消腫片中楓香脂的鑒別與松香酸的檢查

黃海燕，饒偉文，鐘建理

（廣西桂林市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 桂林 541001）

消腫片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第七冊(cè))》，由楓香脂、沒藥、當(dāng)歸、制草烏、地龍、乳香、馬錢子、香墨和五靈脂9味中藥組方，具有消腫拔毒功效，用于瘰疬痰核、流注、乳房腫塊、陰疽腫毒等[1]。方中楓香脂、乳香、沒藥均為樹脂類原料藥，且楓香脂為君藥，用量比較大。楓香脂質(zhì)量參差不齊，市場(chǎng)摻雜、摻假現(xiàn)象嚴(yán)重，而乳香和沒藥為進(jìn)口藥材，來(lái)源有限，價(jià)格較貴，市場(chǎng)上常有偽劣品出現(xiàn)[2－3]。偽劣楓香脂、乳香、沒藥藥材多為用松香摻假，含有松香酸，如誤用于中成藥生產(chǎn)中，將嚴(yán)重影響中成藥的質(zhì)量。本研究中采用高效液相－二極管陣列（HPLC－DAD）法檢測(cè)5個(gè)廠家的5批消腫片樣品，結(jié)果檢出有松香酸的4批；同時(shí)，楓香脂薄層色譜（TLC）法鑒別試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，結(jié)果僅有1批檢出楓香脂，其余4批未檢出。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（分離單元－Waters 2998 PAD檢測(cè)器，Waters公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒 －托利多公司）；KQ－600E型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER4全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，CAMAG TLC Visualizer薄層色譜照相儀，均購(gòu)于CAMAG公司。

1.2 試藥

松香酸對(duì)照品(批號(hào)為111938－201201)，楓香脂對(duì)照藥材(批號(hào)為121637－201201)，均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水；硅膠GF254預(yù)制薄層板（青島鼎康硅膠有限公司）；消腫片（市售品，5批）。

2 方法與結(jié)果

2.1 楓香脂TLC法鑒別

取本品2片，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。按消腫片處方比例，制備不含楓香脂的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取楓香脂對(duì)照藥材0.2 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。照TLC法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚 (60～90℃)－乙酸乙酯－冰醋酸(9 ∶1 ∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見圖1。

圖1 楓香脂薄層色譜圖

2.2 松香酸含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAX SB－C18柱(250 mm×4.6mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈 －0.1% 甲酸溶液(82 ∶18)；檢測(cè)波長(zhǎng)：241 nm，DAD檢測(cè)器采集 200～400 nm光譜圖；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2.2 溶液制備

取松香酸對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL置20 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，制成每 1 mL含5 μg的對(duì)照品溶液。取本品研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，稱定質(zhì)量，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.3 測(cè)定方法

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以色譜峰的保留時(shí)間及DAD的紫外吸收?qǐng)D譜進(jìn)行定性鑒別。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)位置上不得出現(xiàn)相同的色譜峰，若出現(xiàn)保留時(shí)間相同的色譜峰，采用二極管陣列檢測(cè)器比較相應(yīng)色譜峰的紫外－可見吸收光譜，吸收光譜應(yīng)不同；若吸收光譜相同，則視為檢出松香酸。如檢出，則以外標(biāo)法計(jì)算樣品中松香酸的含量。色譜圖見圖2和圖3。

圖2 高效液相色譜圖

圖3 松香酸二極管陣列吸收?qǐng)D

2.2.4 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn)：取松香酸對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果松香酸峰面積的 RSD為0.86%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為 5.053 6 μg／mL的松香酸對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 1，2，5，10，20，50 μL 測(cè)定。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝2.304 9 X－1.307 1，r＝0.999 9(n ＝6)。結(jié)果表明，松香酸進(jìn)樣量在 5.053 6 ～252.680 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

