H9亞型禽流感病毒毒種保存期試驗

2019-04-27 06:33:42梁宛楠

飼料博覽 2019年3期

梁宛楠

（哈藥集團生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

禽流感（AI）又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟，是由正黏病毒科、流感病毒屬A型流感病毒引起的一種急性、敗血型傳染病，幾乎所有野生及家養禽類均可感染。根據禽流感致病性的不同，可以將禽流感分為高致病性禽流感和低致病性禽流感[1]。

本試驗將H9禽流病毒TJ株檢驗和基礎種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于不同的保存時間抽樣隨機抽樣，進行病毒含量測定、血凝價測定、毒力測定和無菌檢驗，確定凍干毒種-70℃條件下的保存期；將檢驗和生產種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存后不同時間隨機取出，進行病毒含量測定、血凝價測定、毒力測定和無菌檢驗，確定濕毒-20℃條件下的保存期。

1 試驗材料

1.1 毒種

毒種信息見表1。

表1 毒種信息

1.2 檢驗用培養基

無菌檢驗用硫乙醇酸鹽培養基（T.G）、酪胨瓊脂（G.A）和葡萄糖蛋白胨（G.P），由哈藥集團生物疫苗有限公司制備；支原體檢驗用Frey氏培養基，購自中國獸醫藥品監察所。

1.3 SPF雞及SPF雞胚

由哈藥集團生物疫苗有限公司五常SPF雞場提供。

2 試驗方法

將檢驗和基礎種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于保存當日和保存后3、6、9、12、18和24個月，隨機抽樣，分別進行病毒含量測定、血凝價測定、對雞毒力測定和無菌檢驗，確定凍干毒種-70℃條件下的保存期；將檢驗和生產種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存后3、6、9和12個月隨機取出，進行病毒含量測定、血凝價測定、毒力測定和無菌檢驗。

2.1 病毒含量測定

將毒種用生理鹽水作10倍系列稀釋，取10-7、10-8、10-93個稀釋度，各尿囊腔內接種10日齡SPF雞胚5枚，每胚0.1 mL，置37℃繼續孵育，24 h以前死亡的雞胚棄去不計，在24～96 h死亡的雞胚隨時取出，至96 h，取出所有活胚，分別收獲雞胚液，測定雞胚液HA效價，HA效價≥1∶16（微量法）者判為感染，按Reed-Muench法計算EID50。

2.2 紅細胞凝集效價

按現行《中國獸藥典》附錄進行測定。

2.3 對雞的毒力

將毒種用生理鹽水稀釋至107.0EID50/0.1 mL，靜脈注射42和56日齡SPF雞各5只，0.1 mL·只-1。攻毒后第5天，采集每只雞的泄殖腔拭子進行病毒分離。將每只雞的樣品經尿囊腔內接種10日齡SPF雞胚5枚。孵育觀察5 d，無論死胚、活胚均應測定雞胚液血凝價，以5枚雞胚中至少有1枚雞胚的雞胚液血凝價不低于1∶16（微量法）判為病毒分離陽性。對病毒分離為陰性的樣品，應盲傳1次，再次測定HA價。記錄結果。