胡椒堿對家兔離體腸平滑肌收縮活動的影響及機制探討

鐘進典 黎莊 劉瓊蘭 鄧子昕 張少蓮 林明琴 李佩瓊

【摘要】目的：研究胡椒堿對兔腸平滑肌的影響，并探討其作用機制。方法：制備兔離體腸平滑肌肌條，采用BL一420E生物機能實驗系統，觀察胡椒堿對腸平滑肌收縮活動的影響;以乙酰膽堿、阿托品分別誘導或抑制腸平滑肌收縮后，觀察胡椒堿對平滑肌收縮的影響，以期探明胡椒堿對腸平滑肌作用的機制。結果：胡椒堿呈濃度依賴性對兔腸平滑肌收縮的振幅有抑制作用，對收縮頻率無影響。胡椒堿40mM可顯著抑制0.1mM乙酰膽堿誘導腸平滑肌的收縮振幅及頻率（P<0.05）;同時也可加強0.ImM阿托品對腸平滑肌收縮的抑制作用（P<0.05）。結論：胡椒堿對兔腸平滑肌收縮的振幅有抑制作用，對收縮頻率無影響，其機制可能與阻斷腸平滑肌上M受體有關。

【關鍵詞】胡椒堿;兔腸平滑肌;收縮活動;影響

胡椒堿（Piperine）為胡椒等常用藥物主要活性成分，具有止瀉、解痙等多方面的藥理作用腳。目前與胃腸道相關的研究主要集中在胡椒堿對小鼠或大鼠體內腸液分泌、胃腸排空的影響上吲，對小腸平滑肌收縮活動及機制研究尚未見報道。本文旨在通過胡椒堿灌流家兔離體腸標本，觀察胡椒堿對腸平滑肌收縮活動的影響并探討其作用機制。

1動物與試劑

1.1動物

新西蘭大耳白10只，體重（2_2±0.3kg，雌雄各半。購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2009-0004）。

1.2藥物及試劑

胡椒堿：批號：DH-23，阿托品：批號：20140601，（均購自上海笛柏化學品技術有限公司）;氯化乙酰膽堿（Ach）（上海麥克林化學技術有限公司，批號：C10052299）。

1.3儀器

BL-420E生物機能試驗系統（成都泰盟科技有限公司），平滑肌離體灌流裝置（上海豪敦工貿有限公司）。

2方法

2.1離體腸段制備及試驗系統調整

取健康大耳白兔，禁食24h，不禁水，擊兔頭枕部致死后迅速切開腹部，取十二指腸腸管20cm，置于冰凍Tyr0de's液中，洗凈腸內容物，將其剪成1-1.5cm的腸段作為實驗標本。

打開BL-420E生物機能試驗系統，調零，定標，在一通道輸入接口處安裝張力換能器。調節恒溫平滑肌槽，使水溫保持在37±0.5°，將臺氏液加入預管內，藥物管加入Tyr0de's液15ml。取一腸段，上端連接張力換能器，下端連于L一型通氣鉤上，將腸管放入藥物管并固定，調節恒溫平滑肌槽，持續通入混合氣（96%02，4%C02），60-80個氣泡/min，標準負荷lg，平衡30min，待試驗系統穩定后，進行試驗。

2.2胡椒堿對腸平滑肌自主活動的影響

按項下操作，描記一段小腸的正常收縮曲線后，累計加入胡椒堿吐溫溶液，使終濃度分別為10、20、30、40、50mlVl，加藥間隔5min，對照組加入等量吐溫一80，累加5次，每次間隔5min，觀察胡椒堿對小腸平滑肌收縮活動的影響，記錄收縮頻率及振幅，并計算抑制率。

2.3胡椒堿對乙酰膽堿誘導腸平滑肌收縮的抑制作用

按項下操作，描記一段小腸的正常收縮曲線后，分別加入Ach、阿托品（終濃度均為0.1mM），待曲線上升或下降穩定后再加入胡椒堿40mM，對照組加等量吐溫一80，記錄加入胡椒堿后收縮活動的頻率和振幅，計算抑制率。

2.4數據分析與統計

采用SPSSl7.0進行統計分析，計量資料以x±s表示，進行t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。用區間測量法測量給藥前lmin內和給藥后3min內收縮曲線的平均振幅和頻率，計算公式為：頻率（或振幅）抑制率（%）一（給藥前平均頻率（或振幅）一給藥后平均頻率（或振幅））/給藥前平均頻率（或振幅）x100%。

3結果

3.1胡椒堿對小腸平滑肌自主活動的影響

吐溫一80對家兔腸平滑肌運動波形無明顯影響，胡椒堿在10-50mM的范圍內可呈濃度依賴性抑制家兔腸平滑肌運動波形濃度在10mM時，與對照組相比，對腸平滑肌運動的幅度和頻率影響很小;濃度在20-50mM時可顯著性抑制腸平滑肌活動的振幅（P<0.05），抑制率隨濃度的增加而增強，但對收縮頻率抑制不明顯，結果見表1。

3.2胡椒堿對Ach、阿托品干預后小腸平滑肌收縮的影響

當加入0.1mM ACh后，腸平滑肌正常運動波形急劇升高，頻率加快，加入40mM胡椒堿后，可明顯降低ACh誘導的腸平滑肌的收縮頻率和振幅（P<0.01），

（結果見表2）。當加入0.1mM阿托品后，腸平滑肌正常收縮曲線被抑制，40mM胡椒堿可加強此抑制作用（P<0.05），（結果見表3）。

4討論

胃腸痙攣的發生機制與神經遞質（Ach、組胺、5-HT等）作用于胃腸平滑肌上相應受體有關。Ach激動M受體，引起細胞內IP3、ca2+濃度增加，從而使胃腸平滑肌收縮。阿托品為非選擇性M受體拮抗劑，可抑制乙酰膽堿的作用，臨床上常作解痙藥使用。本試驗進行了不同濃度胡椒堿對腸平滑肌收縮活動的影響以及Ach、阿托品分別干預后胡椒堿對腸平滑肌的作用。結果顯示，胡椒堿對腸平滑肌收縮幅度有抑制作用，且呈劑量依賴性，但對收縮頻率無影響;胡椒堿既能降低Ach誘導的腸平滑肌收縮幅度及頻率;也可加強阿托品對腸平滑肌的抑制作用。以上結果推測胡椒堿對腸平滑肌的抑制作用可能與阻斷腸平滑肌M受體有關，同時也提示抑制程度與腸平滑肌收縮狀態有關，對正常狀態的影響不明顯，對處在興奮狀態（收縮振幅增大及頻率加快）的有顯著抑制作用。

（通訊作者：李佩瓊）