ROCK 1蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其臨床意義

余國(guó)輝 舒美玲

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是最為常見(jiàn)的肺癌類型，流行病學(xué)研究顯示NSCLC的發(fā)病率可達(dá)233-455/10萬(wàn)人左右[1]，同時(shí)在長(zhǎng)期吸煙或者特殊的工作生活環(huán)境中，NSCLC的發(fā)病率可進(jìn)一步上升。在探討NSCLC的發(fā)病機(jī)制的過(guò)程中可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子或者信號(hào)通路效應(yīng)分子的改變，能夠影響癌細(xì)胞的增殖、加劇癌細(xì)胞的低分化風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡抑制等病理過(guò)程，導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶1( Rho associated coiled coil forming protein kinase 1, ROCK1)是ROH/ROCK相關(guān)信號(hào)通路下游因子，其能夠增加肺泡上皮細(xì)胞對(duì)于肺間質(zhì)成分的浸潤(rùn)，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的增加，為癌細(xì)胞的病理進(jìn)展提供條件[2-3]。為了進(jìn)一步揭示ROCK 1蛋白與肺癌的關(guān)系，本研究選取本院收集的術(shù)后NSCLC患者癌組織標(biāo)本84例，探討了相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)，旨在揭示其與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，報(bào)道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取本院收集的術(shù)后NSCLC患者癌組織標(biāo)本84例(癌組織)、40例癌旁組織標(biāo)本，病例收集時(shí)間2016年2月至2017年2月。癌組織標(biāo)本來(lái)源，男50例、女34例，年齡42～79歲，平均56.9±11.0歲，病理學(xué)類型：鱗癌54例、腺癌30例，組織學(xué)分化：高分化20例、中分化27例、低分化37例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期39例、Ⅲ期24例，吸煙32例。癌旁組織來(lái)源，男24例、女16例，年齡42～76歲，平均55.2±10.3歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1. 納入標(biāo)準(zhǔn)：①肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考衛(wèi)生部肺癌規(guī)范化診治指南(2011)版中的標(biāo)準(zhǔn)；②癌組織標(biāo)本、癌旁組織(距離腫瘤病灶邊緣3～5 cm的正常組織)標(biāo)本均來(lái)源于手術(shù)切除標(biāo)本；③手術(shù)前患者無(wú)放化療史、免疫治療史；④患者的資料完整。

2. 排除標(biāo)準(zhǔn)：①發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌患者；②凝血功能疾病；③伴有其他部位惡性腫瘤。

三、免疫組化染色

病理標(biāo)本采用石蠟切片，脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時(shí)間為5 min，加入ROCK1蛋白抗體(鼠來(lái)源，ABCUM公司)， 37 ℃ 孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購(gòu)自abcum公司)，37 ℃ 孵育 30 min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，顯微鏡下觀察。

四、結(jié)果判斷

免疫組化結(jié)果判定：ROCK1蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，①根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽(yáng)性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽(yáng)性。總分<3分： “-”表達(dá)；為3～5分，“+”表達(dá)；為6～9分，“++”表達(dá)；>9分，“+++”表達(dá)。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、兩類組織標(biāo)本中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

肺癌組織中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為70.24%顯著的高于癌旁組織的5.95%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1兩類組織標(biāo)本中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

圖1免疫組化檢測(cè)結(jié)果；注：A：癌旁組織，B：肺癌組織(×40)

二、肺癌組織標(biāo)本中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

肺癌組織中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在不同年齡、性別、病理學(xué)類型、是否吸煙的患者間比較，差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；病灶直徑≥3 cm、TNM分期為Ⅲ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)低分化患者的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別顯著的高于病灶直徑<3 cm、TNM分期為Ⅰ期+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)高+中分化患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1、表2。

表2肺癌組織標(biāo)本中的ROCK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

討 論

肺癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，但一般認(rèn)為遺傳因素、腫瘤相關(guān)分子生物學(xué)蛋白的參與或者環(huán)境因素等是促進(jìn)肺癌發(fā)生的重要因素[4-5]。現(xiàn)階段臨床上肺癌的早期診斷不僅缺乏有效而可靠的分子生物學(xué)標(biāo)志物作為相關(guān)指標(biāo)，不僅現(xiàn)階段臨床上肺癌的治療預(yù)后評(píng)估缺乏可靠的隨訪指標(biāo)。本研究通過(guò)對(duì)于相關(guān)分子生物學(xué)指標(biāo)的研究，具有下列幾個(gè)方面的現(xiàn)實(shí)意義：①能夠?yàn)榕R床上肺癌的腫瘤靶向分子治療提供理論基礎(chǔ)；②能夠?yàn)榉伟┑脑缙诨A(chǔ)人群的高危篩查提供依據(jù)。

