一種新型禽用微生態(tài)制劑的制備方法及其功能研究

[摘 要] 微生態(tài)制劑作為可以有效替代抗生素的產(chǎn)品，從發(fā)現(xiàn)到生產(chǎn)一直受到養(yǎng)殖行業(yè)的高度關(guān)注，其解決了抗生素存在的影響人類健康的問題。基于此，本文首先闡述微生態(tài)制劑的定義，并對其所產(chǎn)生的作用進(jìn)行簡要介紹;其次分析雞用微生態(tài)制劑乳酸菌的制備方法，并總結(jié)乳酸菌在禽體內(nèi)的作用，以期能為微生態(tài)制劑的使用提供有價值的參考。

[關(guān)鍵詞] 禽用微生態(tài)制劑;制備方法;功能

[中圖分類號] S859.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1674-7909（2019）28-107-2

在我國養(yǎng)殖行業(yè)中，對于抗生素副作用的研究隨著科技的發(fā)展而不斷完善，使得人們充分認(rèn)識到其危害。抗生素的泛濫使用，主要會引起動物內(nèi)源性的感染以及二重感染，導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。另外，在使用抗生素的過程中，因家禽生長周期不長，會有一些抗生素殘留在體內(nèi)，這樣會對人類的健康造成直接威脅。為了應(yīng)對這一情況，微生態(tài)制劑被人類所發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑能解決抗生素存在的影響人類健康的問題。這種制劑無副作用，不會殘留在家禽體內(nèi)，而且生產(chǎn)成本較低等。

1 微生態(tài)制劑的定義及作用

1.1 微生態(tài)制劑的定義

微生態(tài)制劑，是利用正常微生物或促進(jìn)微生物生長的物質(zhì)制成的活的微生物制劑。也就是說，一切能促進(jìn)正常微生物群生長繁殖的及抑制致病菌生長繁殖的制劑都稱為微生態(tài)制劑。

微生態(tài)制劑可從廣義上劃分為三大種類。第一種是益生素，主要是針對宿主腸道，保持宿主腸道微生物平衡的活菌類食品或飼料添加劑。現(xiàn)階段常見的益生素產(chǎn)品主要有乳酸菌、芽狍桿菌、光合細(xì)菌等。第二種是益生元，能促進(jìn)動物消化道內(nèi)有益菌的生長，通過提高有益菌的活力，可讓動物機(jī)體健康生長。第三種是合生元，是益生菌和益生元按比例混合而成的產(chǎn)品，其能使二者協(xié)同作用。

1.2 提高飼料轉(zhuǎn)化率，合成營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)動物生長

微生物制劑被動物食用后，腸道內(nèi)益生菌大量繁殖，為動物體提供許多消化酶，使得各種營養(yǎng)物質(zhì)被有效地吸收，對動物體內(nèi)膽汁的分泌非常有利，還能有效促進(jìn)胰液的生成，使動物體快速生長。同時，乳酸菌等有益菌群能促進(jìn)機(jī)體對鈣、磷、鐵等微量元素的吸收。

1.3 刺激免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體免疫力，凈化腸道內(nèi)環(huán)境，改善養(yǎng)殖場所環(huán)境衛(wèi)生

微生態(tài)制劑是優(yōu)良的免疫激活劑，對于巨噬細(xì)胞與干擾素的活性提高起著促進(jìn)作用，有利于B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，還可提升動物體的抗病能力。另外，益生菌的細(xì)胞壁上有聚肽糖等物質(zhì)。這種物質(zhì)可以刺激腸道內(nèi)的免疫細(xì)胞，增強(qiáng)腸道局部免疫抗體水平，使機(jī)體的抗病能力增強(qiáng)。通過使用益生菌可以減少糞便中氮和腐敗產(chǎn)物的生成，綜合腸道內(nèi)的內(nèi)毒素等有毒有害物質(zhì)，有益菌群可以在腸道內(nèi)形成有效的屏障。同時，有益菌隨著糞便排出體外，可以降低糞便的味道，提高禽舍的空氣質(zhì)量，減少機(jī)體因為禽舍味道形成的應(yīng)激與降低環(huán)境污染。

2 雞用微生態(tài)制劑乳酸菌的制備方法

2.1 材料

2.1.1 菌種。乳酸菌。

2.1.2 培養(yǎng)基。①MRS培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g，酵母膏5.0 g，牛肉膏10.0 g，葡萄糖20.0 g，磷酸氫二甲2.0 g，檸檬酸三銨1.0 g，乙酸5.0 g，硫酸鎂0.8 g，硫酸鉀0.2 g，吐溫80 mL。蒸餾水定容至1 000 mL，pH值保持在6.2～6.4，115～122 ℃滅菌30 min。②計數(shù)培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基1 L加入瓊脂20 g。

