中國黃羽鵪鶉哈德氏腺發育的增齡變化及形態組織學觀察

趙 飄， 何 敏， 呂瑩瑩， 韋靖婧， 宋坤達， 陳小梅

(四川農業大學 動物醫學院，四川 成都 611130)

哈德氏腺(Harderian gland，HG)，亦稱瞬膜腺、第三眼瞼腺、副淚腺，屬于眶腺的一種，是禽類眼窩內的外分泌腺體之一[1-2]，在兩棲動物[3]、爬行動物[4]、鳥類[5]和哺乳動物[6]等動物體內均有報道。不同動物哈德氏腺的解剖學結構特征存在明顯的種屬差異，這些差異與動物系統進化水平相適應。

鵪鶉簡稱鶉，在我國又名早秋、羅鶉、赤喉鶉等[7]，飼養量僅次于雞。我國對鵪鶉的研究主要集中在營養[8]、羽色[9]、抗性[10]、遺傳[11]及生產性能[12]等方面，對鵪鶉哈德氏腺的研究則是在胚胎期[13]，對哈德氏腺組織結構的全發育過程報道較少。本研究通過觀察不同周齡中國黃羽鵪鶉哈德氏腺生長指標和形態組織結構，旨在多角度闡明哈德氏腺發育的變化，豐富形態學資料，為鵪鶉臨床生產提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

選用0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周齡健康黃羽鵪鶉90只，隨機分為15組，每組6只，購自成都市邛崍市彭氏鵪鶉養殖場。

1.2 方法

1.2.1 形態學觀察

將黃羽鵪鶉稱重后麻醉，解剖并取出哈德氏腺，觀察哈德氏腺的大小及形態。

1.2.2 宏觀生長指標測定

測量哈德氏腺長、寬及質量，計算哈德氏腺生長指數。

1.2.3 哈德氏腺組織學觀察

將取出的哈德氏腺立即放入Bouin’s固定液中24 h，流水沖洗24 h，常規脫水透明，石蠟包埋，制作4～6 μm厚石蠟切片，HE染色，顯微鏡觀察，用江蘇捷達圖像分析軟件測量腺體、導管、小葉和小梁的平均面積與平均直徑。

1.2.4 哈德氏腺超微結構觀察

將取出的哈德氏腺置于2.5%戊二醛中固定，隨后經取材、前固定、漂洗、后固定、漂洗、脫水、浸透、包埋、聚合、切片、染色和干燥，在透射電鏡下進行組織超微結構觀察，并攝片。

2 結果與分析

2.1 中國黃羽鵪鶉哈德氏腺的位置與形態

中國黃羽鵪鶉出生時就具備完整的哈德氏腺，位于眼眶內、眼球的腹側和后內側，在視神經區呈喙狀延伸，一端游離，另一端由腺體導管開口于第三眼瞼彎窿的內角，腺體呈不規則帶狀，一端小，一端大，淺粉色，左右對稱(圖1)。

2.2 宏觀生長指標

如表1所示，鵪鶉體質量隨周齡逐漸增加，在14周齡達到最大，為(156.58±2.42) g。哈德氏腺的絕對質量隨周齡逐漸增加，22周齡達到最大，為(23.21±6.23) mg；哈德氏腺的絕對質量在0～22周齡保持上升趨勢，22周齡與0～1周齡相比差異顯著(P<0.05)，22周齡與26～38周齡相比差異不顯著(P>0.05)。哈德氏腺指數呈下降趨勢，在0周齡達到最大；4周齡與0～38周齡相比，差異不顯著(P>0.05)。哈德氏腺的左、右長徑、寬徑隨周齡增加逐漸增加，6周齡時達到最大。

