。按組別給予相應藥物，給藥體積均為每 1 kg體質量20 mL，每日 1次，連續給藥5 d，空白對照組給予同體積的純化水。末次給藥后1 h，于小鼠右耳涂抹二甲苯每只0.02 mL，20 min后脫頸處死動物，打孔器打下動物左右耳，精密稱取耳片質量，計算，耳腫脹度(g)＝右耳質量－左耳質量，耳腫脹抑制率(%)＝(對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)／對照組平均腫脹度×100%。

1.2.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響[3]

SD大鼠70只，雌雄各半，戊巴比妥鈉麻醉，在前肢腋窩部皮下植入2個滅菌棉球(每個20 mg)，按體質量分為5組，各14只，即空白對照組，醋酸地塞米松片組（2 mg／kg），筋舒膠囊高、中、低劑量組（每 1 kg 體質量10.4，5.2，2.6 g 生藥）。于植入棉球次日起按組別給予相應藥物，給藥體積均為每1 kg體質量10 mL，每日1次，連續給藥7 d，空白對照組給予同體積的純化水。末次給藥后1 h，處死動物，打開原切口，將棉球連同結締組織一起取出，剔除脂肪組織，隨后置于70℃烘箱內烘干并稱棉球干重，棉球干重減去棉球本身質量即為肉芽腫質量，計算，抑制率(%)＝(空白對照組平均肉芽腫質量－給藥組平均肉芽腫質量)／溶劑對照組平均肉芽腫質量×100%。

1.2.3 對大鼠慢性軟組織損傷模型的影響[4－8]

SD大鼠70只，雌雄各半，選取10只動物（雌雄各5只）為空白對照組不造模，其余動物右側大腿部去毛，0.9%戊巴比妥鈉（約 45 mg／kg）腹腔注射麻醉，自制打擊器（將200 g砝碼置于PVC水管中，固定高度80 cm）自由落體在大腿中部外側擊打7次，造成大鼠大腿急性軟組織損傷，不作任何處理正常飼養，經過15 d形成慢性軟組織損傷動物模型。將造模成功的大鼠隨機分為5組，每組不少于10只，按組別給予相應藥物，每日1次，連續7 d，空白對照組和模型組給予同體積的純化水。動物末次給藥后禁食，次日45 mg／kg麻醉后腹主動脈取血，腹主動脈采血約5 mL，分別加入肝素鈉抗凝管（3 mL）和EDTA抗凝管（2 mL），進行血液流變學測定（HCT采用XT－2000i型全自動動物血液分析儀進行測定）。組織病理學檢查，以打擊部位為中心，剪取創傷局部肌肉，放入10%中性福爾馬林溶液中，經充分固定后，按常規取材，石蠟制片HE染色，樹膠封固，光鏡下觀察創傷局部組織和創傷性無菌性炎性反應等病理表現。

2 結果

2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與空白對照組比較，醋酸地塞米松組耳腫度顯著降低（P ＜ 0.01），耳腫脹抑制率為 47.76% 。筋舒膠囊高、中劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用（P ＜0.01），其耳腫脹抑制率分別為 54.51%和 32.87%。提示筋舒膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥模型有明顯抑制作用。結果見表1。

表1 各組二甲苯致小鼠耳腫脹度的比較（s，n＝10）

表1 各組二甲苯致小鼠耳腫脹度的比較（s，n＝10）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.01。

組別空白對照組醋酸地塞米松片組筋舒膠囊 高劑量組中劑量組低劑量組劑量(每kg體質量g生藥)抑制率（%）4 mg／kg 20.8 10.4 5.2腫脹度（ X ± s，g）0.028 ± 0.006 0.014 ± 0.002*0.012 ± 0.005*0.019 ± 0.006*0.023 ± 0.008 47.76 54.51 32.87 16.33

2.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響

與空白對照組比較，醋酸地塞米松片組腫脹度顯著降低（P ＜ 0.01），抑制率為 77.39%；筋舒膠囊高、中劑量組明顯抑制大鼠棉球肉芽腫（P＜0.05），抑制率分別為18.61%和14.54%。提示筋舒膠囊對大鼠棉球肉芽增生有明顯抑制作用。結果見表2。

表2 各組大鼠棉球肉芽腫質量的比較（s，n＝14）

表2 各組大鼠棉球肉芽腫質量的比較（s，n＝14）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別空白對照組醋酸地塞米松片組筋舒膠囊 高劑量組中劑量組低劑量組劑量(每kg體質量g生藥)抑制率（%）2 mg／kg 10.4 5.2 2.6肉芽腫（X ± s，mg）223.5 ± 30.0 50.5 ± 11.7**181.9 ± 36.8**191.0 ± 25.3*206.6 ± 48.4 77.39 18.61 14.54 7.58

2.3 對大鼠慢性軟組織損傷模型的影響

與模型組比較，云南白藥0.4 g／kg能明顯降低高切還原黏度和紅細胞剛性指數（P＜0.01）；筋舒膠囊高、中劑量組有降低高切全血黏度和高切還原黏度的作用趨勢，但未見顯著性差異。結果見表3。與空白對照組比較，筋舒膠囊高、中、低劑量組造模處肌肉病理表現與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05），肌細胞和結締組織出血壞死伴顯微組織增生和炎性細胞浸潤。大鼠造模處組織病理學檢查見表4和圖1。