ROCK 1蛋白是ROH/ROCK信號(hào)通路的下游信號(hào)分子，其結(jié)構(gòu)上包含了多個(gè)重復(fù)羧基末端結(jié)構(gòu)，能夠在結(jié)合糖蛋白配體的基礎(chǔ)上，促進(jìn)癌細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控的異常[6-7]。基礎(chǔ)方面的研究顯示，ROCK 1蛋白是誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化誘導(dǎo)因子γ異常表達(dá)的主要因素，其對(duì)于癌細(xì)胞低分化有促進(jìn)作用，可以降低癌細(xì)胞的分化成熟程度，提高癌細(xì)胞的侵襲或者轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[8-9]。ROCK 1蛋白已經(jīng)被證實(shí)能夠影響惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力，增加癌細(xì)胞通過(guò)血管內(nèi)皮進(jìn)行轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。研究認(rèn)為ROCK 1蛋白的高表達(dá)顯著參與了卵巢癌、甲狀腺癌或者乳腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生過(guò)程，并認(rèn)為高表達(dá)的ROCK 1蛋白是反映腫瘤患者遠(yuǎn)期不良臨床預(yù)后的重要指標(biāo)[10]。但在肺癌中的研究多數(shù)限于其流行病學(xué)研究，缺乏對(duì)于ROCK 1蛋白的表達(dá)與NSCLC的臨床病理特征的相關(guān)性研究。

本文通過(guò)免疫組化分析研究發(fā)現(xiàn)，ROCK1蛋白在肺癌患者組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ROCK1蛋白的高表達(dá)提示其可能參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，異常表達(dá)的相關(guān)生物學(xué)因子可以通過(guò)下列幾個(gè)方面的途徑，促進(jìn)肺癌的病理的進(jìn)展：①ROCK1蛋白能夠增加下游信號(hào)通路效應(yīng)分子如notch或者AKT信號(hào)蛋白的高表達(dá)，影響到腫瘤微環(huán)境的改變，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞活性的維持；②ROCK1蛋白的高表達(dá)，能夠影響肺癌細(xì)胞DNA的增殖速度和癌細(xì)胞周期中G1/S期的比例。Ding 等[11-12]在探討了45例臨床預(yù)后較差的肺癌患者的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，臨床預(yù)后越差、病理進(jìn)程越快，ROCK1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高。在免疫組化染色檢測(cè)中可以發(fā)現(xiàn)，ROCK1蛋白主要定位于癌細(xì)胞胞質(zhì)及細(xì)胞間質(zhì)成分中。高表達(dá)的ROCK1蛋白能夠促進(jìn)腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的傳遞，其次也考慮可能與ROCK1蛋白的表達(dá)降低了細(xì)胞間質(zhì)癌細(xì)胞間粘附能力有關(guān)，從而促進(jìn)了肺癌的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。在探討相關(guān)臨床病理特征過(guò)程中，可以發(fā)現(xiàn)在不同的病理類型或者吸煙的人群中，ROCK1蛋白的表達(dá)并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示ROCK1蛋白并不會(huì)影響到腺癌或者鱗癌等癌細(xì)胞的分化來(lái)源。但是在臨床分期較晚或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的人群中，ROCK1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率往往較高，考慮可能與下列幾個(gè)原因有關(guān)[13-14]：①ROCK1蛋白促進(jìn)了癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)內(nèi)皮的粘附能力；②ROCK1蛋白能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞對(duì)于肺支氣管段或者不同的肺葉組織浸潤(rùn)，促進(jìn)了臨床分期的進(jìn)展。同時(shí)ROCK1蛋白與癌細(xì)胞分化程度或腫瘤直徑大小的關(guān)系，也提示ROCK1與肺癌病情的密切關(guān)系。

綜上所述，ROCK1蛋白在NSCLC組織中呈顯著的高表達(dá)，并且與腫瘤患者的細(xì)胞分化程度、臨床分期等病理特征密切相關(guān)。