2.3 哈德氏腺組織學觀察

中國黃羽鵪鶉哈德氏腺為復管泡狀腺，腺體外有結締組織被膜，被膜延伸至腺體實質中，將腺體分為多個大小不等的小葉(圖2-a、b)。小葉由腺泡和腺管組成，腺泡腔匯集成次級收集管，次級收集管匯成三級收集管，最后匯成一條幾乎縱貫腺體全長的主導管，主導管位于整個腺體的中心(圖2-c、d、e)。哈德氏腺的腺泡呈球形，由柱狀上皮細胞排列而成，細胞核位于細胞的基底部，腺泡間有結締組織填充(圖3-a)，在各級導管周圍，富含淋巴細胞，細胞間隙明顯，形成彌散淋巴組織(圖3-c、d)，各級導管間隙能見到散在的紅細胞或聚集成團的紅細胞(圖3-b)。

A，解剖圖，示哈德氏腺位置(箭頭)，5周齡；B，鵪鶉哈德氏腺的具體形態。A， Anatomical image showed the location of the harderian gland (arrow)， at 5 weeks old; B， The specific morphology of quail Harderian gland.圖1 黃羽鵪鶉哈德氏腺的形態觀察Fig.1 The morphological observation of Harderian gland of the yellow quail

表1不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的常規形態學

Table1The morphological measurement in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周齡Week-old體質量Body weight/g絕對質量Absolute weight/mg哈德氏腺指數Organ index/g·mg-1左側長徑Length of left/mm左側寬徑Width of left/mm右側長徑Length of right/mm右側寬徑Width of right/mm08.66±0.58 j2.81±0.61 b0.32±0.06 a3.78±1.02 e1.13±0.08 c3.86±1.03 c0.98±0.11 e121.90±2.91 i6.56±1.62 b0.31±0.09 ab4.75±0.70 e1.66±0.46 bc4.50±0.44 c1.96±0.64 d256.43±2.41 h15.48±3.30 a0.27±0.06 ab5.86±0.90 d2.18±0.27 ab6.95±1.16 ab2.40±0.65 cd373.45±1.36 g17.83±4.42 a0.24±0.06 ab6.66±0.97 cd2.41±0.42 ab6.33±0.76 b2.55±0.29 bc4102.85±2.13 f18.08±4.75 a0.17±0.04 ab7.30±1.03 abc3.01±0.45 a7.16±0.93 ab2.56±0.52 abc5117.90±2.23 e18.96±3.13 a0.16±0.02 b6.76±0.79 cd2.45±0.22 ab7.01±1.17 ab2.38±0.39 cd6139.25±1.57 d21.30±2.31 a0.15±0.01 b8.10±0.68 a2.76±0.22 ab8.28±0.30 a3.05±0.08 a10153.65±3.03 abc21.74±2.11 a0.14±0.01 b8.03±1.32 a2.34±0.23 ab8.13±0.90 ab2.90±0.49 ab14156.58±2.42 a22.06±3.35 a0.14±0.02 b7.93±0.22 ab2.68±0.32 ab7.02±0.84 ab2.50±0.53 bc18154.30±2.33 ab22.70±2.46 a0.14±0.01 b6.95±1.06 bc2.48±0.14 ab6.50±0.31 b2.75±0.32 abc22152.15±2.46 abc23.21±6.23 a0.15±0.04 b6.82±0.77 cd2.81±0.44 a6.90±1.10 ab2.51±0.38 bc26150.31±3.26 abc21.56±4.48 a0.14±0.03 b7.10±0.58 abc 2.50±0.17 ab7.30±0.50 ab2.86±0.30 abc30147.28±1.80 c21.41±2.62 a0.14±0.01 b7.40±1.42 abc3.00±0.62 a7.38±0.76 ab2.60±0.51 abc34148.83±1.97 bc21.06±2.58 a0.14±0.01 b7.40±0.63 abc2.80±0.37 a6.44±0.46 b2.80±0.27 abc38146.70±2.58 c20.56±2.44 a0.14±0.01 b6.98±0.65 bc2.98±0.30 a6.95±1.53 ab2.85±0.41 abc

同列數據后無相同字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Data marked without the same letters within the same row indicated significant difference atP<0.05. The same as below.

