N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 在甲狀腺癌中的表達及其意義研究

逵艷，陳潤東

(南陽市中心醫院肝膽普外科，河南 南陽473000)

甲狀腺癌屬于臨床上最為常見的內分泌系統惡性腫瘤，其往往以頸前無癥狀性腫塊或結節為主要臨床表現，部分患者存在頸部壓迫感、持久性咳嗽、呼吸困難或吞咽困難，少數病情嚴重患者則伴有不同程度的聲音變化、聲帶癱瘓、進水嗆咳、咯血、腫塊快速增大、單側或雙側頸淋巴結腫大以及疼痛等相關臨床癥狀。大量臨床研究表明，甲狀腺癌廣泛分布于各個年齡段，并以兒童及40歲以下女性最為多見，腫瘤生長過程較為緩慢和局限，故進一步加強對甲狀腺癌的早期診斷和治療意義重大而深遠[1]。臨床研究顯示，預計到2019年，甲狀腺癌在美國將躍居女性癌癥的第三位，由此所產生的醫療支出將高達200億美金之巨，不論是對患者本人，還是對整個家庭甚至全社會都會造成沉重的經濟壓力和負擔[2]。已有臨床研究證實，神經型鈣粘附蛋白（N-cadherin）、膜型基質金屬蛋白酶-1（MT1-MMP）、解聚素-金屬蛋白酶 17（ADAM17）在多種癌癥的臨床診療過程中具有重要參考價值[3-5]。因此，本研究以2016年1月-2017年12月期間我院所收治的甲狀腺癌患者作為臨床研究對象，并就 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲狀腺癌患者體內的表達變化意義予以深入細致的研究和分析，現將臨床研究過程和結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 本研究經醫院醫學倫理委員會批準，選取2016年1月-2017年12月期間醫院行手術治療的103例甲狀腺癌患者術后甲狀腺癌組織標本為觀察組，所有患者經病理確診，其中男性71例，女性32例；年齡均處于22～68歲，病程均處于1個月～4年。另選取同期在我院行活檢的65例結節性甲狀腺腫病灶旁正常甲狀腺組織標本為對照組，所有患者經病理證實無腫瘤細胞存在，其中男性44例，女性21例；年齡均處于23～69歲，病程均處于2個月～4年。兩組患者均自愿參與研究，并簽署知情同意書，且在性別、年齡及病程等一般資料方面比較，其差別均不具有統計學意義 （P＞0.05），具有組間可比性，見表1。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人N-cadherin單克隆抗體、鼠抗人MT1-MMP單克隆抗體、鼠抗人ADAM17單克隆抗體、SP免疫組化相關試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

表1 觀察組與對照組兩組患者一般資料

1.2.2 實驗方法 采用免疫組織化學技術En Vision 兩 步 法 分 別 檢 測 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的表達并對其結果進行判定分析。實驗步驟：組織切片烤片，脫蠟、水化。抗原修復，滴加一抗工作液，滴加二抗。DAB顯色劑顯色，復燃，脫水，中性快干膠封片。采用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.3 結果判定 采用盲法顯微鏡下閱片，N-cadherin陽性為細胞質呈棕黃色或棕褐色顆粒，MT1-MMP陽性為細胞質呈淺黃色直至棕褐色顆粒，MT1-MMP陽性為細胞質呈棕黃色顆粒。每張切片觀察10個200倍視野，綜合染色強度和陽性細胞所占比例進行判定。N-cadherin陽性細胞所占比例評分標準：陽性細胞率＜5%為0分，5%～24%為1分，25%～50%為 2分，＞50%為 3分；N-cadherin染色強度評分標準：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；上述兩項評分相加則為最終評分結果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽性。MT1-MMP陽性細胞所占比例評分標準：陽性細胞率＜5%為 0分，5%～24%為 1分，25%～50%為2分，＞50%為3分；MT1-MMP染色強度評分標準：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；上述兩項評分相加則為最終評分結果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽性。ADAM17陽性細胞所占比例評分標準：無陽性細胞為0分，陽性細胞率＜30%為1分，30%～70%為2分，＞70%為3分；ADAM17染色強度評分標準：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；上述兩項評分相加則為最終評分結果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽性。

1.3 評價指標 分別對觀察組和對照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達情況，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關系進行比較和分析。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，正態計量數據用“Mean±SD”表示，兩組獨立，正態，方差齊資料組間比較采用t檢驗；計數資料采用例數或百分比表示，樣本率的比較采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組和對照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達情況 觀察組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率，明顯高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表 2。

2.2 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關系 TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率，明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，差異具有統計學意義（P＜0.05）。浸潤深度中浸及漿膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率，明顯高于未及漿膜，差異具有統計學意義（P＜0.05）。分化程度為低分化患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率，明顯高于中、高分化，差異具有統計學意義（P＜0.05）。發生肝臟轉移患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率，明顯高于未發生肝臟轉移，差異具有統計學意義（P＜0.05）。發生淋巴結轉移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率，明顯高于未發生淋巴結轉移，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表 3。

