美花石斛化學成分及其護膚活性研究

顏 莎，馬瑞婧，楊 柳，李金玉，楊曉蓓，胡江苗*

1云南大學化學科學與工程藥學院，昆明650091；2中國科學院昆明植物研究所植物醫生研發中心，昆明650201

美花石斛(DendrobiumloddigesiiRolfe)是蘭科石斛屬多年生草本植物，產于廣西(那坡、融水、凌云、九州、永福、隆林等地)、廣東南部(羅浮山)、海南(白沙)、貴州西南部(羅甸、興義、關嶺)、云南南部(思茅)，在老撾、越南也有分布[1]；其莖纖細而下垂，自然生成或盆栽時莖常呈半圓形彎曲匍狀，美花石斛收載于2015“化妝品名錄”，也曾收載于《中華人民共和國藥典》(2000年版)。目前對于美花石斛的物質基礎研究并不多，迄今為止從美花石斛中得到的化合物類型有茋類[2]、木脂素[2]、甾體[2]、酚類[3]、生物堿[4]等；一部分研究集中在美花石斛的栽培[5]以及美花石斛多糖[6]，另一部分研究表明它的酚性成分具有抗糖尿病活性，可用于治療2型糖尿病[7]。

研究表明0.01%的膠原蛋白純溶液就能形成很好的保水層，供給皮膚所需要的全部水分[8]；而DPPH自由基活潑,具有強氧化性,正常情況下在機體內發揮重要的免疫作用,并能被機體存在的抗氧化系統所清除，隨著外界環境的惡化,人體內自由基產生越來越多,其副作用也愈加明顯,它可使脂褐素生成增加,線粒體DNA突變、蛋白質合成減少等作用加速衰老[9]；酪氨酸酶具有單酚加羥酶和二酚氧化酶的活性，是目前已知的生物體中唯一參與黑色素合成的關鍵酶，因此酪氨酸激酶抑制劑可以美白祛斑。基于課題組前期對石斛的研究基礎和經驗，同時也為了更好的開發出美花石斛的護膚活性，本文利用各種色譜法從美花石斛中分離得到了12個化合物并且從DPPH自由基清除率、膠原蛋白分泌、酪氨酸酶抑制率三個方面進行了護膚活性的評價，最終發現了3個化合物具有護膚活性。

1 材料與儀器

Buker Avance Ⅲ-400超導核磁共振儀(Buker Biospin GmbH,Rheinstetten,Germany)、Buker Avance Ⅲ-500超導核磁共振儀(Buker Biospin GmbH,Rheinstetten,Germany)、Buker Avance Ⅲ-600型超導核磁共振儀(Buker Biospin GmbH,Rheinstetten,Germany),API QSTAR Pulsari 液相四級桿飛行時間質譜儀(MDS Scipaszex,Concord,Ontario,Canada),Auto Spec Premier P776 三扇型雙聚焦質譜儀(Waters,USA),薄層層析硅膠、柱層析硅膠(200～300目，300～400目,青島美高集團有限公司，中國)，Sephadex LH-20 (20～150 um,Ameisham Biosciences,Uppsala,Sweden),MCI gel CHP-20P (75～150 μm，Mitsubishi Chemical Corp.,Tokyo,Japan),Lichroprep RP-18 gel (40～63 μm,Merk,Darmstadt,Germany),美花石斛采自云南文山，經云南大學虞泓教授鑒定為美花石斛(Dendrobiumloddigesii)。

成人真皮纖維原細胞(human dermal fibroblasts-adult,HDFa)購自Cascade Biologics,DMEM(高糖)培養基、PBS、Hank平衡鹽溶液(hank’s balanced salt solution,HBSS)、青鏈霉素和胎牛血清(FBS)購自Hyclone公司；0.25%胰酶(含EDTA)購自Gibico公司；DPPH、水溶性維生素E(Trolox)、蘑菇酪氨酸酶、左旋多巴(L-Dopa)和曲酸(Kojic Acid)購自Sigma公司；轉移生長因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)購自Peprotech公司；膠原蛋白ELISA試劑盒購自TaKaRa公司；MTS試劑購自Promega公司。