空白試驗(yàn)：按處方自制消腫片樣品，按2.2.3項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果未檢出松香酸，表明該方法無(wú)干擾。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液 1份，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 0.34%(n＝6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱取同一批(1號(hào))樣品6份，分別測(cè)定松香酸含量。結(jié)果平均含量為1.624 4 mg／g，RSD為0.77%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知松香酸含量的消腫片樣品(松香酸含量為 1.624 4 mg ／g)約 0.1 g，共 9 份，分別加質(zhì)量濃度為 0.051 8 g／L的對(duì)照品溶液 3 mL，為0.103 6 g／L 的 3 mL，為 0.051 8 g／L 的 10 mL，再分別精密加入乙醇20，20，10 mL，稱定質(zhì)量，依法制備供試品溶液，測(cè)定松香酸的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 松香酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

檢出限和定量限測(cè)定：分別精密量取質(zhì)量濃度為0.005 054 g／L 和 0.050 540 g／L 的松香酸對(duì)照品溶液各2 mL置錐形瓶中，再分別加入自制消腫片樣品0.203 3，0.202 6 g，依法制備供試品溶液，測(cè)定。結(jié)果松香酸色譜峰的信噪比(S／N)分別為4和13，方法的檢出限為 0.05 mg ／g，定量限為 0.50 mg ／g。

耐用性試驗(yàn)：曾試驗(yàn)不同色譜柱[DIKMA Inertsil ODS－3 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，資生堂 CAPCELL PAK C18MG 柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)]，以及液相色譜儀Agilent 1260型液相色譜儀(DAD檢測(cè)器)，其測(cè)定結(jié)果均一致。

2.2.5 樣品含量測(cè)定

取不同廠家的樣品，依法制備供試品溶液，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果5批消腫片中有4批未鑒別出楓香脂卻檢出了松香酸，只有1批鑒別出楓香脂而且未檢出松香酸。詳見表2。

表2 5批樣品松香酸含量檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 展開劑選擇

曾比較了中國(guó)藥典中楓香脂鑒別項(xiàng)的展開劑正己烷－石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰醋酸(6∶2∶3∶0.2)，但楓香脂的主斑點(diǎn) Rf值偏高，故采用原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(批準(zhǔn)件編號(hào)為2016005)中相關(guān)楓香脂中松香酸檢查項(xiàng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的展開劑石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯 －冰醋酸(9 ∶1∶0.1)[4]；同時(shí)，楓香脂的主斑點(diǎn) Rf值約為0.6，展開效果較理想，且陰性無(wú)干擾。

3.2 流動(dòng)相選擇

曾參照楓香脂中松香酸檢查項(xiàng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法試驗(yàn)流動(dòng)相乙腈－四氫呋喃－0.1%甲酸溶液(35∶25∶40)，但楓香脂在松香酸色譜峰相近保留時(shí)間處出現(xiàn)干擾峰，不易分離。

3.3 檢測(cè)指標(biāo)選擇

現(xiàn)已有很多對(duì)處方中含有乳香和沒藥等樹脂類原料藥的中成藥進(jìn)行松香酸檢查[4－8]和補(bǔ)充方法如聶儉林等[9]進(jìn)行了消腫片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，對(duì)當(dāng)歸、地龍、五靈脂進(jìn)行鑒別，對(duì)烏頭堿進(jìn)行限量檢查，對(duì)士的寧進(jìn)行含量測(cè)定，但尚無(wú)對(duì)消腫片進(jìn)行松香酸檢查和楓香脂鑒別研究的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究中收集5個(gè)廠家的5批消腫片，結(jié)果4個(gè)廠家的4批檢出了不該有的松香酸，應(yīng)為楓香脂、乳香、沒藥原料藥帶入，同時(shí)這4批卻未檢出處方中為君藥的楓香脂，說(shuō)明生產(chǎn)時(shí)未投料楓香脂或使用了假楓香脂。4批樣品中松香酸的含量測(cè)定結(jié)果相差也很大，說(shuō)明其原料的摻假程度也各不相同。可見，消腫片生產(chǎn)廠家未能有效控制原料藥質(zhì)量，市場(chǎng)上消腫片的質(zhì)量參差不齊。本方法簡(jiǎn)單、可靠，可用于提高消腫片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。