CAPZA 1在非小細胞肺癌中的表達及臨床價值

陳小華，李偉

宜賓市第二人民醫院病理科，四川宜賓644000

目前，肺癌是全球腫瘤致死的首要原因，發病率和病死率均較高，是威脅人類健康的重要疾病，已成為全球的公共健康問題。肺癌的種類繁多，包括小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌等多種病理類型，其中，非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的發病率約占肺癌發病總數的80%，是肺癌的主要病理類型[1]。隨著醫學技術的飛速發展，雖然以手術為主的綜合治療取得了很好的療效，但是，NSCLC患者的5年生存率仍不足20%，處于較低水平[2]。因此，如何有效地預測NSCLC患者的生存情況一直是臨床工作關注的重點之一。CAPZ是一種肌動蛋白結合蛋白，可結合于肌動蛋白絲的正極，與肌動蛋白絲的動態裝配和細胞運動狀態有關。CAPZ由α和β兩個亞基組成，CAPZA1是CAPZ的α1亞基[3]。有研究顯示，CAPZA1在肝癌、胃癌、食管癌等多種類型腫瘤的發生、發展過程中發揮著重要的作用，且腫瘤病理分級與患者的預后密切相關[3-5]，但是，目前仍缺乏關于CAPZA1在NSCLC中的預測作用的相關研究。因此，本研究探討了CAPZA1在NSCLC的表達情況及其對NSCLC患者預后的預測作用，旨在為臨床治療NSCLC提供參考，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2013年1月至2014年1月于宜賓市第二人民醫院接受手術治療的NSCLC患者。納入標準：①經細胞學或組織病理學確診為NSCLC[6-7]；②有可供檢測的腫瘤組織標本；③臨床資料完整。排除標準：①既往接受過放療、化療和生物細胞免疫治療；②存在意識或精神障礙；③合并心、肝、腎等器官功能不全；④合并血液系統、免疫系統等其他系統疾病。根據納入和排除標準，本研究共納入52例NSCLC患者，其中，男37例，女15例；年齡46～75歲，平均年齡（63.1±11.4）歲；腫瘤直徑（0.8～11.8）cm，平均腫瘤直徑（6.3±2.9）cm；TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期18例，Ⅳ期12例；發生淋巴結轉移34例，未發生淋巴結轉移18例；發生脈管侵犯21例，未發生脈管侵犯31例。收集52例NSCLC患者的NSCLC組織標本及其癌旁正常組織（距離腫瘤組織2 cm以上）標本41例。

1.2 免疫組織化學染色方法

所有病理標本均于術中取材，標本獲得后立即置于4%中性甲醛液中固定，經石蠟包埋，蠟塊切片后，篩選出腫瘤細胞成分＞80%的切片進行檢測。環保脫蠟液（購于中國博士得生物科技有限公司）脫蠟，高溫修復抗原，3%H2O2處理10 min，10%山羊血清室溫封閉1 h；Ki-67抗體（購于美國Proteintech公司）、兔CAPZA1多克隆抗體（購于美國Proteintech公司）4℃孵育過夜。采用抗鼠/兔通用型免疫組織化學檢測試劑盒（購于美國Proteintech公司）檢測Ki-67、CAPZA1抗體的結合情況并顯色，蘇木素復染2 min后進行脫水處理，中性樹脂封片。Ki-67染色結果由兩位病理科醫師根據NSCLC陽性細胞所占百分比進行判定：＜50%判定為Ki-67指數低，≥50%判定為Ki-67指數高；Ki-67指數越高代表腫瘤細胞增殖越活躍。CAPZA1染色結果由兩位病理科醫師根據NSCLC陽性細胞所占百分比進行判定：1%～24%為弱陽性（+），25%～49%為陽性（++），50%～74%為中等陽性（+++），75%～100%為強陽性（+++++）；將“+”的免疫組織化學結果定義為CAPZA1低表達，將“++～+++++”的免疫組織化學結果定義為CAPZA1高表達。

1.3 觀察指標及隨訪

觀察CAPZA1在NSCLC組織和癌旁正常組織中的表達情況，分析CAPZA1表達情況與NSCLC患者臨床特征的關系。術后均對患者進行了隨訪，隨訪方式為門診配合電話隨訪，隨訪時間為1～48個月，以死亡、腫瘤復發為隨訪終點。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數據進行統計分析。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或秩和檢驗。采用Kaplan-Meier法繪制CAPZA1高、低表達患者的生存曲線，采用Log-rank法比較CAPZA1高、低表達患者的生存情況。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中CAPZA 1表達情況的比較