2 實驗方法

2.1 美花石斛活性成分的提取分離

干燥的美花石斛的全草(10.2 kg)粉碎后用80%的EtOH 室溫浸泡三次，減壓濃縮得浸膏溶于水，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到乙酸乙酯部分220 g和正丁醇部分270 g。將乙酸乙酯部分溶解，吸附于450 g硅膠(200～300目)，經硅膠柱層析石油醚-丙酮梯度洗脫(15∶1,13∶1,10∶1,5∶1,3;1,0∶1),經TLC 檢測合并為22個組分(Fr.1-22)。Fr.11(6 g)經過正向硅膠柱(氯仿-甲醇 300∶1)洗脫：Fr.11.1 經過MCI 色譜(60%～95% 甲醇-水洗脫)和正向硅膠(氯仿-甲醇 300∶1洗脫)分離得到化合物8(69 mg)。Fr.13(850 mg)經過MCI 色譜(60%～95% 甲醇-水洗脫)分離：Fr.13.1 經過HPLC (35% 甲醇-水洗脫)分離得到化合物9(6 mg)。Fr.15(5.4 g)經過MCI 色譜(60%～95% 甲醇-水洗脫)分離得到化合物1(56 mg)。Fr.16(19 g)經過正相硅膠色譜(氯仿-甲醇 100∶1～20∶1)分離：Fr.16.4.1～Fr.16.4.5.這5個餾分分別經過 Sephadex LH-20 色譜(90% 甲醇-水)分離得到10(2 mg),11(3 mg),12(1 mg)；Fr.19 (20 g)經過MCI 色譜(30%-100% 甲醇-水)分離：Fr.19.4 經過Sephadex LH-20 (90% 甲醇-水)分離得到2(15 mg)；Fr.19.6經過正向硅膠色譜(氯仿-甲醇 30∶1)分離：Fr.19.6.1經過正向硅膠色譜(氯仿-甲醇 30∶1)分離,Fr.19.7經過正向硅膠柱色譜(氯仿-甲醇 60∶1)和Sephadex LH-20 色譜(90% 甲醇-水)分離得到6(4 mg)。Fr.20(12 g)經過MCI 色譜(30%～100% 甲醇-水)分離,Fr.20.2經過正向硅膠柱色譜(氯仿-甲醇 30∶1)和Sephadex LH-20 色譜(90% 甲醇-水)分離得到4(2 mg)。Fr.20.3經過正向硅膠柱色譜(氯仿-甲醇 80∶1)分離,Fr.20.3.2經過正向硅膠柱色譜(氯仿-甲醇 80∶1)分離得到7(54 mg),Fr.20.3.3經過正向硅膠柱色譜(氯仿-甲醇 20∶1)、Sephadex LH-20 色譜(90% 甲醇-水)分離得到5(23 mg)；Fr.21(7 g)經過MCI 柱色譜(30%～100% 甲醇-水)分離：Fr.21.2經過正向硅膠柱(氯仿-甲醇 10∶1)洗脫,Fr.21.2.2 黃色沉淀，用甲醇洗脫得到化合物3(10 mg)。

2.2 DPPH自由基清除實驗

將待測藥物(100 μg/mL)與DPPH(終濃度為100 μmol/L)混合反應，設定3個重復孔，同時設置不含藥物的空白對照孔和Trolox陽性對照孔，30 °C，1 h，酶標儀測定OD值，檢測波長為515 nm，計算得到抗氧化率。

抗氧化率(%)=(1-實驗孔OD515 nm/ 空白孔OD515 nm)× 100

2.3 酪氨酸酶活性抑制實驗

將待測藥物(100 μg/mL)與L-Dopa混合，L-Dopa的終濃度為1.25 mM。加入酪氨酸酶(終濃度25 U/mL)開始反應，設定3個重復孔，同時設置不含藥物的空白對照和Kojic Acid陽性對照，室溫放置，5 min，酶標儀測定OD值，檢測波長為490 nm。計算得到酪氨酸酶活性抑制率。

