EB病毒血清學及DNA聯合檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥的應用

朱紅巖

徐州醫科大學附屬連云港市東方醫院兒科，江蘇連云港 222042

傳染性單核細胞增多癥(IM)屬于一類急性傳染病，疾病特征包括外周血中淋巴細胞增加、發熱、淋巴結及肝脾腫大、咽峽炎，另外部分患兒還會有異形淋巴細胞表現[1]。臨床證實這一疾病多由EB病毒感染引起，小兒是主要發病人群，在每一年內各個時間段都可能發病，如果沒有實施及時治療，會導致機體多臟器受損。但這一疾病在早期難以準確診斷，漏診或者誤診的可能性大，小兒因為抗EB病毒的抗體沒有明顯反應，所以在診斷上的難度更大[2]。該研究選取該院2015年1月—2018年11月中的54例兒童傳染性單核細胞增多癥為對象，具體分析診斷中進行EB病毒血清學及DNA聯合檢測的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

以該院中收治的54例兒童傳染性單核細胞增多癥為對象，包括25例男以及29例女患兒，年齡范圍：6個月～14歲，年齡平均（8.28±3.36）歲。全部患兒均除外伴有腺病毒、巨細胞病毒、化膿性鏈球菌、弓形體感染，將全部患兒根據年齡分為3組，2歲以下9例，2～3歲10例，4歲及以上35例。全部患兒家長均對該研究知情同意，并通過倫理委員會的批準。

1.2 方法

全部患兒均由同一組醫護人員實施EB病毒血清學及DNA聯合檢測，抽取2 mL靜脈血液，通過免疫酶聯吸附法對 EBV 抗體 EBNA-Ig G、VCA-Ig G、VCA-Ig M、EAIg G進行測定。抽取急性期≤3周、恢復期4～8周、隨訪期≥24周共3個時段的血清樣本，對不同年齡層的EBV抗體水平進行比較，嚴格依據試劑說明書進行操作，陽性標準：≥1.0×103拷貝。

1.3 統計方法

用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，[n(%)]表示計數資料，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EB病毒血清學結果

VCA-IgM檢測顯示總陽性率為70.37%，EBV-DNA陽性率為75.93%，均顯示年齡越大，陽性率逐漸提高，VCA-IgM不同年齡段陽性率比較差異有統計學意義（χ2=5.261 3,P=0.0218），EBV-DNA檢測4歲及以上陽性率高于 2 歲以下（χ2=3.695 2,P=0.007 1），與 2～3 歲差異無統計學意義 （χ2=1.625 1，P=0.261 8）；VCA-IgG 檢測總陽性率為96.30%，在2歲以上的陽性率明顯高于2歲及以下（χ2=4.215 6,P=0.003 1）。 見表1。

表1 不同年齡患兒EB病毒血清學各項指標結果比較[n(%)]

2.2 EA-IgG、EBNA-IgG 結果

在不同時期，EA-IgG陽性率隨著年齡增加逐漸提升，4歲及以上患兒不同時期陽性率均明顯高于4歲以下（χ2=4.052 6，P=0.000 5）；急性期、恢復期 EBNA-IgG 在不同年齡層均處于較低水平，在隨訪期水平有所升高，但差異無統計學意義（χ2=1.052 0，P=0.163 8），見表2。

表2 不同年齡患兒EA-IgG、EBNA-IgG結果[n(%)]

3 討論

傳染性單核細胞增多癥是由EBV感染導致的單核巨噬細胞系統急性增生性傳染病。機體出現EBV感染后，宿主細胞主要是B淋巴細胞，B淋巴細胞受到EB病毒感染后，B淋巴細胞能夠表達多種EB病毒特異性抗原，使得機體出現免疫反應，形成對抗EBV的不同抗體[3]。在原發性EBV感染期間，最先出現的是對抗衣殼抗原（CA）的Ig M、IgG抗體（抗CA-IgM、抗CA-IgG），其中早期會出現抗CA-IgM，1～2個月后會逐漸消除，之后會出現CA-IgG抗體。

