SKP 2、kindlin- 2在前列腺癌組織中的表達及其與患者臨床特征的關系

劉暢，王慶偉，羅振宇，連艷珍

1鶴壁市人民醫院泌尿外科，河南鶴壁458000；

鄭州大學第一附屬醫院2泌尿外科，3病理科，4檢驗科，鄭州450052

前列腺癌是男性常見的泌尿系統惡性腫瘤，前列腺癌患者的生活質量較差，生存時間較短，生命安全受到嚴重的威脅[1-2]。在前列腺癌的病理機制方面，細胞因子或者腫瘤相關蛋白能夠通過影響前列腺移行上皮細胞的異常增殖，參與前列腺癌的早期發生。細胞S相激酶相關蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，SKP2）表達水平的升高能夠通過干預腫瘤細胞的細胞周期，導致腫瘤的G1/S期細胞的比例上升，加劇腫瘤細胞的異常核DNA分裂，進而促進前列腺癌的發生[3]；kindlin-2蛋白是黏附分子蛋白成員，對腫瘤細胞的黏附和浸潤能力具有促進作用，能夠提高腫瘤細胞的浸潤深度和浸潤范圍，加劇腫瘤細胞生物學特征的惡化[4]。本研究通過觀察前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2的表達水平，分析其與前列腺癌患者臨床特征的關系，旨在為臨床上對前列腺癌的臨床治療和病情評估提供參考依據，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年7月至2018年3月鶴壁市人民醫院收治的70例前列腺癌患者作為研究對象。選取70例前列腺癌患者的前列腺癌組織標本。納入標準：前列腺癌的診斷標準參考中華醫學會制定的標準[5]；經前列腺穿刺或手術后病理學檢查確診；手術前未接受過放療、化療、免疫學治療或激素治療。排除標準：前列腺癌復發；伴有其他部位的惡性腫瘤；伴有尿路結石、尿路感染。70例前列腺癌患者的年齡為54～79歲，平均年齡為（67.5±7.5）歲；T分期：T1期20例，T2期24例，T3期20例，T4期6例；N分期：N0期47例，N1期23例；M分期：M0期51例，M1期19例；血清前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平＞20 ng/ml 36例，≤20 ng/ml 34例；Gleason評分：2～6分46例，7分6例，≥8分18例。另選取同期在本院接受治療的70例前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織標本。70例前列腺良性增生患者的納入標準：經病理學診斷證實為前列腺良性增生；未接受內分泌相關治療。排除標準：合并尿路結石及感染。70例前列腺良性增生患者的年齡為50～79歲，平均年齡為（66.8±8.0）歲。兩組患者的年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。全部患者及家屬均對本研究知情同意并自愿簽署知情同意書，且本研究經過醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 免疫組織化學染色方法

石蠟包埋，連續性切片，厚度為3 μm，60℃烤片60 min，常規脫水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）進行抗原修復，加入 10 μl蒸餾水，加入 10%過氧化氫 5 μl，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌3次，每次3 min，加入濃度為1∶1000的kindlin-2、SKP2蛋白的單克隆抗體（購自羅氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的kindlin-2、SKP2蛋白二抗（1∶1500稀釋，購自羅氏公司），37℃孵育20 min，PBS洗滌3次，每次3 min；加入顯色劑，PBS沖洗和復染，脫水，在50倍顯微鏡下進行觀察。

1.3 免疫組織化學染色結果評分標準

免疫組織化學結果判定：kindlin-2蛋白的陽性著色表達于細胞質，SKP2蛋白的陽性著色表達于細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒狀。①根據染色強度評分：0分為無色，1分為淡黃，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；②根據陽性細胞數目所占比例評分：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分，陽性細胞數目所占比例11%～50%為2分，陽性細胞數目所占比例51%～75%為3分，陽性細胞數目所占比例＞75%為4分。兩種積分相乘，總分＜3分為陰性，≥3分為陽性[6]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 前列腺癌組織和前列腺良性增生組織中的kindlin- 2、SKP 2蛋白表達情況的比較

前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2、SKP2蛋白的陽性表達率均明顯高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織，差異均有統計學意義（χ2=20.833、19.899，P＜0.01）。（表1）

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表達情況

表1 兩種組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表達情況[n（%）]