酪氨酸酶活性抑制率(%)=(1-樣品OD490 nm/ 實驗對照孔OD490 nm)× 100

2.4 HDFa膠原蛋白分泌實驗

96孔細胞培養板上，將HDFa細胞與待測化合物(終濃度：10 μg/mL)混合，設置不含藥物的空白對照和TGF-β陽性對照；37 °C，5% CO2培養3天，收取細胞培養上清，存于-80 °C；加入MTS，采用MTS比色法檢測490 nm的OD值；按膠原蛋白ELISA試劑盒中提供的方法檢測膠原蛋白的分泌，酶標儀測定OD值，檢測波長為450 nm。計算得到膠原蛋白分泌增加率。

膠原蛋白分泌增加率(%)=(實驗孔OD450 nm/ 細胞存活率 / 空白孔OD450 nm- 1)× 100

3 結果與討論

3.1 結構鑒定

化合物1黃色粉末(甲醇)；C15H12O3;MW=240.25;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:6.97(1H,d,J=2.4 Hz,H-1),6.89 (1H,d,J=2.4 Hz,H-3),7.10 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6),7.39 (1H,t,J=7.5 Hz,H-7),7.35 (1H,dd,J=7.8,1.2 Hz,H-8),7.55 (1H,d,J=8.4 Hz,H-9),7.42 (1H,d,J=9.0,H-10),4.04 (3H,s,H-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:108.3 (d,C-1),157.9 (s,C-2),103.2 (d,C-3),155.0 (s,C-4),156.9 (s,C-5),117.2 (d,C-6),130.0 (d,C-7),121.8 (d,C-8),127.7 (d,C-9),127.4 (d,C-10),114.4 (s,C-4a),120.2 (s,C-4b),135.5 (s,C-8a),137.8 (s,C-10a),59.0 (q,-OMe)[10]。以上數據與文獻[10]對照基本一致，故確定為拖鞋狀石斛素。

化合物2黃色粉末(甲醇)；C14H12O3;MW=228.08;1H NMR (MeOD,400 MHz)δ:6.25 (1H,d,J=2.4Hz,H-1),6.20 (1H,d,J=2.4Hz,H-3),8.13 (1H,d,J=9.3Hz,H-4),6.61 (1H,dd,J=9.3,2.6 Hz,H-6),6.63 (1H,d,J=2.6 Hz,H-8),2.26 (4H,m,H-9,10);13C NMR (MeOD,100 MHz)δ:107.6(d,C-1),156.4 (s,C-2),102.7 (d,C-3),157.0 (d,C-4),129.0 (s,C-5),113.6 (d,C-6),155.8 (s,C-7),115.0 (d,C-8),31.3 (t,C-9),31.8 (t,C-10),115.3 (s,C-4a),126.7 (s,C-4b),142.0 (s,C-8a),140.2 (s,C-10a)[10]。以上數據與文獻[10]對照基本一致，故確定為2,4,7-三羥基-9,10-二氫菲。

化合物3黃色粉末(甲醇)；C14H12O4;MW=244.07;1H NMR (DMSO-d6,600 MHz)δ:2.80 (1H,dd,J=15.6,3.0 Hz,H-2a),2.56 (1H,dd,J=16.2,9.0 Hz,H-2b),4.17 (1H,m,H-3),3.16 (1H,m,H-4a),2.91 (1H,dd,J=16.2,7.8 Hz,H-4b),7.41 (1H,d,J=3.0 Hz,H-5),7.12 (1H,dd,J=9.3,3.0 Hz,H-7),9.28 (1H,d,J=9.0 Hz,H-8),10.92 (1H,brs,H-10);13C NMR (DMSO-d6,150 MHz)δ:197.1 (s,C-1),49.5 (t,C-2),65.1 (d,C-3),40.2 (t,C-4),104.3 (d,C-5),154.3 (s,C-6),120.6 (d,C-7),127.7 (d,C-8),157.2 (s,C-9),109.2 (d,C-10),143.7 (s,C-4a),126.9 (s,C-8a),118.9 (s,C-9a),125.7 (s,C-10a)[11]。以上數據與文獻[11]對照基本一致，故確定為3,6,9-三羥基-3,4-二氫蒽-1(2H)-酮。