0～1周齡時，淋巴細胞呈分散狀；2～3周齡時，淋巴細胞排列成不規則的團索狀淋巴小結和淋巴索(圖3)。如表2所示，哈德氏腺腺體直徑隨周齡增長而增大，到6周齡時達到最大；6周齡與0～5周齡和10～38周齡相比差異顯著(P<0.05)。小葉直徑在4周齡時達到最大；4周齡與0～2周齡相比差異顯著(P<0.05)。導管直徑在2周齡時達到最大，2周齡與0～1周齡和4～38周齡相比，差異顯著(P<0.05)。小梁直徑在6周齡達到最大；6周齡與0～2周齡和18～38周齡相比，差異顯著(P<0.05)。

2.4 哈德氏腺超微結構觀察

在電鏡下可見，中國黃羽鵪鶉哈德氏腺在2周齡與26周齡時差異不大，為小管泡型，小葉間小梁含有成纖維細胞和血管，腺管內襯有柱狀上皮細胞，細胞腔的頂端表面被微絨毛覆蓋，富含淋巴細胞(圖4-f)，含有豐富的線粒體和發達的內質網，大部分線粒體嵴清晰可見，內質網排列緊密，略為擴張。在細胞質中可見3種類型的囊泡：Ⅰ型囊泡電子密度較低，染色較淺，包括不同的均勻染色的類脂物質(圖4-b)；Ⅱ型囊泡電子密度最高，染色最深，且通常出現在細胞質頂端(圖4-b)；Ⅲ型囊泡電子密度介于Ⅰ型囊泡和Ⅱ型囊泡之間，通常位于內質網周圍(圖4-a)。

3 討論

禽類與哺乳動物的哈德氏腺在形態學和組織學上存在較大差異。禽類哈德氏腺呈扁平型、橢圓形或者沙漏型，通常位于眼球的腹側和后內側[2]。在哺乳動物中，哈德氏腺是一種外分泌腺，一般呈弓形，凸面緊靠眶骨，凹面緊靠眼球，游離緣呈半月形，通常位于眶腔的后側和鼻側，有時比眼球本身更大，能與真正的淚腺區分開[14]，腺體分支的管狀泡端部具有寬大的腔室，并且很少有管道系統，在組織切片中難以反映出來[15]。哺乳動物的哈德氏腺主要分泌脂質，其分泌的脂質可能轉化為色素或作為脂蛋白復合物附著于色素上，以此來參與機體的脂質代謝過程[16]。不同禽類哈德氏腺的形態與大小有所不同，顯微結構差異較小。雞的哈德氏腺呈扁啞鈴形，兩端粗大鈍圓(后端大于前端)，中間細小，淡紅色或紅褐色，表面可見大小不等的圓形或多邊形凸起的分葉狀結構[17]，為復管泡狀腺，腺體外由一層薄的結締組織包裹，結締組織深入腺體，將其分成大小不等的小葉，其間的導管分為初級、次級和三級導管[18]。本研究發現，中國黃羽鵪鶉哈德氏腺腺體呈不規則帶狀，一端小，一端大，淺粉色，基本組織結構與雞的哈德氏腺相似，結締組織深入腺體，將其分成大小不等的小葉，含有初級、次級和三級導管，各級導管間及管腔可見大量淋巴細胞，在電鏡下偶見脂質，電鏡下內質網和線粒體發育良好，同時可觀察到不同數量和顏色的分泌囊泡，細胞頂部有微絨毛，與已有報道一致[19]。已有研究表明，鵪鶉哈德氏腺管腔分泌物主要是中性黏蛋白、酸性黏蛋白與堿性黏蛋白，且存在大量漿細胞[20]，漿細胞主要由淋巴細胞發育而來[21]，并能在哈德氏腺中檢測到IgG、IgM、IgA等相關因子[22]，與本研究發現哈德氏腺存在大量淋巴細胞的研究結果一致。

a～o 為0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺組織結構。Rc，紅細胞；T，小梁；A，腺泡；L，小葉；Lu，管腔；Bv，血管；Pd，主導管；Sd，次級導管；Td，三級導管。a-o showed histological observation of 0， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 10， 14， 18， 22， 26， 30， 34， 38 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood; T， Trabecalae; A， Acini; L， Lobus; Lu， Lumen; Bv， Blood vessel; Pd， Primary duct; Sd， Secondary duct; Td， Tertiary duct.圖2 不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織結構觀察(100×)Fig.2 Histological observation of different week-old yellow quail Harderian gland(100×)