T分期為T3～T4期、N分期為N1期、Gleason評分為8～10分前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽性表達率均高于T分期為T1～T2期、N分期為N0期、Gleason評分為2～7分的前列腺癌患者，差異均有統計學意義（χ2=4.941、5.373、4.641，P＜0.05）；不同M分期、PSA水平前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。T分期為T3～T4期、N分期為N1期、PSA水平＞20 ng/ml、Gleason評分為8～10分前列腺癌患者前列腺癌組織中SKP2蛋白的陽性表達率均高于T分期為T1～T2期、N分期為N0期、PSA水平≤20 ng/ml、Gleason評分為2～7分的前列腺癌患者，差異均有統計學意義（χ2=4.936、4.759、4.613、8.426，P＜0.05）；不同M分期前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

3 討論

長期的臨床隨訪觀察發現，相比于良性前列腺病變患者，前列腺癌患者的3年生存率或者5年生存率明顯下降，給予綜合性治療措施進行治療后，患者的無進展生存期仍然無明顯改善[7-10]。通過腫瘤生物學指標評估前列腺癌患者的病情具有重要的意義，其能夠在指導臨床診療及評估預后方面發揮重要的作用。本研究對前列腺癌患者前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白表達情況的分析，能夠在揭示前列腺癌病情進展機制的同時，為臨床上前列腺癌患者的病情評估提供參考。

表2 70例不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的陽性表達情況

SKP2是細胞周期調控相關蛋白，其能夠影響腫瘤細胞的周期，提高腫瘤細胞快速跨越G0期的能力，從而促進惡性腫瘤的發生。SKP2蛋白的絲氨酸和巰基結構能夠促進其對腫瘤細胞持續性自我增殖調控的作用。相關研究還認為，SKP2能夠影響腫瘤細胞的生物學特征，進而參與惡性腫瘤的發生、發展過程[11]；kindlin-2是黏附蛋白相關因子，其能夠通過影響腫瘤細胞的上皮-間充質轉化，促進腫瘤細胞浸潤深度的增加，并提高腫瘤細胞的變形能力，從而促進惡性腫瘤的發生[12]。相關研究已經探討了SKP2蛋白的表達與婦科惡性腫瘤的關系[13]，但是，對于前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白表達情況的分析不足。本研究發現，前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2、SKP2蛋白的陽性表達率均明顯高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織（P＜0.01），提示SKP2、kindlin-2蛋白的陽性表達在前列腺癌的發生、發展過程中具有重要的作用。分析其基礎方面的原因，考慮與以下病理性改變有關[14-154]：①SKP2表達水平的升高能夠影響細胞周期依賴性蛋白激酶的激活，導致腫瘤細胞G1/S期細胞的比例上升；②kindlin-2蛋白表達水平的升高能夠影響腫瘤細胞內NF-κB信號通路的激活，提高前列腺上皮移行細胞異常裂變的風險。廖順鴻[16]發現，相比于良性前列腺組織，在前列腺癌患者中，SKP2的陽性表達率明顯升高；在合并明顯泌尿系統轉移的患者中，SKP2的陽性表達率更高。通過探討SKP2、kindlin-2蛋白的表達情況與前列腺癌患者臨床特征的關系，可以發現在臨床分期較晚、N1期或者Gleason評分較高的患者中，kindlin-2蛋白的陽性表達率較高，提示kindlin-2蛋白的表達與前列腺癌的發生密切相關，這主要是由于Kindlin-2蛋白陽性表達率的升高能夠促進腫瘤細胞上皮-間充質轉化的發生，增加浸潤深度和擴大浸潤范圍，加劇臨床分期的進展。同時，kindlin-2還能夠提高前列腺癌移行上皮細胞黏附淋巴結組織的能力，進而促進淋巴結轉移的發生。另外，SKP2蛋白的表達情況可能與前列腺癌患者的TNM分期、PSA水平、Gleason評分有關；其中，在PSA水平較高的患者中，SKP2蛋白的陽性表達率高，這主要是由于PSA水平越高，腫瘤細胞的增殖速度越快，SKP2蛋白的合成和釋放越明顯。

綜上所述，在前列腺癌患者的前列腺癌組織中，SKP2、kindlin-2蛋白的陽性表達率均明顯上升，同時，SKP2、kindlin-2蛋白的表達與前列腺癌患者的臨床特征密切相關。本研究的局限性在于未對SKP2、kindlin-2蛋白的表達情況與前列腺癌患者預后的關系進行探討，因此，后續研究將擴大樣本量進一步探討SKP2、kindlin-2蛋白在前列腺癌臨床診療過程中的應用價值。