Girdin、VEGF在兒童腎母細胞瘤中的表達及意義

王利娟，張紅梅，黃閃，高海麗，李慧霞

(鄭州大學附屬兒童醫院、河南省兒童醫院、鄭州兒童醫院血液腫瘤科，河南 鄭州 450000)

兒童腎母細胞瘤是臨床上多見的兒童實體細胞性腫瘤，流行病學研究顯示，兒童腎母細胞瘤的發病率可達234～535/10萬人左右[1]。臨床上兒童腎母細胞瘤的發生，能夠增加患兒的致殘率或者病死率[2]，給家庭帶來較為嚴重的經濟及心理負擔。生物學因素或者腫瘤相關因子的改變，能夠通過影響兒童腎母細胞瘤病灶組織內細胞的生物學特征，增加早期腫瘤發生或者中晚期惡性腫瘤病情進展的風險。Girdin作為新發現的肌動蛋白，其表達濃度的改變能夠通過影響到癌細胞的變形能力，進而參與到腫瘤細胞的浸潤或者擴散等過程中[3]；血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達，能夠促進新生血管的形成和腫瘤部位血管內皮細胞的移行等過程，增加腫瘤病灶組織的血流灌注量，促進腫瘤細胞的增殖及轉移[4，5]。已有的相關研究揭示了VEGF在兒童腎母細胞瘤發生過程中的作用，認為VEGF的高表達是促進兒童腎母細胞瘤臨床分期進展、病死率增加等的重要因素[6]，但對于Girdin的分析研究不足。為了進一步探討Girdin、VEGF在影響兒童腎母細胞瘤發生過程中的作用，從而為臨床上疾病的診療提供理論基礎，本次研究選取2012年2月至2017年10月在我院治療的腎母細胞瘤患兒52例，探討了Girdin、VEGF與患者臨床病理特征的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2017年10月在我院治療的腎母細胞瘤患兒52例，其中男性30例，女性22例；年齡1～11歲，中位年齡3歲。納入標準：⑴均經病理組織學確診；⑵術前未行放化療等治療；⑶患兒監護人知情同意。排除標準：⑴臨床病理資料欠缺；⑵合并有其他惡性腫瘤者。同時選取癌旁組織（距癌≥3cm）作為對照（鏡下無癌細胞浸潤）。

1.2 檢測方法 石蠟切片脫蠟至水，過氧化氫封閉內源性過氧化物酶：3%H2O2，室溫10min（避光），10mMpH 6.0枸櫞酸鈉緩沖液），PBS沖洗5min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37℃，15min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體，37℃2h，滴加生物素化的二抗，37℃，40min，PBS 沖洗 5min，DAB顯色，蘇木素復染，加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。

1.3 結果判斷 Girdin、VEGF表達以胞質染色棕黃色為陽性細胞。根據陽性細胞比例及染色程度進行判斷，其中陽性細胞比例＜5%為0分，5%～10%為 1分，11%～50%為 2分，51%～75%為 3分，＞75%為4分；染色程度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。陽性細胞比例與染色程度得分之積為最終結果，≥4分為陽性表達。

1.4 統計學處理 統計分析采用SPSS 19.0軟件，計數資料比較使用χ2檢驗，相關性采用Spearman相關。以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 腎母細胞瘤和癌旁組織Girdin、VEGF表達比較 腎母細胞瘤Girdin和VEGF蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 Girdin、VEGF表達與腎母細胞瘤臨床病理特征的關系 Girdin蛋白陽性表達與腎母細胞瘤腫瘤直徑、臨床分期和淋巴結轉移有關（P＜0.05）；VEGF蛋白陽性表達與腎母細胞瘤臨床分期和淋巴結轉移有關（P＜0.05）。 見表 2。