a～d為0、1、2、3周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺組織結構。Rc，紅細胞；Lc，淋巴細胞；A，腺泡。a-d showed histological observation of 0， 1， 2， 3 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood；Lc， Lymphocyte；A， Acini.圖3 0～3周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織結構觀察(400×)Fig.3 Histological observation of 0-3 week-old yellow quail Harderian gland(400×)

表2不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織學顯微測量

Table2The histology micrometric in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周齡Week-old腺體直徑Gland diameter/mm小葉直徑Lobule diameter/μm導管直徑Catheter diameter/μm小梁直徑Trabecular diameter/μm061.0±7.56 j286.12±29.37 e44.28±2.97 e5.83±0.35 e177.87±3.80 j490.63±34.88 cd77.46±5.88 bcd13.93±0.49 bcd2135.87±1.20 f628.39±68.52 ab95.83±2.33 a16.28±1.68 bc3152.93±2.33 e599.90±60.70 ab87.89±5.84 ab20.11±0.79 ab4206.35±7.15 bc696.83±44.75 a77.86±7.75 bcd20.37±1.43 ab5216.84±10.95 b610.16±49.57 ab84.24±3.54 b21.94±3.39 ab6253.23±4.34 a611.02±56.40 ab89.34±3.96 ab28.47±4.04 a10223.76±11.34 b596.72±20.65 ab81.66±6.15 bc20.39±2.16A ab14218.99±7.47 b618.19±39.24 ab84.12±2.86 b18.84±4.11 abc18205.56±7.01 bc603.34±58.95 ab73.27±3.71 cd16.93±3.04 bc22190.41±7.26 cd577.56±29.13 b67.39±5.71 cd15.85±2.47 bcd26169.43±12.79 de554.00±17.00 bc65.51±6.03 cd14.95±4.59 bcd30152.32±10.02 ef531.57±59.08 bcd70.07±13.77 cd14.50±3.3 bcd34148.62±6.46 ef493.01±33.57 bcd65.20±9.75 cde11.89±1.39 d38141.69±4.80 ef470.68±34.12 d60.74±7.81 de12.05±2.46 cd

a～c，2周齡；d～e ，26周齡。N，核仁；M，線粒體；ER，內質網；Ld，脂滴；TⅠ，Ⅰ型囊泡；TⅡ，Ⅱ型囊泡；TⅢ，Ⅲ型囊泡；Mi，微絨毛；Lu，管腔。a-c， 2 week-old; d-f， 26 week-old. M， Mitochondrion; ER， Endoplasmic reticulum; N， Nucleoli; Ld， Lipid drop; TⅠ， Type Ⅰ vesicles; TⅡ， Type Ⅱ vesicles; TⅢ， Type Ⅲ vesicles; Mi， Microvilli; Lu， Lumen.圖4 哈德氏腺的超微結構變化Fig.4 Ultrastructural changes of Harderian gland

禽類哈德氏腺隨年齡發育的變化稍有差異，如雞的哈德氏腺從胚胎期的第11～12天結膜的上皮細胞發育而來。哈德氏腺的發育分為2個階段：在上皮發育階段(胚胎生活的第13～17天)，腺泡上皮分化為腺上皮附近的管腔，基底上皮細胞的分離層；在胚胎期的第17～18天，間質組織被嗜酸性粒細胞填充；在第17～20天，腺上皮經歷分泌轉化。在第21天，分泌功能得到充分發展[23]。Salah[13]研究發現，在胚胎期的第7天，鵪鶉的哈德氏腺首次出現，開始發育為長管，其近端具有狹窄的管腔并且在遠端具有未分化的腔；隨后幾天，腺泡、導管逐漸形成，在孵化后期達到成熟，與本研究發現中國黃羽鵪鶉的哈德氏腺出生時就存在，且具備完整形態的研究結果一致。