宮頸鱗癌老年患者術后組織中ARMCX1和MMP-2的表達及意義

沈秀敏 王莉 劉偉 王雨艷 黃鑫

(錦州醫科大學附屬第一醫院，遼寧 錦州 121000)

老年宮頸鱗癌與機體基因表達失常相關〔1，2〕。ARM重復X連鎖蛋白(ARMCX)1是ARM重復蛋白家族中的重要成員〔3〕，在損傷后處于修復期的上皮中表達升高，對細胞增殖有一定的調控作用。對細胞外基質和基底膜有較強的降解作用，對細胞的遷移有促進作用的基質金屬蛋白酶(MMP)-2是MMPs家族中的重要的成員，也稱明膠酶A〔4，5〕。本研究應用流式細胞術半定量檢測宮頸鱗癌老年患者術后組織中ARMCX1和MMP-2的表達差別，探討其對腫瘤發生、發展的重要預測價值。

1 材料和方法

1.1臨床資料 選擇2016年1月至2017年12月錦州醫科大學附屬第一醫院確診為宮頸鱗癌的老年女性患者67例作為觀察組，年齡60～86歲，平均68.1歲。納入標準：①符合宮頸鱗狀細胞癌的病理學診斷標準；②宮頸為腫瘤原發部位。排除標準：①轉移性鱗癌；②合并其他器官惡性腫瘤；③有先天發育異常；④術前行放、化療的患者。選取因子宮脫垂行子宮全切的非腫瘤性宮頸組織20例作為對照組，年齡60～78歲，平均69.2歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2ARMCX1和MMP-2的檢測 均留取兩組的新鮮標本，當時取材，75%酒精中固定備用，已剪碎標本組織在不銹鋼網上過濾，2 500 r/min離心10 min后，取沉淀物，制備成單細胞懸液(1×106/ml)，取1 ml，嚴格按實驗步驟加入一抗(ARMCX1或MMP-2)、磷酸鹽緩沖液(PBS)及熒光二抗后上機檢測，對結果進行分析。

1.3結果的計算及判定 應用熒光指數(FI)判斷結果，并進行計算。FI=腫瘤中蛋白表達的熒光強度-對照樣品平均熒光強度/正常對照樣品平均熒光強度。

1.4統計學方法 應用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組ARMCX1和MMP-2蛋白表達量比較 觀察組ARMCX1和MMP-2的表達量均顯著高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組ARMCX1和MMP-2蛋白表達量比較

2.2觀察組不同臨床病理特征中ARMCX1和MMP-2表達量比較 觀察組ARMCX1表達量與腫瘤組織學分型、脈管累犯、增殖指數及淋巴轉移情況顯著相關(P<0.05)。MMP-2表達量與腫瘤組織學分型、脈管累犯及淋巴轉移情況顯著相關(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組不同臨床病理特征中ARMCX1和MMP-2表達量的比較

2.3觀察組中ARMCX1和MMP-2表達的相關性分析 觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達具有顯著正相關性(r=0.38，P=0.037 0)。

3 討 論

老年人由于退行性變化及激素下降，常伴有宮頸上皮的萎縮，而萎縮上皮正常的細胞增殖能力下，但是在腫瘤性因素引發的異型增生時，其細胞的增殖程度高。老年人宮頸鱗癌常以非角化多見，腫瘤形成后浸潤能力強，細胞的異型程度大，轉移能力強，預后較差〔6〕。研究顯示，與宮頸癌相關的轉移蛋白的異常表達，對腫瘤進展有明顯促進作用〔7〕。ARM家族蛋白均含有Armadillo repeat結構，首次在果蠅極性基因中發現，是生物大分子蛋白，其作用方式與其三維結構有關〔8〕。Armadillo repeat的特征是具有保守的結構，前后兩個Armadillo repeat結構有折疊，形成右手螺旋的結構，基因全長4.2 kb，含有4個外顯子，其編碼區在第4個外顯子上，編碼區有453個氨基酸，分子量為46 kD〔9〕。Cartoni等〔10〕認為線粒體轉運是神經和軸突生理的關鍵，這個過程影響神經元損傷反應，而ARMCX1可以調節此過程，并發現在高再生條件下，哺乳動物特有的編碼線粒體定位蛋白基因在軸突切斷后被激活，ARMCX1過表達能增強神經節的線粒體運輸，提高細胞的增殖能力。ARMCX1具有N端的細胞分裂周期因子(CDC)25結構域，能通過催化4，5-二磷酸鹽進行水解，產生二酯酰甘油，激發蛋白激酶C的過表達〔11，12〕。MMP-2在腫瘤進展時腫瘤細胞可以高度分泌。MMP-2的作用底物是Ⅳ型和Ⅴ型膠原，它能直接分解基底膜中的纖維連接蛋白，并能對層黏連蛋白起到一定的降解作用〔13〕。目前認為MMP-2還具有其他的作用，如對凋亡的抑制、對增殖的影響。有研究認為MMP-2對腫瘤間質的血管生成有促進作用〔14〕。蘇敏等〔15〕通過觀察MMP-2在卵巢癌中的表達，發現MMP-2表達升高，可以促進間質中血管內皮細胞的新生，相對于缺氧誘導因子(HIF)-1α和血管內皮生長因子(VEGF)，MMP-2是相對晚期的血管生成因子，即在腫瘤進展中MMP-2對血管生成的作用更明顯。MMP-2通過其受體MMP-2R2發揮作用，引發腫瘤間質的血管生成，并能有效促進CD31、CD34等陽性血管內皮的生成〔16，17〕。

本研究發現宮頸鱗癌老年患者術后組織中ARMCX1和MMP-2的表達明顯高于正常患者，提示二者高表達可以促進宮頸鱗癌的形成過程，二者具有癌基因樣的生物學作用；觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達量與病變的脈管累犯及淋巴結轉移密切相關，提示二者在脈管播散過程中有一定作用，也是判定腫瘤轉移風險因子；二者的表達與病變分型相關，提示二者可能是臨床病理分型的標記蛋白，而非角化型的預后較差，提示二者可能與預后有一定的關聯；ARMCX1的表達與腫瘤的增殖指數密切相關，提示ARMCX1是增殖相關蛋白，其高表達時可以引起腫瘤細胞的生長；相關分析顯示觀察組中ARMCX1和MMP-2的表達具有正相關性。二者對腫瘤進展的作用可能是相關性的依據，但其機制可能完全不同，也不完全在同一通路上。ARMCX1的作用路徑可能較少，對血管的調控可能是間接的，被認為是與機體中其他蛋白(VEGF)協同作用后，促進內皮細胞增殖〔18，19〕。ARMCX1分泌增加，引起腫瘤細胞生長和分化，具有調節腫瘤細胞增殖的作用。但是它可以通過調控P53和ras等基因，引起腫瘤的形成〔20〕。MMP-2可以有多種生物學功能，可以通過識別細胞黏附分子(ECM)及細胞膜上免疫蛋白超家族黏附分子、細胞間黏附分子等介導腫瘤細胞的黏附作用，并引起細胞信號傳導異常及調節細胞生存和增殖。有研究認為整合素αvβ3上調后激活MMP-2，同時能增強其配體，更有效地促進細胞外基質的有效溶解，引發腫瘤細胞的遷移〔21〕。

綜上，ARMCX1和MMP-2在老年宮頸鱗癌術后組織中表達明顯升高，且具有協同作用，對腫瘤的形成和發展有一定的調節作用。