白喉桿菌培養基質控標準研究

朱立娜 任苗 田磊 薄曉菲 周峻凱

北京生物制品研究所有限責任公司 北京 100176

1 資料與方法

白喉桿菌培養基，氨氮含量是制備的關鍵質量標準，也是進行白喉桿菌培養過程中所涉及的主要氮源。本研究則以此為主要內容，探究其培養基制備過程中的質量控制標準，做出具體分析工作如下。

1.1 研究材料

磷酸氫二鈉來自北京益利精細化學品有限公司，無水氯化鈣和乳酸的選擇則為國藥集團化學股份有限公司所生產的，其中所應用的酵母浸液，胰酶牛肉消化液和麥芽糖稀等選擇北京生物制品研究所培養基室所提供，酵母浸出粉英國進口。而白喉的絮狀反應抗毒素標準品，由中國食品藥品檢定研究院所提供[1]。

1.2 研究方法

白喉桿菌培養基制備：稱取酸氫二鈉適量，保證稱取劑量準確性，將其酵母浸液和胰酶牛肉消化液進行混勻，并將15%氯化鈣溶液和乳酸進行應用，并將含量為20%的氫氧化鈉溶液進行調堿，實現對PH 值進行調節，將其調節到8．3 左右，加熱煮沸，加入酵母進出粉，然后將其制作成白喉桿菌培養基。

培養基氨氮含量對白喉桿菌產毒的影響效果：在實際的操作過程中，分別制備氨氮含量≥1．8g/L 和＜1．8g/L 的白喉桿菌培養基，分別制備6 批，并將其應用在白喉桿菌大罐中進行培養，并將《中華人民共和國藥典》進行借鑒，主要選擇2015 年版，將其中的三部，類毒素絮狀單位，實現測定工作，主要是測定2 種配方培養基所培養收獲的白喉毒素絮狀單位，將其培養基的最適氨氮含量進行確定。

培養基氨氮含量和白喉桿菌產毒之間的相關性：根據最適培養基配方所確定的配比方案，制備10 批白喉桿菌培養基，根據公司的吸附白喉疫苗生產工藝，對白喉桿菌進行大罐培養，并注意對所收獲的白喉毒素絮狀單位進行監測，對其系數進行計算，并注意對培養基氨氮含量和白喉桿菌的產毒相關關系進行分析[2]。

麥芽糖溶液配制：江米煮熟，并將麥芽攪碎，然后放置其中，進行攪勻處理，放置在溫度為55 攝氏度的環境條件下，實現糖化處理5 小時，然后在其中加入氯化鈣溶液和磷酸氫二鈉，在給予其過濾處理后，將其配制成麥芽糖稀。并將質量檢測的操作細則進行應用，根據堿性酒石銅滴定法相關內容，實現對麥芽糖稀濃度的檢測配制。

麥芽糖稀濃度和白喉桿菌產毒間的相關性分析：配制10 批濃度為15%-20%的麥芽糖溶液，在此基礎上，在白喉桿菌進行培養的過程中，加入大罐，完成大罐酸堿平衡，有效控制。更能夠保證，麥芽糖稀所提供的碳源和能量穩定性。注意對所收獲的白喉素絮狀單位進行檢測和計算。和白喉桿菌產毒間的相關關系分析[3]。

2 結果

在以氨氮質量濃度范圍為準的基礎上，對培養基進行大罐培養制備，其所收獲的白喉毒素，得出其所對應的平均絮狀單位為，氨氮含量≥1．8g/L． 291．83 Lf/ml 其中的白喉毒素絮狀單位均符合規定要求，其所對應的下罐率達到100%。其統計學下，白喉桿菌培養基的氨氮含量會對白喉桿菌產毒造成的影響，均存在統計學意義（P ＜0．05）。氨氮含量＜1．8g/L 平均氨氮濃度1．675 平均白喉絮狀單位169．17Lf/ml。氨氮含量≥1．8g/L 平均氨氮濃度2 平均白喉絮狀單位291．83Lf/ml P ＜0．05

3 討論

白喉桿菌培養基，從目前發展情況來看，白喉疫苗生產工藝中所對應的氨基酸，通常來自于胰酶牛肉消化液和酵母浸液中。在將其進行培養時，通常需要對初始培養基的氨氮進行監控，從而保證自由氨基酸被保持在一個相對穩定的范圍內。氨氮含量是進行白喉桿菌培養基制備的關鍵質量標準，也是進行白喉桿菌培養過程中所涉及的主要氮源。因此，需要加強制備中的注意事項，本研究結果顯示：在以氨氮質量濃度范圍為準的基礎上，對培養基進行大罐培養制備，其所收獲的白喉毒素基本不變，得出其所對應的平均絮狀單位為291．83Lf/ml，其中的白喉毒素絮狀單位均符合規定要求，其所對應的下罐率達到100%。其統計學下，白喉桿菌培養基的氨氮含量會對白喉桿菌產毒造成的影響，均存在統計學意義（P ＜0．05）。

綜上所述，就白喉桿菌培養基來說，將其對應的氨氮控制在1．8-2．0g/L 時，收獲較高，將麥芽糖的溶液濃度進行有效控制，使其被維持在15%-20%，能夠有效控制大罐酸堿度平衡，更有效的控制氮源。