肝細(xì)胞癌患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶7、高爾基體蛋白73和白細(xì)胞介素17水平變化及其臨床意義

馮煦 史沛

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常見的惡性腫瘤之一，其病死率極高。目前，肝臟組織活檢仍是診斷HCC的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于肝組織活檢存在創(chuàng)傷性，較難被人們接受，且不能對患者進(jìn)行實時評估[1]。因此，尋找敏感度和特異性均較高的腫瘤標(biāo)志物對HCC患者進(jìn)行診斷及預(yù)后評估就顯得尤為重要。據(jù)文獻(xiàn)報道基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)、高爾基體蛋白(GP73)和白細(xì)胞介素17 (IL-17)均在HCC的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[2-3]。關(guān)于MMP-7、IL-17及GP73與HCC患者預(yù)后的研究尚無報道。因此，本研究檢測HCC患者血清中MMP-7、GP73及IL-17的水平，探討其診斷HCC患者預(yù)后的效能。

資料與方法

一、一般資料

選擇2015年1月至2016年12月期間我院腫瘤科收治的HCC患者(HCC組)57例，HCC診斷依據(jù)《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》[4]，并經(jīng)病理學(xué)檢查確診，其中男性33例，女性24例，年齡(52.4±6.2)歲。肝硬化患者(肝硬化組)62例，其中男性38例，女性24例，年齡(51.3±5.4)歲。擇同期健康體檢者60例作為健康對照，其中男性34例，女性26例，年齡(50.7±6.5)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有肝占位性病變患者；(2)合并有急、慢性感染性疾病患者；(3)孕產(chǎn)婦及哺乳期的婦女；(4)存在心、腎功能不全患者；(5)術(shù)前該接受靶向治療、免疫治療、放化療等患者；(6)合并其他部位惡性腫瘤。三組在年齡(F=2.642，P=0.074)、性別(χ2=0.289，P=0.865)方面比較，均不具有統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性(P>0.05)。所有研究均征得患者同意，簽署了知情同意書，且本次研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，同意開展。

二、方法

(1)檢測方法：抽取三組受試者清晨外周空腹靜脈血4 mL，離心后-80℃環(huán)境中保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測三組受試者血清MMP-7、IL-17及GP73水平，MMP-7、IL-17及GP73試劑盒均由上海喬羽生物科技有限公司提供。本次實驗步驟嚴(yán)格參閱試劑盒及以期說明書。

(2)治療方法：肝動脈化療栓塞術(shù)，患者行股動脈穿刺，在股動脈內(nèi)植入動脈導(dǎo)管鞘，將RH導(dǎo)管插入腹腔動脈，肝固有動脈、肝左葉或肝右葉動脈造影，將膽管固定后經(jīng)固有動脈緩慢注入順鉑注射液(Hospira Australia Pty Ltd)和氟尿嘧啶注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司)，最后注入表柔比星注射液(浙江海正藥業(yè)股份有限公司)和40%碘化油乳劑制成的乳化劑，退出導(dǎo)管到肝固有動脈再次造影，腫瘤染色消失，操作完成。每4周治療1次，共治療3次。檢測并記錄治療前及治療3次后HCC患者M(jìn)MP-7、GP73及IL-17水平，并對患者進(jìn)行隨訪，觀察其1年生存情況。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS 19.0軟件作數(shù)據(jù)分析，服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，三組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用S-N-K檢驗。不服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，組間比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料用n(%)表示，用卡方檢驗比較。用受試者工作特征曲線(ROC)評價MMP-7、IL-17級GP73診斷HCC患者預(yù)后的效能；用K-M和log-rank檢驗分析MMP-7、IL-17及GP73與HCC患者預(yù)后的關(guān)系。P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、 三組受試者血清MMP-7、GP73及IL-17水平比較

HCC患者血清中MMP-7、GP73、IL-17表達(dá)水平均高于肝硬化患者和健康對照者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組受試者血清MMP-7、GP73和IL-17水平比較

注：與健康組比較，①P<0.05；與肝硬化組比較，②P<0.05

二、HCC患者治療前后血清MMP-7、GP73、IL-17的變化

57例患者HCC患者接受動脈栓塞化療，治療期間無死亡病例。治療后，MMP-7、GP73、IL-17水平均降低(t/U=2.961、3.379、3.681，P=0.009、0.007、0.000)。

表2 HCC患者治療前后血清MMP-7、GP73、IL-17水平的變化

注：與治療前比較，①P<0.05

三、HCC患者1年生存預(yù)后

對患者進(jìn)行為期一年的電話隨訪，其中有12例患者死亡，占比21.1%，生存45例，占比78.9%。

四、不同預(yù)后患者的血清MMP-7、GP73、IL-17水平

HCC患者死亡組患者血清MMP-7、GP73、IL-17水平明顯高于生存組患者(t/U=4.087、5.372、2.329，P=0.007、0.000、0.018)。