當處于急性感染的晚期階段時，會出現抗早期抗原（EA）抗體，其出現能夠持續最長半年時間[4]。處于恢復期時，會出現晚期抗核抗原（NA）抗體，抗 CA-IgG、抗 NAIgG都會持續存在。臨床診斷EB病毒感染傳染性單核細胞增多癥多以抗CA-IgM陽性為重要依據，不過EB病毒感染的血清學會有非常復雜的反應[5]。部分患兒生成的抗CA-IgM會延后，部分甚至可能不出現，這種情況的存在明顯增加臨床傳染性單核細胞增多癥早期診斷的難度[6]。

當前的研究多集中在傳染性單核細胞增多癥診斷中CA-IgM的應用價值，顯示具有較高的陽性率，分析和納入對象年齡、出現特征性傳染性單核細胞增多癥臨床癥狀才進行測定存在相關性[7-8]。該研究對54例兒童傳染性單核細胞增多癥進行EB病毒血清學及DNA聯合檢測，結果顯示VCA-IgM陽性率僅為70.37%，處于較低水平，分析是由于本研究納入對象的年齡均偏低。臨床發現2歲以下的小兒抗 CA-IgM、抗 CA-IgG抗體的陽性率均處于較低水平，該研究2歲以下小兒抗CA-IgM陽性率為33.33%，抗CA-IgG抗體陽性率為77.78%，該研究4歲及以上患兒抗CA-IgM陽性率為82.86%，比較差異有統計學意義 （χ2=5.261 3，P=0.021 8）。 證實應用血清學標準能夠準確診斷2歲以上且處于急性期的兒童傳染性單核細胞增多癥，不過用于2歲以下的兒童傳染性單核細胞增多癥診斷中缺乏足夠依據。

臨床針對2歲以下的兒童傳染性單核細胞增多癥的診斷，不可以僅僅依據抗 CA-IgM陽性率進行診斷，處于急性期、恢復期時，選取兩份血清升高抗 CA-IgG抗體滴度超過4倍的應用價值更高，提示必須實施血清檢測[9]。該研究結果還顯示，2歲以下患兒抗 EA抗體、抗CA-Ig M/IgG的陽性檢出率均不高，分析是由于低齡小兒抗體反應較弱導致?；謴推谕砥诓懦霈FNA-IgG，部分患兒在隨訪期還是檢測不到NA-IgG。通過進行EBV-DNA檢測，能夠完成EBV攜帶者的低水平復制檢測，并且還能夠對EBV引起的相關疾病活動性感染進行檢測[10]。針對EBV攜帶者，淋巴細胞中EBV-DNA載量水平很低，不過這類攜帶者的血清中、血漿中都難以檢測到 EBV-DNA[11]。實時熒光定量 PCR可以對病毒拷貝數進行比較準確的檢測，可以將EB病毒感染、病毒復制情況非常準確的反映出來，可以協助兒童傳染性單核細胞增多癥的臨床診斷，還能夠為治療方案的確定提供科學信息[12]。

類似研究顯示[13]，2歲以下患兒EBV-DNA載體陽性率為66.67%，明顯高于2歲以下患兒VCA-Ig M陽性率33.33%（P＜0.05），該研究結果與之存在一致性。該研究顯示2歲以下患兒在急性期血清學檢查結果顯示陰性，EBV-DNA顯示陽性，最后的診斷是因為血清學抗CA-Ig G復查結果顯示為陰性。所以當處于兒童傳染性單核細胞增多癥急性期時，如果EBV抗體沒有被檢測到，可以結合進行EBV-DNA檢測以提升診斷有效性[14]。尤其針對兒童群體，其抗體生成存在延遲，且抗體較弱，免疫反應沒有完全成熟，因此如果小兒出現比較明顯的傳染性單核細胞增多癥表現，但是急性期的抗體檢測又顯示為陰性，則可以聯合EBV-DNA檢測以獲得更高的診斷準確性。

綜上所述，EB病毒血清學及DNA聯合檢測用于診斷兒童傳染性單核細胞增多癥具有良好價值，值得推廣。