化合物4黃色固體(甲醇)；C20H20O6;MW=360.16;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:6.80 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.72 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.65 (1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),2.94 (1H,dd,J=13.2,4.8 Hz,H-7a),2.50 (1H,dd,J=13.2,11.4 Hz,H-7b),2.74 (1H,m,H-8),3.99 (1H,dd,J=8.4,6.6 Hz,H-9a),3.73 (1H,dd,J=8.4,6.6 Hz,H-9b),6.76 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.77 (1H,dd,J=1.8,1.2 Hz,H-4′),6.91 (1H,d,J=1.2 Hz,H-6′),4.75 (1H,d,J=6.6 Hz,H-7′),2.38 (1H,m,H-8′),3.84 (1H,overlap,H-9′a),3.63 (1H,dd,J=10.8,6.0 Hz,H-9′b),3.83 (3H,s,3-OMe),3.85 (3H,s,5′-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:133.7 (s,C-1),113.5 (d,C-2),146.0 (s,C-3),149.2 (s,C-4,5’),116.3 (d,C-5),122.3 (d,C-6),33.8 (t,C-7),44.0 (d,C-8),73.7 (t,C-9),135.9 (s,C-1′),120.0 (d,C-2′),147.2 (s,C-3′),116.1 (d,C-4′),110.7 (d,C-6′),84.2 (d,C-7′),54.3 (d,C-8′),60.6 (t,C-9′),56.5 (q,3,5′-OMe)[12]。以上數據與文獻[12]對照基本一致，故確定為3,5′-二甲氧基-3′,4,9′-三羥基-7′,9-環氧-8,8′-木酚素。

化合物5白色固體(甲醇)；C25H26O7;MW=438.17;1H NMR (MeOD,500 MHz)δ:4.55 (1H,d,J=8.0 Hz,H-2),3.96 (1H,m,H-3),2.82 (1H,dd,J=15.5,5.5 Hz,H-4a),2.52 (1H,dd,J=15.5,8.5 Hz,H-4b),6.26 (1H,d,J=2.5Hz,H-6),6.17 (1H,d,J=2.5Hz,H-8),6.95 (1H,d,J=1.5Hz,H-2′),6.79 (1H,d,J=8.0 Hz,H-3′),6.83 (1H,d,J=1.5 Hz,H-6′′),6.61 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2′′),6.68 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5′′),6.59 (1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-6′′),2.73 (4H,m,H-α,α′),3.82 (3H,s,3′′-OMe);13C NMR (MeOD,125 MHz)δ:82.9 (d,C-2),69.1 (d,C-3),31.6 (t,C-4),143.3 (s,C-5),110.5 (d,C-6),157.4 (s,C-7),101.9 (d,C-8),156.5 (s,C-9),111.5 (s,C-10),132.0 (s,C-1′),111.9 (d,C-2′),148.6 (s,C-3′),147.5 (s,C-4′),116.0 (d,C-5′),121.4 (d,C-6′),134.6 (s,C-1′′),113.3 (d,C-2′′),148.9 (s,C-3′′),145.6 (s,C-4′′),116.1 (d,C-5′′),121.9 (d,C-6′′),36.1 (t,C-α),37.4 (t,C- α′),56.3 (q,3′-OMe),56.4 (q,3′′-OMe)[13]。以上數據與文獻[13]對照基本一致，故確定為5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙基)-2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)苯并二氫呋喃-3,7-二醇。