3 討論

慢性軟組織損傷是因疲勞性損傷、積累性損傷、隱蔽性損傷及急性軟組織損傷久治不愈所產生的一系列癥狀，也稱為陳傷或勞損。臨床急性軟組織損傷后超過2周以上未愈者即為慢性軟組織損傷，屬于中醫學“筋傷”范疇，是由于人體筋、骨、肌肉、脈絡受損，氣血瘀阻，損傷失治、遷延日久，“血虛”“血瘀”并存，從而導致“筋脈瘀滯而失于精血之濡養”，出現腫脹、疼痛、功能受限等癥狀，加之肝腎、氣血虛弱，感受風寒濕邪，致絡脈痹阻，作腫作痛，甚則關節屈伸不利。全國名中醫郭劍華主任中醫師緊緊圍繞“血虛”“血瘀”，以及正虛邪實而擬定經驗方“筋舒湯”，治以舒筋活血、養血通絡、補肝益腎。

表3 各組慢性軟組織損傷模型大鼠血液流變學指標的比較（s）

表3 各組慢性軟組織損傷模型大鼠血液流變學指標的比較（s）

注：與模型組比較，*P ＜0.01。

組別空白對照組（n＝10）模型組（n＝12）云南白藥組（n＝12）筋舒膠囊 高劑量組（n＝12）中劑量組（n＝12）低劑量組（n＝11）劑量(每kg體質量g生藥)全血黏度（s－1）1 0.4 10.4 5.2 2.6 200 4.38 ±0.35 4.75 ±0.37 4.32 ±0.45 4.43 ±0.29 4.57 ±0.34 4.77 ±0.97 11.12 ±0.69 11.06 ±0.35 11.00 ±0.41 11.23 ±0.43 11.04 ±0.46 11.29 ±1.17血漿黏度（mPas·s）1.33 ±0.10 1.35 ± 0.13 1.35 ±0.22 1.33 ±0.06 1.34 ± 0.09 1.27 ±0.40紅細胞壓積（L ／L）0.399 ±0.012 0.393 ± 0.039 0.390 ±0.015 0.391 ±0.024 0.399 ± 0.036 0.374 ±0.020高切還原黏度（s－1）8.53 ±0.57*9.51 ±0.63 8.49 ±0.69*9.14 ±0.69 9.15 ±0.71 9.56 ±1.88低切還原黏度（s－1）25.5±0.7 26.1 ± 1.8 25.5±2.5 27.3±1.6 25.8 ± 1.2 26.3±2.3聚集指數0.96 ±0.05 1.00 ± 0.05 1.00 ±0.28 1.02 ±0.06 0.99 ± 0.04 1.05 ±0.22紅細胞變形指數8.37 ±0.62 8.27 ± 0.66 8.03 ±0.63 8.45 ±0.43 8.24 ± 0.28 8.07 ±0.78剛性指數5.83 ±0.62 6.41 ±0.74 5.49 ±0.70*6.22 ±0.61 6.17 ± 0.38 5.99 ± 0.93

表4 各組慢性軟組織損傷模型大鼠造模處肌肉病理表現程度比較

圖1 各組慢性軟組織損傷模型大鼠造模處肌肉組織病理切片（×100）

現代藥理研究表明，方中君藥當歸的有效成分可明顯抑制微炎癥[9]；臣藥骨碎補具有顯著抗炎止痛作用，其有效成分骨碎補總黃酮對組織胺、5－羥色胺引起的炎癥水腫也有抑制作用，能明顯改善炎癥的紅、腫、熱、痛癥狀，改善關節活動能力[10]；《神農本草經》《本草綱目》均將杜仲列為上品，其具有顯著的抗炎作用，其有效成分桃葉珊瑚苷是主要抗炎活性成分[11]；乳香提取物及三萜類成分對多種急慢性炎癥模型均有抗炎作用，且乳香炮制后抗炎作用顯著增強[12－13]；川牛膝、丹參有活血和改善微循環及促進組織的修復與再生的作用[14－16]。故采用二甲苯致小鼠耳腫脹、大鼠棉球肉芽腫及慢性軟組織損傷大鼠模型等試驗方法，考察筋舒膠囊的抗炎作用，并觀察創傷局部肌肉組織形態學。

本研究結果表明，筋舒膠囊高、中劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹、棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，耳腫脹抑制率分別為54.51%和32.87%，肉芽腫抑制率分別為18.61%和14.54%；筋舒膠囊高、中劑量組有降低大鼠高切全血黏度和高切還原黏度的作用趨勢，造模顯著性的引起大鼠軟組織損傷部位肌細胞和結締組織出血壞死伴纖維組織增生和炎性細胞浸潤，筋舒膠囊各劑量組均能對模型引起的軟組織損傷有明顯改善和修復作用。

綜上所述，筋舒膠囊具有明顯的抗炎作用，可用于治療慢性軟組織損傷，質量穩定、可控，值得推廣。