表3 不同預(yù)后患者的血清MMP-7、GP73、IL-17水平[M(Q1,Q3)]比較

注：與存活組比較，①P<0.05

五、MMP-7、GP73、 IL-17及聯(lián)合檢測診斷HCC患者預(yù)后的效能

血清MMP-7評估HCC患者預(yù)后的約登指數(shù)最大為0.551，其最佳截斷點為7.1 ng/mL；血清GP73評估HCC患者預(yù)后的約登指數(shù)最大為0.651，其最佳截斷點為68.6 ng/mL；血清IL-17評估HCC患者預(yù)后的約登指數(shù)最大為0.471，其最佳截斷點為53.7 pg/mL。ROC曲線下面積比較，AUC聯(lián)合檢測>AUCMMP-7，AUC聯(lián)合檢測>AUCGP73，AUC聯(lián)合檢測>AUCIL-17，差異均不具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z值分別為2.933，2.038，2.946，P均<0.05)；AUCGP73>AUCMMP-7，AUCGP73>AUCIL-17，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z值分別為1.256,1.490，P均>0.05)；AUCIL-170.05)。見圖1、表4。

六、MMP-7、GP73及IL-17的表達(dá)與HCC患者的生存預(yù)后

HCC患者中MMP-7>7.1 ng/mL的1年生存率為50.0%(8/16)，MMP-7≤7.1 ng/mL的1年生存率為90.2%(37/41)，兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.215，P=0.001)；HCC患者中GP73>68.6 ng/mL的1年生存率為41.2%(7/17), GP73≤68.6 ng/mL的1年生存率為87.5%(35/40)，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.202，P=0.000)；HCC患者中IL-17>53.7 pg/mL的1年生存率55.6%(10/18)，IL-17≤53.7 pg/mL的1年生存率為94.9%(37/39)，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.160，P=0.000)。

圖1 MMP-7、GP73、IL-17及聯(lián)合檢測評估患者預(yù)后的ROC曲線

表4 MMP-7、GP73、IL-17及聯(lián)合檢測評估患者預(yù)后的ROC曲線的曲線下面積

討 論

HCC患者在中晚期才被確診，此時癌細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，手術(shù)無法徹底根除，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量[6]。及時發(fā)現(xiàn)HCC并采取有效的治療可提高患者生存質(zhì)量，改善預(yù)后，降低死亡率。選擇與腫瘤大小、組織發(fā)展等密切相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物是當(dāng)前臨床急需解決的問題。

MMP-7是一種基質(zhì)溶解素，能夠降解基底膜和相關(guān)屏障。報道稱，在IL-17的作用下，MMP-7的活性增強(qiáng)，進(jìn)而參與腫瘤細(xì)胞上皮細(xì)胞間質(zhì)的轉(zhuǎn)化，MMP-7水平在腫瘤上皮細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，其能作用于胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白，延緩細(xì)胞凋亡，從而引起腫瘤細(xì)胞大量繁殖，通過抑制MMP-7，可以進(jìn)一步抑制腫瘤細(xì)胞的生長[7]。本研究結(jié)果顯示HCC患者血清MMP-7水平高于肝硬化組、健康對照組，提示MMP-7可能與HCC的發(fā)生、發(fā)展存在某種關(guān)系。GP73是位于9號染色體上的一種編碼基因，其高表達(dá)于病變的肝細(xì)胞，而在正常人血清中表達(dá)水平相對較低。Zhao等[8]研究表明，HCC患者血清中GP73的水平明顯高于肝硬化患者，提示其可用于判別HCC。本研究得知，血清GP73在HCC組患者中水平最高，提示其可作為判別HCC的潛在標(biāo)記物。有研究顯示，腫瘤組織中IL-17水平異常升高且與腫瘤血管形成有關(guān)。IL-17能夠促進(jìn)VEGF大量分泌，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的生長、發(fā)展[9]。本研究結(jié)果表明HCC組血清IL-17水平顯著高于肝硬化組和健康對照組。且HCC死亡患者M(jìn)MP-7、GP73及IL-17表達(dá)水平明顯升高，提示其可作為預(yù)測預(yù)后的潛在指標(biāo)。ROC曲線分析顯示，MMP-7預(yù)測HCC患者1年后死亡的AUC為0.778，存在一定的不足。GP73預(yù)測HCC患者1年后死亡的效能略高于MMP-7，但仍不能滿足臨床需求；IL-17預(yù)測HCC患者1年后死亡的AUC為0.767，其效能較低的原因可能為干擾因素較多。此外，ROC曲線下面積比較發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測的AUC最大為0.966，說明聯(lián)合檢測診斷HCC的效能要高于MMP-7、GP73和IL-17單獨診斷。通過研究MMP-7、GP73及IL-17的表達(dá)與HCC患者預(yù)后的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，血清MMP-7>7.1 ng/mL、GP73>68.6 ng/mL患者的1年生存率高于血清MMP-7≤7.1 ng/mL、GP73≤68.6 ng/mL的患者，提示，MMP-7、GP73與HCC患者預(yù)后關(guān)系密切，了解二者水平可有助于評估患者預(yù)后。

綜上所述，HCC患者血清中MMP-7、GP73及IL-17水平均較高，三者聯(lián)合檢測有助于HCC患者病情及預(yù)后的評估。下一步將對HCC患者病理組織中的MMP-7、GP73和IL-17進(jìn)行研究，并探討其與臨床病理的相關(guān)性。