表1 腎母細胞瘤和癌旁組織Girdin、VEGF表達比較

2.3 相關分析 經Spearman相關分析，結果顯示Girdin和VEGF蛋白表達無相關性（P＞0.05），見表3。

3 討論

兒童腎母細胞瘤的發生主要與腎源性殘留或者MT基因的突變等因素有關，特別是具有相關家族史的人群中，兒童腎母細胞瘤的發病率更高，臨床預后更差[7，8]。現階段臨床上主要通過手術等方式治療兒童腎母細胞瘤，但包括各種綜合性方式治療后患兒的病情緩解率水平或者臨床預后等的改善并不理想[9，10]。本次研究通過對于兒童腎母細胞瘤發病過程中的病理標本組織中腫瘤相關因子的分析，能夠為兒童腎母細胞瘤的靶向治療提供參考，并為疾病的病因學研究提供依據。

Girdin對于肌動蛋白活性的影響，能夠提高癌細胞的變形能力，增加癌細胞通過淋巴結、血行、直接浸潤等方式進行擴散的風險，同時近年來相關基礎方面的研究還顯示，Girdin的表達可以通過對細胞周期依賴性蛋白激酶的調控作用，影響腫瘤細胞的周期，提高G1/S的比例，提高癌細胞快速跨越G0期的速度[11]；VEGF不僅能夠協同刺激血管內皮細胞的遷移，促進局部病灶組織新生血管的形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注，同時VEGF的表達對于局部淋巴結竇的形成作用，能夠誘導癌細胞局部富集效應，提高癌細胞通過淋巴結等進行轉移的風險。現階段臨床上多數研究探討了VEGF在消化系統、生殖系統、神經系統等惡性腫瘤發生過程中的作用，認為VEGF的高表達是促進患者臨床病理特征惡化、放化療敏感性下降等的重要因素，而對于兒童腎母細胞瘤中的VEGF的分析也相應證實了這一點，但缺乏對于Girdin與VEGF的相關關系的研究。

本次研究通過免疫組化研究方法分析了Girdin、VEGF蛋白的表達情況，結果發現Girdin、VEGF在兒童腎母細胞瘤患者病灶組織中的陽性表達率均顯著上升，高于癌旁組織中相關蛋白的表達水平，提示了Girdin、VEGF均參與到了兒童腎母細胞瘤的發生過程中[12，13]：⑴Girdin對于腎母細胞瘤發生的影響主要與其對于腫瘤細胞浸潤能力、突破基底膜的能力等的影響有關，同時也與Girdin對于腫瘤細胞的增殖過程的調控作用有關；⑵VEGF的高表達能夠通過影響到新生血管內皮細胞的遷移及化生，促進新生血管的形成、增加血流灌注，為腫瘤細胞的DNA的擴增、轉移等提供基礎。王晗等[14]研究者在探討了58例樣本量的兒童腎母細胞瘤患者病灶組織中VEGF的表達陽性率后發現，VEGF的表達陽性率可較癌旁組織上升25%以上，同時在癌細胞分化較差、臨床分期Ⅲ期或者Ⅳ期等患者中，VEGF的表達具有進一步的上升趨勢。免疫組化染色可見，Girdin、VEGF二者均主要表達于癌細胞的細胞質或者細胞間質中，同時癌細胞的異型性越為顯著，Girdin、VEGF的染色程度越深。Girdin、VEGF均與兒童腎母細胞瘤患者的臨床分期或者淋巴結轉移密切相關，同時Girdin還能夠影響腫瘤病灶組織的直徑，提示了二者與患者臨床病情的關系，Girdin、VEGF對于臨床分期或者淋巴結轉移的影響主要在于其對于癌細胞的浸潤或者淋巴結內皮細胞粘附能力的改變有關，而對于腫瘤直徑的影響的機制不清，可能與Girdin對腫瘤細胞持續性增殖能力的影響有關。但部分研究者并不認為VEGF的表達與腎母細胞瘤患者的淋巴結轉移有關[15]，考慮可能與病例入組標準、病程長短、檢測試劑的敏感程度的不同等有關。

表2 Girdin、VEGF表達與腎母細胞瘤臨床病理特征的關系

表3 相關分析

綜上所述，兒童腎母細胞瘤中Girdin和VEGF表達增高，與患者的臨床分期或者淋巴結轉移等臨床病理特征密切相關，可以作為進一步深入探討的指標。