藍白光膜對靈芝田間生長、多糖含量及三萜含量的影響

孫恬，郭愛玲

（天方?。ㄖ袊┧帢I有限公司 廣東廣州 510623）

靈芝(Ganoderma lucidum)屬擔子菌綱多孔菌目多孔菌科靈芝屬真菌，在我國有2000多年藥用歷史[1]。目前，靈芝以人工栽培為主，在很多地方已經形成頗具規模的規范化種植基地[2]。靈芝種植基地的環境因素對靈芝產量和品質有較大影響[3]。光照是食用菌發育過程中一個重要因素。光照的作用機制復雜，既能刺激食用菌的生長，也能促進其發育。不同光質影響著食用菌子實體生長發育階段原基形成的狀況、菌柄的粗細和菌蓋的大小[4-5]。本實驗以白膜和藍膜覆蓋大棚，研究靈芝子實體的光生物學特性，為靈芝種植基地人工栽培生產科學補光，提供可靠的理論依據。

許多研究表明藍光處理影響各種真菌的生長：李巧珍等[6]研究表明藍光處理的刺芹側耳子實體商品價值最高。孫雅潔等[7]以杏鮑菇為試材，藍光處理子實體菌蓋普遍偏大，菇體形態均表現為畸形。有研究表明藍光能促進靈芝子實體多糖三萜含量的積累[8]。王立華等[4]表明藍光處理的靈芝菌絲體生長快速，菌絲濃密，多糖含量顯著高于其他處理組。真菌依靠光受體來感受光信號并傳遞信號調控相關光反應，藍光幾乎介導所有真菌的光反應，藍光受體主要有wc-1、wc-2和vivid蛋白[9]，克隆靈芝S3中的藍光受體基因Glwc-1和Glwc-2，發現藍光刺激可能會使Glwc-1和Glwc-2的相對表達量上升，從而啟動藍光誘導的一系列反應[10]。

靈芝多糖合成主要有2條支路[11]，一條是從葡萄糖-6-磷酸到葡萄糖-1-磷酸，關鍵酶其中包括α-PGM；另一條從葡萄糖-6-磷酸到果糖-1-磷酸，起關鍵作用的酶是PGI。有研究表明[12]藍光處理對于靈芝子實體產量有明顯的促進作用，促進多糖的積累，提高PGI、α-PGM酶活，說明PGI、α-PGM是靈芝多糖合成的關鍵酶。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

靈芝子實體種植試驗設計兩組，分別為白膜覆蓋大棚種植靈芝的對照組，以及藍膜覆蓋大棚種植靈芝的實驗組，每組設置3個大棚。

1.2 試驗方法

1.2.1 靈芝子實體生物量測定

不同試驗栽培架分別覆蓋白膜和藍膜，將在自然光條件下形成原基的菌袋分別放入各培養架，每組設置50袋，連續培養24 d，每組隨機采收4層、5層、6層的靈芝子實體各5個，測定子實體鮮重。每個實驗組重復測量3次。

1.2.2 靈芝子實體多糖含量的測定

苯酚硫酸法測定多糖含量。（1）標準曲線繪制。稱取105 ℃干燥至質量恒定的葡萄糖配成0.1 mg/mL的葡萄糖標準溶液。準確吸取標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL和1.2 mL，分別置于比色管中，各加蒸餾水使體積為2.0 mL。再各加入6%的苯酚1.0 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0 mL。靜置10 min后，搖勻，待反應液完全冷卻后，于波長490 nm條件下測定其吸光度值，以水作空白試驗。以葡萄糖含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線。（2）供試品溶液的制備。樣品粉碎過60目篩，取0.5 g于50 mL具塞離心管，用5 mL水浸潤樣品，緩慢加入20 mL無水乙醇，同時渦旋；將樣品置于超聲提取器中150 W提取30 min，結束后，于4 000 r/min離心10 min，棄去上清，不溶物用10 mL 80%的乙醇洗滌離心；用50 mL蒸餾水將上述不溶物轉移至圓底燒瓶，沸水浴回流提取2 h；冷卻至室溫，過濾，將上清移至100 mL容量瓶中，洗滌殘渣2～3次，用水定容；取10 mL按1:3過夜醇沉，沉淀用水復溶，定容至10 mL后按苯酚硫酸法測定含量。每個實驗組重復測量3次。

1.2.3 靈芝子實體三萜含量的測定[6,13]

（1）對照品溶液的配制：齊墩果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。（2）標準曲線的制備：精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4 mL和0.5 mL，分別置15 mL具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即置冰浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在546 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、齊墩果酸濃度為橫坐標繪制標準曲線。（3）供試品溶液的制備與測定：取本品粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50 mL，超聲處理（功率140W，頻率42 kHz）45 min，過濾，濾液置100 mL量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。精密量取供試品溶液0.2 mL，置15 mL具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計算，即得。每個實驗組重復測量3次。

2 結果與討論

2.1 標準曲線的繪制

2.1.1 多糖標準曲線

圖1 葡萄糖標準曲線

標準曲線方程為y=9.2285x+0.0129，R2=0.9991，說明線性關系良好。

2.2.2 三萜含量標準曲線

圖2 齊墩果酸標準曲線

標準曲線方程為y=4.5306x-0.0056，R2=0.9994，說明線性關系良好。

2.2 不同光質對靈芝生物量的影響

采用白膜和藍膜栽培的靈芝子實體重量分析顯示，其生長過程沒有顯著差異（圖3）。4層、5層、6層子實體的質量在150 g左右，6層子實體的重量在210 g左右。藍膜的靈芝子實體4層，5層以及6層的生物量較對照組稍高，但差異不顯著。

圖3 不同光膜處理靈芝子實體生物量變化

2.3 不同光質對靈芝子實體多糖含量的影響

藍膜種植的靈芝子實體多糖含量高于對照組（圖4）。在兩種種植方式中，5層子實體的多糖含量高于4層和6層，且藍膜都高于白膜。白膜中5層子實體的多糖含量為3.5%，而藍膜中達到了4.8%。顯示藍膜栽培有助于子實體中多糖含量的提高。

2.4 不同光質對靈芝子實體三萜含量的影響

由圖5可知，藍膜栽培提高了子實體中的三萜含量。藍膜組4層子實體三萜含量為0.69%，白膜組為0.53%；藍膜栽培5層子實體中三萜含量達到0.89%，白膜對照組三萜含量為0.81%。實驗結果顯示，藍膜栽培有助于提高子實體中的三萜含量。

圖4 不同光膜處理靈芝子實體多糖含量變化

圖5 不同光膜處理靈芝子實體三萜含量的變化

3 結論

食用菌發育過程中，光質條件是一個不可忽略的因素。靈芝多糖、三萜是靈芝的主要活性成分，研究含量變化規律對靈芝的生產具有重要意義。本文研究藍白光膜對于靈芝4,5,6層子實體生物量積累，多糖含量以及三萜含量的影響。研究結果表明藍膜栽培靈芝子實體生物量與白膜組差異不顯著，而藍膜組的多糖含量均高于白膜組，三萜含量也較白光組總體增加，總體來說，藍光利于靈芝子實體活性成分的提高。實際生產中，可以在生長發育時期對靈芝子實體進行一定時間的藍光照射或者藍膜栽培，增加子實體中多糖和三萜的含量，提高靈芝子實體的品質。