結核感染T細胞檢測對活動性肺結核患者診斷效能的影響

羅春卉

(鄭州市第六人民醫院（河南省傳染病醫院）檢驗科，河南 鄭州 450000)

活動性肺結核具有較高發病率，且危害較高，而及早確診疾病對臨床早期制定有針對性干預方案、改善患者臨床療效及預后具有重要意義[1，2]。目前，臨床雖可綜合患者臨床表現、微生物學、病理學及影像學檢查等方式診斷結核病，但難以準確評估其是否為活動性肺結核，而抗酸菌涂片及微生物培養等診斷方式陽性率較低。同時，肺外結核患者臨床表現較復雜，自身細菌數目相對較少，因此采取上述常規措施診斷活動性肺外結核難度更大[3，4]。近些年，檢測宿主對結核桿菌特異性免疫反應在肺結核診斷中得到應用，包括γ干擾素釋放試驗及結核菌素試驗，但接種結核桿菌疫苗對其診斷結果產生了一定影響。而結核感染T細胞檢測（T-SPOT.TB）屬γ干擾素釋放試驗重要類型，其采取兩個抗原肽作特異性結核分枝桿菌抗原，逐漸得到推廣應用[5，6]。本研究選取我院活動性肺結核患者93例及肺部其他病變患者93例進行對比研究，探討T-SPOT.TB試驗應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年11月-2017年6月活動性肺結核患者93例設為研究組、肺部其他病變患者93例設為對照組。研究組男61例，女32例；年齡 53～76 歲，平均（64.30±10.11）歲；痰涂片培養結果呈陽性者37例，呈陰性者56例。對照組男 59 例，女 34 例；年齡 51～79 歲，平均（64.86±10.56）歲；疾病類型：肺炎53例，肺癌25例，其他15例。兩組年齡、性別等臨床資料比較無明顯差異（P＞0.05），且本研究經我院倫理委員會審批通過。

1.2 選取標準 ⑴知曉本研究，簽署同意書；⑵研究組均為首次發病；⑶研究組均經臨床證實為活動性肺結核；⑷排除納入研究前采取相關藥物治療者；⑸排除并發全身性重度感染性疾病、自身免疫系統重度病變者。

1.3 方法 所有患者均接受T-SPOT.TB試驗，各步驟嚴格遵循T-SPOT.TB試劑盒（Oxford Immunotec公司）說明書執行，試驗前抽取抗凝血標本，經淋巴細胞分離液提取外周血單個核細胞，經分離處理單個核細胞依據指定密度鋪于96孔板 （包被γ干擾素），分別加入含ESAT-6（A抗原）培養液、含CFP-10（B抗原）培養液、不含抗原培養液（作為陰性對照）、含植物血凝素培養液（作為陽性對照），再于37℃的二氧化碳培養箱 （濃度：5%）內進行20h培養，完成培養后對各孔實施斑點計數，若A抗原與 （或）B抗原孔斑點細胞數目超出陰性對照孔斑點數至少6個則評定為陽性；所有受檢者均接受TB-DNA-PCR：采集患者痰液10ml，以NaOH溶液稀釋痰液，取2ml置入離心管內，離心（12000r/min，5min）處理，棄上清液，沉淀加入 DNA提取液50ul，混合均勻，于100℃恒溫水浴鍋內放置約 10min，冷卻至室溫，離心（12000r/min，5min）處理，取上清液置于PCR管內，8000r/min離心數秒后置于PCR儀器內，加熱裂解提取DNA，采取實時定量PCR技術測定標本中TB-DNA含量，試劑盒購于深圳市康百得生物科技有限公司。

1.4 觀察指標 ⑴統計兩組T-SPOT.TB及TBDNA-PCR試驗結果。⑵統計對比研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗陽性率。⑶統計對比T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR對活動性肺結核診斷效能。

1.5 統計學方法 通過SPSS 18.0對數據進行分析，計數資料 n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗結果分析 研究組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗陽性率 （87.10%、37.63%）高于對照組 （36.56%、0.00%）（P＜0.05）。 見表 1。

表1 兩組T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗結果分析[n（%）]

2.2 研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗結果分析 研究組菌陽性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗陽性率（97.30%、51.35%）高于菌陰性患者 （80.36%、28.57%）（P＜0.05）。 見表 2。