化合物6白色固體(甲醇)；C26H28O7;MW=452.18;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:4.59 (1H,d,J=7.8 Hz,H-2),3.99 (1H,m,H-3),2.87 (1H,dd,J=15.6,5.4 Hz,H-4a),2.57 (1H,dd,J=15.6,9.0 Hz,H-4b),6.35 (1H,d,J=2.4 Hz,H-6),6.29 (1H,d,J=2.4Hz,H-8),6.97 (1H,d,J=1.8Hz,H-2′),6.69 (1H,d,J=7.8 Hz,H-3′),6.85 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6′),6.63 (1H,d,J=1.2 Hz,H-2′′),6.80 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5′′),6.60 (1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6′′),2.79 (4H,m,H-α,α′),3.85 (3H,s,7-OMe),3.78 (3H,s,3′′-OMe),3.70 (3H,s,3′-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:83.1 (d,C-2),69.2 (d,C-3),31.8 (t,C-4),143.5 (s,C-5),119.6 (d,C-6),160.4 (s,C-7),100.4 (d,C-8),156.7 (s,C-9),112.7 (s,C-10),132.1 (s,C-1′),111.9 (d,C-2′),148.0 (s,C-3′),147.7 (s,C-4′),116.1 (d,C-5′),121.5 (d,C-6′),134.6 (s,C-1′′),113.5 (d,C-2′′),149.0 (s,C-3′′),145.8 (s,C-4′′),116.2 (d,C-5′′),122.1 (d,C-6′′),36.4 (t,C-α),37.6 (t,C- α′),56.5 (q,7-OMe),56.4 (q,3′′-OMe),55.7 (q,3-OMe)[14]。以上數據與文獻[14]對照基本一致，故確定為5-(4′′-羥基-3′′-甲氧基苯乙基)-2-(4′-羥基-5′-甲氧基苯基)-7-甲氧基苯并二氫吡喃-3-醇。

化合物7黃色顆粒狀結晶(甲醇)；C22H26O8;MW=418.16;1H NMR (MeOD,500 MHz)δ:3.10 (2H,m,H-1,5),4.67 (2H,d,J=4.0,H-2,6),3.84 (2H,dd,J=9.0,3.5 Hz,H-4b,8b),4.22 (2H,dd,J=9.0,6.5 Hz,H-4a,8a),3.80 (12H,s,3,5.3′,5′-OMe),6.63 (4H,s,H-2′,6′,2′′,6′′);13C NMR (MeOD,125 MHz)δ:55.5 (d,C-1,5),87.6 (d,C-2,6),72.8 (t,C-4,8),133.2 (s,C-1′,1′′),104.5 (d,C-2′,6′,2′′,6′′),56.8 (q,3,5,3′,5′-OMe),136.1 (s,C-4′,4′′),149.3 (s,C-3′,5′,3′′,5′′)[15]。以上數據與文獻[15]對照基本一致，故確定為丁香脂素。

化合物8黃色結晶(氯仿)；C8H8O3;MW=152.05;1H NMR (CDCl3,600 MHz)δ;6.87 (1H,br s,H-2),7.05 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5),7.43 (1H,d,J=7.8 Hz,H-6),9.81 (1H,s,CHO),3.93 (3H,s,OMe);13C NMR (CDCl3,150 MHz)δ:127.9 (s,C-1),114.7 (d,C-2),147.4 (s,C-3),152.1 (s,C-4),109.0 (d,C-5),127.7 (d,C-6),191.3 (d,CHO),56.1 (q,OMe)[16]。以上數據與文獻[16]對照基本一致，故確定為異香草醛。

化合物9黃色粉末(氯仿)；C10H10O3;MW=178.06;1H NMR (CDCl3,600 MHz)δ:7.07 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.97 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.13 (1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),7.41 (1H,d,J=16.2 Hz,H-7),6.60 (1H,dd,J=15.6,7.8 Hz,H-8),9.66 (1H,d,J=7.2,H-9),3.95 (3H,s,-OMe);13C NMR (CDCl3,150 MHz)δ:126.9 (s,C-1),109.6 (d,C-2),147.1 (s,C-3),149.1 (s,C-4),115.1 (d,C-5),124.3 (d,C-6),153.4 (d,C-7),126.6 (d,C-8),193.9 (d,C-9),56.2 (q,-OMe)[17]。以上數據與文獻[17]對照基本一致，故確定為松柏醛。