2.2 試劑、儀器

所需試劑有奶粉、甘露醇、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖、磷酸氫二鉀、檸檬酸三銨、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳吐溫蒸餾水及生理鹽水等。所需儀器有高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、無菌操作臺、高速離心機(jī)、發(fā)酵罐、真空冷凍離心機(jī)和菌液瓶等。

2.3 制作方法

2.3.1 活化菌株。本次試驗采用德式乳酸桿菌，在菌類保存冰箱中取出的是乳酸桿菌，取用100 mL滅菌的MRS液體培養(yǎng)基進(jìn)行第1次活化，活化的溫度設(shè)定在37 ℃為宜。24 h后，使用平板檢測活菌數(shù)。檢測活菌指標(biāo)達(dá)標(biāo)時，將100 mL菌液全部移至400 mL滅菌MRS液體培養(yǎng)基中進(jìn)行第2次活化，經(jīng)過24 h后進(jìn)行平板檢測，通過檢測活菌數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后，轉(zhuǎn)移到40 L發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為48 h[1]。

2.3.2 活菌數(shù)的測定。菌種經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)48 h后，接入MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。為了方便測量活菌數(shù)，取0.5 L發(fā)酵液加入至4.5 mL滅菌的生理鹽水中，并采取10倍系列稀釋方法，選取10-8、10-9、10-10 3個稀釋倍數(shù)，在無菌培養(yǎng)皿中分別加入0.2 mL稀釋液，再使用傾注法將約15 mL培養(yǎng)基加入并混勻，每個稀釋液做3個平行培養(yǎng)皿。待凝固后，把培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d，選取菌落數(shù)在30～300的培養(yǎng)皿計菌群落數(shù)。

2.3.3 菌體收集。利用超速離心機(jī)對發(fā)酵后的菌液進(jìn)行離心，在轉(zhuǎn)速為4 000～6 200 r/min的條件下離心10 min，去上清液收集沉積物。

2.3.4 菌泥的冷凍干燥。將復(fù)配保護(hù)劑加入收集好的沉積物中，通過震蕩搖勻的方法制成菌懸液。再將菌懸液放入冷凍的培養(yǎng)皿中，把培養(yǎng)皿放到4 ℃的冰箱中30 min。移入-30 ℃的冰箱中60 min。拿出后放到冷凍真空干燥機(jī)上冷凍干燥14 h，密封保存在4 ℃的冰箱中。根據(jù)試驗設(shè)計，真空冷凍干燥條件下設(shè)置凍干干燥腔體溫度應(yīng)在-70～-60 ℃，壓力為0.06 Pa，時間設(shè)定為14 h。

2.3.5 存活率的測定。把冷凍干燥后的乳酸菌通過生理鹽水復(fù)活并進(jìn)行平板計數(shù)，結(jié)果以個/g來表示。

3 乳酸菌在禽體內(nèi)的作用

3.1 調(diào)節(jié)菌群平衡，促進(jìn)禽類生長

乳酸菌在禽體內(nèi)發(fā)揮著許多生理功能，可以調(diào)節(jié)胃腸道菌群，使機(jī)體更好地吸收營養(yǎng)物質(zhì)，增強(qiáng)機(jī)體的代謝活性，增強(qiáng)宿主的營養(yǎng)代謝，促進(jìn)宿主健康快速生長[2]。

3.2 激活機(jī)體免疫機(jī)制，提高機(jī)體抗病能力

乳酸菌能激活機(jī)體內(nèi)的巨噬細(xì)胞，并能定殖于腸道中形成天然免疫系統(tǒng)，腹膜內(nèi)的巨噬細(xì)胞也能被有效激活，還能誘導(dǎo)生成干擾素，有利于細(xì)胞分裂并產(chǎn)生一定的抗體。機(jī)體的特異性及非特異性的免疫反應(yīng)都能得到有效的增強(qiáng)，進(jìn)而提升機(jī)體的抗病能力。

3.3 抑制有害細(xì)菌，預(yù)防相關(guān)疾病

通過大量的研究表明，服用乳酸菌之后的禽類機(jī)體，可有效抑制住腐敗菌和低溫細(xì)菌的入侵，對于腹瀉、腸炎、便秘等腸道疾病具有很好的防治效果。

4 結(jié)語

微生態(tài)制劑是一種綠色的飼料添加劑，具有無毒、無害、無殘留等特點。微生態(tài)制劑的使用，解決了抗生素使用出現(xiàn)的不良問題。因此，今后可研究更多的微生態(tài)制劑，保障禽體健康生長以及人類的食品安全。

參考文獻(xiàn)

[1]王晶，季海峰，王四新，等.飼用乳酸菌制劑的研究現(xiàn)狀及在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].中國畜牧獸醫(yī)，2010（3）：38-41.

[2]呂學(xué)思，王猛，王瑩瑩.畜禽微生態(tài)制劑的進(jìn)展及在豬雞中的應(yīng)用[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2015（3）：10-12.