3 討論

據世界衛生組織統計，目前全球甲狀腺癌的發病率呈現迅猛增長的上升態勢[6]。臨床上根據病理類型將甲狀腺癌分為乳頭狀癌、濾泡狀癌、髓樣癌、未分化癌，而其中又以甲狀腺乳頭狀癌最為常見，約占整個甲狀腺癌患病群體的85%。據文獻研究資料報道，雖然甲狀腺乳頭狀癌生長緩慢，惡性程度低，預后較其他類型腫瘤良好，但仍存在淋巴轉移、遠處轉移的臨床特征，從而使患者的生存時間和生活質量受到極大的影響[7]。近年來，隨著對甲狀腺癌臨床研究的不斷深入，其相關癌基因的研究也隨之受到重視。因此，積極探尋更具代表性的腫瘤標志物對于甲狀腺癌的臨床診治及判斷預后均具有十分重要的意義。

表2 觀察組和對照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達情況

表3 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關系

N-cadherin作為一種介導細胞間黏附、遷移作用的Ca2+依賴性跨膜蛋白，其往往以參與細胞黏附、細胞凋亡、增殖和遷移、識別和信號轉導機制為主要功能，并且與腫瘤細胞運動增強和轉移之間存在密切關系[8]。已有研究證實，N-cadherin的異常表達則會增強腫瘤細胞的遷移侵襲能力，從而促進細胞間的相互作用，進而在腫瘤的進展及轉移中發揮了重要的作用[9]。臨床研究表明，腫瘤的浸潤和轉移往往需要蛋白水解酶的參與，而其中尤以基質金屬蛋白酶家族最具代表性[10]。MT1-MMP是膜型基質金屬蛋白酶家族中的重要成員，其能夠通過將多種細胞外基質成分降解、促進新生血管生成等機制來影響腫瘤細胞的浸潤、遷移、凋亡等過程，也被認為是膜型基質金屬蛋白酶中與腫瘤浸潤轉移關系最為密切的酶類之一[11]。解聚素-金屬蛋白酶家族是一類錨定于細胞膜表面的蛋白家族，在蛋白水解、生物活性因子釋放、細胞黏附、融合、遷移及信號傳遞等過程中均發揮著十分重要的作用[12]。ADAM17則是解聚素-金屬蛋白酶家族中的主要成員之一，廣泛表達于多種類型的細胞之中[13]。大量臨床研究發現，ADAM17在人類多種腫瘤中呈現高表達，充分反映了腫瘤的惡性程度，并促進了腫瘤的轉移及侵襲過程[14]。

本研究通過對甲狀腺癌患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達情況的觀察后發現，其甲狀腺癌組織 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率明顯高于病灶旁正常甲狀腺組織，這與楊香山等的研究報道相一致[15]，表明N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率在甲狀腺癌組織中均處于較高水平，從而為甲狀腺癌的臨床診斷和鑒別提供重要的參考依據。本研究通過對 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達與甲狀腺癌TNM分期關系的研究后發現，Ⅲ～Ⅳ期患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，這與陶文雅等的臨床研究相符合[16]，說明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率在Ⅲ～Ⅳ期患者中的水平相對較高，有助于對甲狀腺癌患者進行準確的TNM分期。本研究通過對 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達與甲狀腺癌浸潤深度關系的分析后發現，浸及漿膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率明顯高于未及漿膜患者，這與李晨浩等的研究報道相一致[17]， 可見 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率在浸及漿膜患者中始終呈現高水平，從而為判斷甲狀腺癌患者的浸潤深度發揮積極的臨床指導價值。本研究通過對N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達與甲狀腺癌分化程度關系的觀察后發現，低分化患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率明顯高于中、高分化患者，這與唐甜的臨床研究相符合[18]，表明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率在低分化患者中處于高水平，能夠對甲狀腺癌患者的分化程度做出更為精準的判斷。本研究通過對 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達與甲狀腺癌肝臟轉移關系的研究后發現，發生肝臟轉移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率明顯高于未發生肝臟轉移患者，這與呼鐵民等的研究報道相一致[19]，說明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率在發生肝臟轉移患者中表現出較高水平，從而為判斷甲狀腺癌患者是否發生肝臟轉移而提供參考。本研究通過對N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達與甲狀腺癌淋巴結轉移關系的分析后發現，發生淋巴結轉移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽性表達率明顯高于未發生淋巴結轉移患者，這與師勇的臨床研究相符合[20]，可見 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽性表達率在發生淋巴結轉移患者中的水平相對較高，也有助于準確判斷甲狀腺癌患者是否發生淋巴結轉移。

綜 上 所 述 ，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲狀腺癌的發生和發展中發揮重要作用，同時對于判斷病情和預后亦具有十分重要的參考價值。