化合物10黃色粉末(甲醇)；C8H10O3;MW=154.06;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:6.75 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.78 (1H,dd,J=8.4,1.8Hz,H-6),6.94 (1H,d,J=1.8,H-2),4.50 (2H,s,H-7),3.86 (3H,s,4-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:134.3 (s,C-1),116.1 (d,C-2),147.1 (s,C-3),149.1 (s,C-4),112.2 (d,C-5),121.2 (d,C-6),56.4 (q,4-OMe),65.5 (t,C-7)[18]。以上數據與文獻[18]對照基本一致，故確定為2-甲氧基-5-羥甲基苯酚。

化合物11黃色油狀物(甲醇)；C10H14O3;MW=182.09;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:6.77 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.69 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.62 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6),2.59 (2H,t,J=7.8 Hz,H-7),1.80 (2H,m,H-8),3.55 (2H,t,J=6.6 Hz,H-9),3.83 (3H,s,3-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:135.1 (s,C-1),113.2 (d,C-2),149.0 (s,C-3),145.6 (s,C-4),116.2 (d,C-5),122.0 (d,C-6),35.9 (t,C-7),32.8 (t,C-8),62.4 (t,C-9),56.4 (q,3-OMe)[19]。以上數據以及質譜與文獻[19]對照基本一致，故確定為二氫松柏醇。

化合物12黃色油狀物(甲醇)；C9H12O3;MW=168.08;1H NMR (MeOD,600 MHz)δ:6.80 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.71 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.65 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6),2.73 (2H,t,J=7.2 Hz,H-7),3.71 (2H,t,J=7.2 Hz,H-8),3.83 (3H,s,3-OMe);13C NMR (MeOD,150 MHz)δ:131.9 (s,C-1),113.8 (d,C-2),149.0 (s,C-3),145,6 (s,C-4),116.2 (d,C-5),122.5 (d,C-6),40.0 (t,C-7),64.7 (t,C-8),56.4 (q,3-OMe)[20]。以上數據與文獻[20]對照基本一致，故確定為4-羥基-3- 甲氧基苯乙醇。

3.2 美白活性測試結果

本實驗對12個樣品的DPPH自由基清除能力、酪氨酸酶抑制能力及促膠原蛋白分泌能力進行評價。結果顯示，100 (g/mL濃度下，化合物1、2、6的DPPH 自由基清除率分別為84.4%、94.6%、89.7%；12個合物均沒有酪氨酸酶抑制活性(表 1),HDFa共培養的結果顯示化合物2在10 ug/mL時，HDFa細胞膠原蛋白分泌量增加了25.6%。

表1 抗氧化、酪氨酸酶抑制率、膠原蛋白分泌

注：Trolox:25μg/mL;Kojic acid:10μg/mL;TGF-β:0.01μg/mL;a:DPPH 自由基清除陽性對照；b:酪氨酸激酶抑制劑；c:膠原蛋白陽性對照。

Note:aPositive control used for DPPH radical scavenging assay at the concentration of 25μg/mL.b Positive control used for anti-tyrosinase assay at the concentration of 10 μg/mL.c Positive control used for collagen production assay at the concentration of 0.01 μg/mL.

4 結論

從結果可知化合物1、2、6可以有效地清除DPPH自由基(>80%)，顯示良好的抗氧化活性；化合物2顯示可以很好的促進膠原蛋白的分泌(>20%)，表明其具有抗衰老活性；但12個化合物均沒有顯示出抑制酪氨酸激酶的活性(>30%)。

目前關于美花石斛的化學基礎研究較少，對于美花石斛的美白活性的研究也較少，本文從美花石斛的全草中分離得到了12個化合物，化合物類型包括蒽醌類，木脂素類，黃烷-3-醇類以及簡單的苯環取代物。同時對12個化合物的DPPH自由基清除能力、酪氨酸酶抑制能力及促膠原蛋白分泌能力進行評價。通過比較化合物1、2、6的化學結構可知，美花石斛中的化合物清除DPPH 自由基的能力為蒽醌化合物強于黃烷-3-醇類化合物；通過比較化合物1、2的化學結構可知，蒽醌類化合物中羥基的數量越多，其促進自由基分泌的能力越強。本文在明確了美花石斛護膚作用的活性物質的同時也提供美花石斛護膚活性的科學依據。