不同方法提取車前草蛋白質(zhì)效果比較

李 蒙

(西安文理學院 生物與環(huán)境工程學院， 陜西 西安 710065)

車前草(PlantagoasiaticaL.)屬于車前科多年草本植物，在自然界分布廣泛，主要生長于山野或路旁等處，其種子和全草均可入藥，民間采集幼苗經(jīng)加工成美味而食用，能調(diào)節(jié)胃腸功能，具有解毒、清熱利尿、治療痰熱咳喘等功效[1-2]。

蛋白質(zhì)資源緊缺成為世界性問題，由于我國人口眾多，資源缺乏尤為嚴重，幾乎每年都進口大量的蛋白質(zhì)飼料原料，因此，蛋白質(zhì)資源的開發(fā)利用具有重要的意義[3]。具有藥食兩用的車前草是一種極具開發(fā)潛力的植物蛋白質(zhì)資源，目前關(guān)于蛋白質(zhì)提取方法有很多[4]，不同植物中各種成分的差異，故采取不同的提取方法，而從車前草中提取蛋白的方法至今鮮見報道。因此，本研究由必要對車前草葉片的蛋白質(zhì)的提取方法進行探索，以期為今后車前草蛋白質(zhì)的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

前草種子(采摘于陜西省商洛市商州區(qū)黑龍口鎮(zhèn)山野車)，種植于西安文理學院植物繁育單元溫室中，四十天后，采摘新鮮車前草葉片洗凈晾干后，研成粉末，作為實驗材料。

1.2 試劑與儀器設(shè)備

試劑：三羥甲基氨基甲烷(Tris，分析純)，氯化鈉(分析純)，考馬斯亮藍G250( 超純，Amresco)等實驗所用分析純試劑。

儀器： 紫外·可見分光光度計(型號：UV-2450，島津公司)，全自動鼓風干燥箱(型號：ZFD-5250A，陜西天美)，電子天平(型號：BSA223S，上海智泰電子科技)，恒溫水浴鍋(型號：HH-S，北京科偉)，臺式高速冷凍離心機(型號：H1850R，湘儀)。

1.3 方法

1.3.1 蛋白質(zhì)的提取方法 堿、鹽、Tris-HCl提取方法：準確稱取約1 g實驗材料，按表1和表2進行試驗，經(jīng)浸提時間、浸提溫度，離心去除殘渣，上清用紗布過濾，然后用2 mol·L-1的稀鹽酸調(diào)節(jié)pH(Tris-HCl提取：加入飽和硫酸銨充分攪拌1 h)有大量沉淀，再12 000 r·min-1離心10 min，再透析得到粗蛋白，再50～60 ℃下烘干至恒重。

表1 正交試驗因素與水平

表2 不同方法測定因素與水平

1.3.2 測定蛋白質(zhì)含量 根據(jù)文獻[5]Bradford法，以牛血清蛋白標準溶液(濃度為6%)，加入G-250試劑，在波長595 nm下測定吸光度，繪制標準曲線。

計算方法：蛋白質(zhì)得率(%)=(粗蛋白提取質(zhì)量/稱取葉片樣品質(zhì)量)×100%。運用Excel數(shù)據(jù)處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 堿法提取蛋白結(jié)果分析

從表3正交試驗分析可知，四種因素影響蛋白提取效果為B>D>C>A，堿提取車前草蛋白質(zhì)最佳工藝為A3B1C2D2，即堿液濃度為1.5 %，浸提溫度為60 ℃，抽提60 min，固液體積比1∶ 10。

2.2 鹽法提取蛋白結(jié)果分析

從表4正交試驗分析可知，四種因素影響蛋白提取效果為A>B>D>C，鹽提取車前草蛋白質(zhì)最佳工藝為A3B1C2D1，即鹽濃度為1.5 %，浸提溫度為60 ℃，抽提時間為60 min，固液體積比為1∶ 5。

2.3 Tris-HCl法提取蛋白結(jié)果分析

從表5正交試驗分析可知，四種因素影響蛋白提取效果為B>A>D>C，Tris-HCl提取車前草蛋白質(zhì)最佳工藝為A3B1C3D3，即Tris-HCl緩沖液pH值為8.0，浸提溫度為20 ℃，抽提時間為90 min，固液體積比為1:15。

表3 堿法的正交試驗結(jié)果

表4 鹽法的正交試驗結(jié)果

表5 Tris-HCl法的正交試驗結(jié)果

3 討論

研究不同方法對車前草葉片蛋白的提取效果，及其工藝條件的優(yōu)化，篩選每種提取方法的最佳條件。結(jié)果表明，堿提取車前草葉片蛋白的效果要優(yōu)于鹽提取法、Tris-HCl提取法。關(guān)于車前草蛋白質(zhì)的提取鮮見報道，此研究有助于車前草蛋白資源的研究與開發(fā)。

統(tǒng)計顯示，世界上有2/3的人缺乏蛋白質(zhì)，尋找蛋白質(zhì)資源對未來糧食的補充及畜牧業(yè)的飼用蛋白的彌補，具有重要意義[6-7]。本結(jié)果所得蛋白得率不高，可能原因是車前草中含有大量的多糖類物質(zhì)[8]，影響提取效果，還有在提蛋白過程中，組織中的蛋白酶活性較高，直接將蛋白質(zhì)水解，Tris-HCl緩沖液為蛋白酶活性提供了合適的反應(yīng)體系，或者實驗過程中其它影響因素，如原料的破碎程度、雜質(zhì)等，因此，提取車前草蛋白還有待進一步深入研究。