Cripto-1、mTOR在宮頸癌組織中的表達與病理學特征的關系

朱軍義，郭哲，王雙雙

(南陽市中心醫院婦科，河南 南陽473000)

近年來宮頸癌的發病率顯著的增高，流行病學研究認為，在年齡大于45歲的人群中，宮頸癌的發病率可達262～383/10萬人左右[1]。臨床上宮頸癌特別是中晚期宮頸癌的發生，能夠增加女性臨床預后惡化的風險，導致患者病死率的增高[2]。對于宮頸癌發病過程中分子機制的研究，能夠為臨床上宮頸癌患者的臨床診療或者早期篩查提供理論基礎。Cripto－1蛋白最早發現存在于畸胎瘤上皮細胞中，Cripto－1蛋白能夠提高癌細胞的轉錄活性，促進宮頸上皮細胞的增殖速度的增加[3]；哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是PI3K/AKT信號通路上的重要效應因子，其表達濃度的改變能夠促進腫瘤相關信號通路的激活，增加癌細胞的持續性增殖的風險[4]。部分研究揭示了Cripto－1蛋白或者mTOR蛋白與甲狀腺或者乳腺癌患者臨床預后的關系，認為Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的高表達與患者的臨床分期的進展等密切相關[5，6]，但對于二者與宮頸癌的關系研究不足。為了揭示Cripto－1、mTOR與宮頸癌的相關性，從而為臨床上宮頸癌患者的診療提供理論，本次研究收集了相關指標，揭示了Cripto－1、mTOR的表達與宮頸癌患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年11月至2017年1月收集的手術后宮頸癌組織標本80例（宮頸癌組）、宮頸上皮瘤變組織80例（CIN組）。宮頸癌組，年齡43～67 歲，平均 58.3±8.2 歲，依據國際婦產聯盟分期標準（FIGO）：Ⅰ期腫瘤患者19例、Ⅱ期腫瘤患者28例、Ⅲ期腫瘤患者23例、Ⅳ期腫瘤患者10例；組織學分化程度：高分化患者30例、中分化患者21例、低分化患者29例；發生淋巴結轉移35例。CIN組，年齡 41～65 歲，平均 56.4±9.0 歲，其中 CINⅠ級 26例、CINⅡ級38例、CINⅢ級16例。宮頸癌組和CIN組的年齡比較，差異無顯著性（P＞0.05）。

納入標準：⑴宮頸癌的診斷標準樂杰主編《婦產科學》第八版中的標準；⑵依據病理學結果作為診斷金標準；⑶患者既往無放化療、免疫治療史；⑷研究對象的基線資料收集完整。排除標準：⑴未經病理學檢查確診；⑵伴有其他部位的惡性腫瘤疾病；⑶既往具有宮頸手術病史。

1.2 免疫組化染色方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin－biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 Cripto－1 蛋白、mTOR 蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 免疫組化結果判定 染色結果判定：在400倍顯微鏡下進行觀察，Cripto－1蛋白、mTOR蛋白的定位于細胞質，陽性表達為黃色、棕黃色、褐色著色，（1）染色強度評分：無色（0 分）、淡黃色（1 分）、棕黃色染色（2 分）、染色為深棕色（3 分）；（2）依據染色細胞比例：占比≤10%（1分）、占比11%～50%（2 分）、占比 51%～75%（3 分）、占比＞75%（4 分），染色強度與染色細胞占比之分相乘所得總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

1.4 統計學方法 數據表述采用（x±s）表示，數據統計分析采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗；P值＜0.05說明差異有統計學意義，統計軟件采用SPSS 16.0 版本。

2 結果

2.1 兩組標本中Cripto－1蛋白、mTOR蛋白陽性表達率比較 宮頸癌組的Cripto－1蛋白陽性表達率66.25%、mTOR 蛋白陽性表達率 62.50%，CIN 組的Cripto－1蛋白陽性表達率 27.50%、mTOR 蛋白陽性表達率25.00%；兩組比較差異具有統計學意義（P＞0.05）；見表 1。

表1 兩組標本中Cripto-1蛋白、mTOR蛋白陽性表達率比較[n（%）]

2.2 宮頸癌組織中Cripto－1蛋白、mTOR蛋白表達的相關性 宮頸癌組的Cripto－1蛋白與mTOR蛋白表達呈顯著的正相關關系（r=0.594，P＜0.05）；見表2。

表2 宮頸癌組織中Cripto-1蛋白、mTOR蛋白表達的相關性

2.3 宮頸癌組織中Cripto－1蛋白表達與腫瘤發生發展的關系 FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發生淋巴結轉移的宮頸癌組的Cripto－1蛋白陽性表達率顯著的高于 FIGO分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發生淋巴結轉移的宮頸癌組織（P＜0.05）；見表 3。