2.3 T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR診斷效能分析T-SPOT.TB診斷敏感度（87.10%）高于TB-DNAPCR（37.63%），特異度（63.44%）低于 TB-DNAPCR（100.00%）（P＜0.05），兩種診斷方式準確度間差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表2 研究組菌陽性及菌陰性患者T-SPOT.TB及TB-DNA-PCR試驗結果分析[n（%）]

表3 T-SPOT.TB與TB-DNA-PCR診斷效能分析[n（%），n=186]

3 討論

活動性肺結核為結核分枝桿菌感染所致慢性傳染病類型，在世界范圍內均具有較高發病率及病死率，對人口生命健康及生活質量危害極大[7]。因此，如何對活動性肺結核予以快速、準確診斷成為研究熱點。

抗酸染色法為臨床診斷活動性肺結核的重要措施，以價格低廉、操作快捷簡單等優勢在臨床得到普遍應用，Lee YM等[8]研究結果顯示，抗酸染色法在活動性肺結核診斷中特異度高達100.0%，但其敏感度較低，僅為22.25%；而免疫膠體金結核抗體檢查可快速提供診斷結果，在活動性肺結核診斷中也較常用，其敏感度39.39%較抗酸染色法略高，但特異度僅為78.90%，低于抗酸染色法，導致兩種診斷方式易增加漏診及誤診風險，致使患者錯失最佳治療時機，對疾病良好轉歸產生了不利影響。

γ干擾素釋放試驗為結核分枝桿菌潛伏感染的重要診斷措施，相較于傳統TST診斷，其所用抗原為來自于結核分枝桿菌RDI處的特異抗原CFP-10及ESAT-6，故可區別所有卡介苗所接種的回憶反應及大多數環境分枝桿菌感染[9，10]。γ干擾素釋放試驗當前常用商品化試劑盒主要為Quanti FERONTB Gold in-tube assay及T-SPOT.TB，其中T-SPOT.TB試驗由Lalvani等學者于2001年初次用于診斷結核疾病，其是采取酶聯免疫斑點法測定結核桿菌感染者特異性細胞進行疾病診斷的新型措施[11，12]。程利[13]研究結果顯示，T-SPOT.TB試驗在活動性肺結核中診斷敏感度可達94.4%，而本研究結果顯示，研究組T-SPOT.TB試驗陽性高于對照組，其診斷敏感度為87.10%，高于TB-DNA-PCR，表明T-SPOT.TB試驗在活動性肺結核中具有較高診斷價值，可降低疾病誤診風險，避免延誤患者最佳治療時機，分析其原因主要在于：多個光譜光學檢測可提供精準實時定量PCR結果，并且其具備極速制冷與加熱能力，可于2h內提供穩定、準確試驗結果，而TBDNA-PCR結果易受痰標本量及患者感染均屬類型等諸多因素影響，故可影響其檢測陽性率。另有研究指出，針對陳舊性結核病患者，其病程可對TSPOT.TB試驗結果產生影響，故既往存在陳舊性肺結核和結核分枝桿菌潛伏感染者T-SPOT.TB試驗檢測更加復雜[14，15]。同時，由本研究結果還可得知，T-SPOT.TB試驗特異度較低（63.44%），而任甜甜等[16]結果也表明該診斷方式特異度較低，僅為62.96%，分析其原因可能是：⑴TB-DNA-PCR痰標本量不足或標本不合格；⑵患者所感染分枝桿菌非結核分枝桿菌復合群，因此TB-DNA-PCR無法檢出。此外，本研究還發現，T-SPOT.TB試驗陽性率在菌陽性患者中更高，因此表明臨床實際可將TSPOT.TB試驗用于活動性肺結核輔助診斷，但為提高診斷特異度，應聯合其他措施進行綜合診斷，以此準確診斷活動性肺結核，最大程度避免漏診及誤診發生。

綜上所述，采取結核感染T細胞檢測對活動性肺結核予以診斷，可有效提高診斷敏感度，為臨床及早制定活動性肺結核對應治療方案提供一定參考依據，但其特異度較低，臨床實際可聯合痰培養及痰多聚酶鏈反應結核分枝桿菌核酸檢測等方式對患者進行綜合診斷，以此最大程度降低疾病漏診及誤診風險。