高效液相色譜法測定化妝品中的辛酰羥肟酸

莫庭源，葉凌聰，梁文耀，劉鳳丹，魏海峰

（廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院，廣東廣州 511447）

化妝品配方中原料種類繁多，在pH、溫度等條件適宜的情況下，環(huán)境微生物入侵會引起產(chǎn)品腐敗變質(zhì)，因此，防腐劑在化妝品配方中極其重要[1]。防腐劑可以通過抑制細胞中基礎(chǔ)代謝酶的合成或重要生命物質(zhì)核酸和蛋白質(zhì)的合成，起到阻礙細胞生長的作用[2]，是一種長時間維持化妝品品質(zhì)的保護劑[3]。

辛酰羥肟酸，又稱辛基羥肟酸、辛酰異羥肟酸或N-羥基正辛酰胺，是一種低毒且高效的螯合類捕獲劑[4-8]，它能強效抑制和通過螯合金屬離子對抗霉菌，通過穩(wěn)定體系中的部分無機鹽防腐[9]，是一種新型的化妝品防腐劑。

傳統(tǒng)的化妝品防腐劑多為化學(xué)合成品，當(dāng)其使用量大或長期使用時，會產(chǎn)生較大的不良反應(yīng)，對身體產(chǎn)生一定的危害，嚴(yán)重者甚至可能導(dǎo)致癌變[10-11]。相比之下，辛酰羥肟酸具有優(yōu)異的抗菌、抑菌性能，可用于不含化學(xué)防腐劑配方體系。

由于辛酰羥肟酸不在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）的防腐劑列表中，卻具有良好的防腐性能，所以越來越多化妝品生產(chǎn)商把其當(dāng)作防腐劑添加到化妝品中，同時宣稱其產(chǎn)品“不含防腐劑”，以達到宣傳效果，因為無添加防腐劑的化妝品更受消費者青睞[12]。

目前，尚未有相關(guān)文獻報道化妝品中辛酰羥肟酸的檢測方法，本研究擬建立起化妝品中辛酰羥肟酸含量測定的高效液相色譜法，為監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量提供技術(shù)支持，進一步規(guī)范化妝品防腐劑的使用。

1 實驗部分

1.1 試劑和儀器

辛酰羥肟酸對照品（CAS No：7377-03-9），甲醇（色譜純，美國Spectrum公司），實驗用水為超純水（Milli-Q超純水系統(tǒng)，美國Millipore公司），甲酸（色譜純，阿拉丁），SK8200HP超聲清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司），Agilent 1260高效液相色譜儀（配備自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器），IKA MS3 digital渦旋混勻器（德國IKA公司），分析天平[感量為0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]，離心機[曦瑪離心機（揚州）有限公司]。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；流動相：甲醇+0.1%甲酸水溶液（55+45，v/v），等度洗脫，分析時間15 min；檢測波長：210 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取一定質(zhì)量的辛酰羥肟酸對照品于50 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解后，用甲醇定容至刻度線，配制成濃度為2 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別精密吸取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10 mL具塞比色管中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度分別為1、10、20、50、100、150 μg/mL和200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣品溶液的制備

稱取樣品1 g（精確至0.000 1 g）于10 mL具塞比色管中（必要時，置于水浴中去除乙醇等揮發(fā)性有機溶劑），用甲醇定容，渦旋混勻，超聲提取15 min，靜置至室溫（必要時取適量于5 000 r/min離心5 min），經(jīng)0.22 μm過濾膜過濾后待測。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

辛酰羥肟酸在甲醇中具有良好的溶解性，且膏霜、乳、液類化妝品在甲醇中均具有良好的分散性，因此本方法采用甲醇作為提取試劑。為考察超聲時間和溫度對提取效率的影響，在空白樣品中加入一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同時間和溫度下進行提取，結(jié)果表明超聲時間為15 min，超聲溫度為25 ℃即可達到理想的提取效果。采用甲醇+0.1%甲酸水溶液作為流動相，對于不同類型和不同pH值的化妝品樣品分離度高，有效減少基質(zhì)的干擾。在優(yōu)化的色譜條件下，在210～400 nm波長內(nèi)掃描，結(jié)果顯示辛酰羥肟酸在210 nm附近有較強的紫外吸收，因此選擇210 nm作為檢測波長。辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖如圖1所示，可見在此色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰型良好。

圖1 辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 樣品譜圖

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 線性范圍、工作曲線、檢出限

取1.3所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在本實驗條件下對辛酰羥肟酸進行測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果顯示，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，辛酰羥肟酸呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限見表1。

2.3 回收率與精密度

取膏霜類、乳液類、液態(tài)水基類3種空白基質(zhì)為加標(biāo)基質(zhì)，按本實驗條件進行低、中、高（20 mg/L、100 mg/L、150 mg/L）3個加標(biāo)水平的回收率和精密度實驗，結(jié)果顯示，3個加標(biāo)水平的回收率為97.2%～104.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%～1.90%（n=6），表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，可滿足辛酰羥肟酸含量測定的要求（見表2）。

2.4 重復(fù)性實驗

選取一個已知含有辛酰羥肟酸的化妝品樣品，按1.4平行制備6份樣品溶液進行分析，計算樣品中辛酰羥肟酸的質(zhì)量濃度，以6次測定值考察本方法的重復(fù)性，結(jié)果顯示，6次平行的RSD值為1.09%（n=6）。實驗表明，本方法重復(fù)性好。

表1 辛酰羥肟酸的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限

2.5 實際樣品檢測

對20批次不同類型化妝品樣品中辛酰羥肟酸含量進行測定。結(jié)果顯示，保濕霜、精華乳、柔膚水各有一批次檢出辛酰羥肟酸，結(jié)果分別為0.018%、0.037%、0.019%。

3 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法測定化妝品中辛酰羥肟酸的含量測定方法。樣品采用甲醇作為提取溶劑，超聲作為提取方式，采用Waters XBridge C18色譜柱進行分離，所建方法能將目標(biāo)化合物和雜質(zhì)有效分離，前處理方式簡單快捷，準(zhǔn)確性好，精確度高，應(yīng)用范圍廣，可進一步規(guī)范化妝品中防腐劑的使用，為監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量提供技術(shù)支持。