SAP 患者 PTX3、TFPI、mIR-21 的表達變化及與患者炎癥反應的關系

張海波，王少芳，黃宏春，王秀敏

(1.安陽市人民醫院消化內科；2.安陽市人民醫院呼吸內科，河南 安陽 455000)

急性重癥胰腺炎（SAP）、輕癥胰腺炎（MAP）等均是臨床上較為常見的疾病，流行病學研究顯示，胰腺炎的發生率可達233～455/10萬人[1]，在合并有膽道系統疾病的人群中，胰腺炎發病率具有進一步上升的趨勢。在探討胰腺炎病情進展機制的過程中發現，生物學因子改變可以進一步加重病情，導致患者病死率顯著上升[2]。正五聚蛋白3（PTX3）是重要的炎癥蛋白，其表達水平改變能夠促進下游糖蛋白因子的激活，從而激活炎癥信號通路[3]。組織因子途徑抑制劑（TFPI）能夠通過促進自身免疫因子或者趨化因子的過度激活，增加自身免疫性損傷的發生[4]。miR－21作為重要的非編碼Rna因子，其濃度改變能夠增加患者自身組織器官的炎癥因子浸潤，促進自身消化酶的釋放[5]。本研究即選取我院消化內科收治的118例急性胰腺炎患者，探討相關血清學指標如 PTX3、TFPI、mIR－21的表達變化及其與患者的病情關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月至2017年5月我院消化內科收治的118例急性胰腺炎患者作為研究對象，其中SAP患者43例（SAP組）、MAP患者75例（MAP組），再另選取同期健康對象60例作為對照組。SAP組，男28例，女15例；年齡22～63 歲，平均 41.6±14.1 歲；白細胞計數（18.3±3.4）×109/L；Ranson 評分 3.82±0.56 分。MAP 組， 男 38例，女 22 例；年齡 20～65 歲，平均 39.5±15.0 歲；白細胞計數（14.2±2.6）×109/L；Ranson 評分 2.51±0.64分。對照組，男35例，女25例；年齡24～60歲，平均 39.2±13.0歲。三組研究對象年齡、性別比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 急性胰腺炎患者的診斷標準參考《中國急性胰腺炎診治指南》、《重癥急性胰腺炎診治指南》中的標準；年齡19～65歲；獲得研究對象的知情同意。

1.2.2 排除標準 合并肝腎功能疾病；合并惡性腫瘤；合并凝血系統疾病；合并精神疾病、認知功能障礙；具有腦血管病史。

1.3 檢測方法 采集空腹靜脈血約5ml，自然凝固后3000r/min離心10min，取上清采用酶聯免疫吸附法測定血清PTX3、TFPI、IL－6、IL－8 及 TNF－α 水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。miR－21檢測方法如下：采集患者的靜脈血5ml，加入 0.2ml氯仿，2～8℃冰凍離心機中離心(12000g/min，15min)，反復一次洗滌 RNA，棄上清，在管底部可見一乳白色小沉淀物，加入1ml 75%乙醇，0.1%DEPC水溶解。加入miR－21及GAPDH上下游引物、0.1%DEPC 使其終濃度均為 20pmol/ul，制備反應體系，RT－PCR擴增的條件與參數：48℃，45min，94℃，2min；94℃ 30s，58℃ 60s，68℃ 2min 共40個循環；循環完畢后68℃延伸7min。

1.4 統計學方法 計量資料采用（x±s）表示，三組之間計量資料比較采用單因素方差分析、組間兩兩比較采用LSD－t檢驗；相關性分析采用Pearosn線性相關分析法；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組研究對象血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平比較 SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP 組血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均顯著高于對照組（P＜0.05），見表 1。

表1 三組研究對象血清PTX3、TFPI、miR-21水平比較（x±s）

2.2 三組研究對象血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平比較 SAP 組患者血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP 組血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著高于對照組 （P＜0.05），見表2。

表2 三組研究對象的血清IL-6、IL-8及TNF-α水平比較（x±s）

2.3 SAP 患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 與炎癥指標的相關性分析 SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 與其血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著正相關（P＜0.05），見表 3。

表3 SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21與炎癥指標的相關性分析

3 討論

胰腺炎特別是SAP的遠期生存指標較差，五年生存率不足35%，病死率可達15%以上[6]。通過早期診斷、早期治療，可以提高SAP的病情緩解率，降低其病死率，從而改善遠期臨床預后。盡管如此，現階段臨床上缺乏可靠的實驗室指標用于SAP診斷，本研究通過對血清學指標的探討，希望可以為后續臨床上SAP診斷、病情評估提供依據。

PTX3可以通過誘導下游細胞炎癥因子如IL－6、IL－10等的表達，進而促進巨噬細胞、單核細胞對胰腺細胞膜的浸潤或者損傷[7]。PTX3在促進氧化應激損傷或者加劇細胞膜不穩定性等方面發揮了重要作用。基礎研究也顯示，PTX3可以通過影響細胞膜上鈣離子通道的開放，增加胰腺組織鈣負荷[8，9]。TFPI可以誘導CD4+T淋巴細胞發生免疫缺陷，導致胰腺組織局部免疫功能下降，從而加重炎癥反應[10，11]。 mIR－21不僅在多種惡性腫瘤或者感染性疾病的發生過程中發揮了重要作用，同時近年來相關基礎方面的研究顯示，mIR－21還能夠調控局部胃腸激素，進而影響導管內消化酶的分泌速度，增加導管張力[12]。

本研究發現，SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均顯著高于MAP組、對照組 （P＜0.05），MAP 組血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均顯著高于對照組（P＜0.05），這提示 PTX3、TFPI、miR－21在急性胰腺炎發生、發展過程中均可能發揮了一定的作用。研究發現，血清PTX3高表達不僅可以改變患者體內組織蛋白酶的活性，促進下游炎癥蛋白信號通路的激活，增加炎癥因子在腹膜或者胰腺間質組織中的播散速度，而且還可以促進患者體內的組織因子的表達，增加單核細胞、巨噬細胞對胰腺組織的浸潤，導致胰腺消化酶的過度釋放[13，14]。 Nieminen A 等[15]報道，胰腺炎患者血清TFPI水平上升幅度可達24%以上，并且患者腹腔內感染越為嚴重，其波動幅度越高。血清miR－21高表達不僅能夠影響氧化應激過程，同時還能夠影響到谷胱甘肽芳基轉移酶等的活性，導致氧化自由基對于胰腺組織的損傷[12]。

IL-6、IL-8及TNF-α等是評估患者體內炎癥因子活性的重要指標，這些細胞因子高表達可以增加患者感染性休克、多器官功能衰竭的發生風險。本次研究中，SAP組患者血清 IL-6、IL-8、TNF-α 水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP組血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對照組（P＜0.05），并且 SAP 組患者血清 PTX3、TFPI、miR-21與其血清 IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著正相關（P＜0.05），這一步提示了血清 PTX3、TFPI、miR-21等與胰腺炎患者病情的關系。綜上所述，SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21水平較MAP及健康人群升高更加顯著，并且與炎癥反應程度加重有關。