2.4 宮頸癌組織中mTOR蛋白表達與腫瘤發生發展的關系 發生淋巴結轉移的宮頸癌組的mTOR蛋白陽性表達率顯著的高于未發生淋巴結轉移的宮頸癌組織（P<0.05）；見表 4。

表3 宮頸癌組織中Cripto-1蛋白表達與腫瘤發生發展的關系

表4 宮頸癌組織中mTOR蛋白表達與腫瘤發生發展的關系

3 討論

宮頸癌的發生主要考慮與宮頸上皮的損傷及繼發性的基因調控異常有關，特別是在HPV病毒感染的患者中，癌相關基因或者蛋白的突變風險更高。不同的生物學因素的改變，不僅能夠影響宮頸癌腫瘤相關信號通路的激活，同時還能夠改變宮頸柱狀上皮轉化區細胞的生物學特性，導致早期細胞異型性的發生[7]。現階段臨床上宮頸癌患者的早期診斷的水平仍然較為局限，宮頸細胞學或者病毒學的篩查雖然能夠提高宮頸癌的篩查水平，但仍然存在假陰性的病例；現階段臨床上通過手術及綜合性的放療方式輔助治療宮頸癌，但其治療后的宮頸癌患者的生存時間的改善并不理想，治療后的3年生存率并無明顯的提高[8，9]。本次研究對于宮頸癌患者病灶組織中的Cripto-1、mTOR蛋白水平的相關研究，具有下列兩個方面的價值：⑴能夠為臨床上宮頸癌患者的早期篩查提供理論基礎，并提供可靠的參考指標；⑵可能為臨床上宮頸癌患者的免疫靶向治療提供作用靶點，從而改善宮頸癌患者的生存預后。

Cripto-1的表達能夠影響宮頸柱狀上皮細胞的增殖活性，提高上皮細胞核DNA的異常增殖的風險，Cripto-1還能夠影響到上皮細胞突破基底膜的風險[10]；mTOR作用PI3K/AKT信號通路的下游因子，其表達濃度的上調能夠提高宮頸柱狀上皮細胞的核轉錄水平，抑制柱狀上皮細胞的凋亡。基礎領域的研究還認為，mTOR的表達能夠提高宮頸癌細胞的侵襲能力，提高癌細胞對于宮旁組織的浸潤風險[11，12]。

免疫組化水平的分析研究發現，在宮頸癌病灶組織中可以發現Cripto-1、mTOR蛋白的陽性表達率均明顯的上升，高于宮頸上皮內瘤變組，差異較為明顯，提示了Cripto-1、mTOR蛋白的高表達均能夠影響宮頸癌的發生過程，通過薈萃國內外的相關文獻，筆者認為Cripto-1、mTOR的表達與宮頸癌的發生發展過程的關系可能與下列幾個方面的因素有關[13，14]：⑴Cripto-1蛋白的高表達能夠提高柱狀上皮細胞的持續性增殖的風險，提高癌細胞DNA的擴增速度；⑵mTOR蛋白的高表達能夠激活PI3K下游信號通路因子，提高宮頸癌細胞對于宮頸基底膜組織的浸潤程度，促進癌細胞的擴散和轉移過程。李慧等[15]研究者也分析了免疫組化相關數據，發現宮頸癌患者的癌旁組織的浸潤風險越高，mTOR蛋白的陽性表達率越高。對于Cripto-1、mTOR的相關關系的分析可見，二者的表達具有顯著的相關性，提示了Cripto-1、mTOR可能在促進宮頸癌的發生過程中發揮了一定的協同刺激作用，但具體的內在作用途徑仍然需要后續的研究。在探討Cripto-1等與宮頸癌患者病情進展關系的過程中，在臨床分期較晚或者發生了淋巴結轉移的人群中，Cripto-1蛋白的表達陽性率可顯著的上升，高于臨床分期較早或者未發生淋巴結轉移的患者，這主要由于Cripto-1的表達能夠提高上皮細胞浸潤淋巴結或者臨近正常組織的能力[15]。而發生淋巴結轉移的宮頸癌組的mTOR蛋白陽性表達率顯著的高于未發生淋巴結轉移的宮頸癌組織，表明淋巴結轉移的發生與mTOR蛋白的表達密切相關。

本次研究的創新性在于探討了Cripto-1、mTOR蛋白與宮頸癌患者臨床病理特征的關系。綜上所述，Cripto-1、mTOR在宮頸癌組織中高表達，二者的表達與宮頸癌患者的臨床病理特征有一定相關性。