52例NSCLC患者的NSCLC組織中，CAPZA1高表達者20例（38.5%），低表達者32例（61.5%）；41例癌旁正常組織中，CAPZA1高表達者27例（65.9%），低表達者14例（34.1%）。在NSCLC組織中，CAPZA1低表達的比例明顯高于癌旁正常組織，差異有統計學意義（χ2=6.881，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征NSCLC患者CAPZA 1表達情況的比較

不同年齡、性別、吸煙史、腫瘤直徑、病理類型NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。不同TNM分期、分化程度、淋巴結轉移情況、脈管侵犯情況、Ki-67指數的NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1的表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 CAPZA 1表達情況與NSCLC患者預后的關系

表1 不同臨床特征NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA 1的表達情況

CAPZA1低表達患者的中位生存時間為22個月（95%CI：10.183～33.817），CAPZA1高表達患者的中位生存時間為31個月（95%CI：22.806～39.194）。Log-rank檢驗結果顯示，CAPZA1高表達NSCLC患者的生存情況優于CAPZA1低表達NSCLC患者，差異有統計學意義（χ2=3.978，P＜0.05）。（圖1）

3 討論

圖1 CAPZA 1高表達（n=20）和低表達（n=32）NSCLC患者的生存曲線

近年來，與NSCLC細胞的侵襲和轉移有關的蛋白逐漸被發現，其對預測預后和評估腫瘤病理分級的重要意義逐漸被認可，因此，與NSCLC病理分級和預后預測有關的蛋白是近年來NSCLC研究領域的熱點[1-2]。研究表明，CAPZ是肌動蛋白結合蛋白，由α和β兩個亞基組成，最初是從棘阿米巴蟲和牛腦組織中分離得到。既往對CAPZ的研究主要集中在肌動蛋白絲與心肌肥厚的關系方面，認為CAPZ與心肌肥厚有關[3]。近年來，CAPZ在腫瘤中的作用逐漸受到學者的重視。研究表明，CAPZ可作為肝細胞癌和食管鱗癌的診斷標志物[4-5]。本研究結果顯示，在NSCLC組織中，CAPZA1低表達的比例明顯高于癌旁正常組織（P＜0.01），表明在NSCLC組織中，CAPZA1的表達水平較低。

NSCLC的TNM分期和分化程度與其惡性程度和疾病的進展密切相關，對于預測NSCLC的預后具有重要的價值，同時能夠為治療方案的選擇提供參考[6-7]。本研究表明，不同TNM分期、腫瘤分化程度NSCLC患者NSCLC組織中CAPZA1的表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），提示CAPZA1可能與NSCLC的惡性程度及相關生物學行為有關。本研究證實，CAPZA1低表達的NSCLC患者更有可能發生淋巴結轉移與脈管侵犯，推測其原因可能是CAPZA1參與了NSCLC的惡性轉化和侵襲過程。另外，在Ki-67指數高的NSCLC患者中，CAPZA1低表達的比例大于Ki-67指數低的NSCLC患者（P＜0.05），提示CAPZA1可能對NSCLC細胞的增殖具有影響。但是，不同腫瘤直徑NSCLC患者的CAPZA1表達情況比較，差異無統計學意義（P＞0.05），這可能是由于影響腫瘤直徑的因素較多，而不是僅僅與腫瘤細胞的增殖能力有關。因此，CAPZA1對NSCLC細胞增殖的影響仍有待進一步探討。由此可以推測，CAPZA1表達水平可能對判斷NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移、脈管侵犯、Ki-67指數等具有一定的參考價值。但是，目前CAPZA1參與影響NSCLC病理特征的具體機制尚不明確。既往在關于肝癌的研究中發現，CAPZA1可通過調控細胞骨架蛋白的表達調控肝癌細胞的上皮-間充質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），進而影響肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲[3,8]。但是，CAPZA1在NSCLC中的作用的相關研究仍較缺乏，CAPZA1是否通過相同的機制調控NSCLC的發生、發展仍有待進一步深入探討。另外，本研究發現，CAPZA1高表達NSCLC患者的生存情況優于CAPZA1低表達NSCLC患者，差異有統計學意義（P＜0.05），表明CAPZA1的表達與患者的預后有關。其可能的機制是CAPZA1參與調控NSCLC細胞的分化程度、淋巴結轉移、脈管侵犯和Ki-67指數，這亦提示，CAPZA1可以作為臨床預測NSCLC患者預后的重要指標。

綜上所述，在NSCLC組織中，CAPZA1的表達水平較低，且其表達可能與NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移、脈管侵犯和Ki-67指數有關，參與NSCLC的發生、發展，并通過生存曲線推測其對NSCLC診治及預后評估具有一定的參考價值。