牛羊乳粉中摻入大豆蛋白的特征性蛋白組分分析

張 悅

（陜西省產品質量監督檢驗研究院農副食品所，陜西西安 710048）

隨著經濟的發展，我國人均年飲奶量大幅度提高，而現階段仍然存在乳品生產摻假行為[1]。現階段檢測摻假的方法也一直在更新探索，如利用特有氨基酸檢測[2-3]、利用蛋白質的溶解性差異檢測、利用蛋白質的抗原特異性檢測等，其涉及了色譜、質譜、免疫、PCR、電泳、光譜等多種檢測技術[4]。

現階段已有研究利用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測牛奶中摻入的豆奶蛋白[5]，而研究從牛、羊乳蛋白和大豆蛋白化學特性的異同上，通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳來區分乳蛋白和大豆蛋白的特征性蛋白質組分，進而能定量鑒定大豆蛋白的摻假檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

牛、羊乳粉和大豆蛋白粉，購于西安銀橋乳業集團公司。

1.1.2 試劑

三羥甲基氨基甲烷（Tris）、十二烷基硫酸鈉（SDS）、過硫酸銨（APS）、N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）、丙烯酰胺、甘氨酸、考馬斯亮藍R-250、冰醋酸、甲醇、溴酚藍（BPB）、低分子量蛋白Maker。

1.1.3 設備

生物電泳圖像分析系統、電子天平、伯樂小型垂直電泳槽、電泳供電裝置、電熱恒溫水浴鍋、pH計等。

1.1.4 分析軟件

使用Quantity One（美國伯樂） 對SDS-PAGE凝膠電泳結果進行分析處理。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的制備

采用凱氏定氮法測定牛乳粉、羊乳粉、大豆蛋白粉的總蛋白質含量。計算樣品的蛋白質量濃度，使得SDS-PAGE電泳時上樣質量濃度保持在1 μg/μL。

在各離心管中加入80 μL樣品溶液和20 μL上樣緩沖液，混勻，并于95℃水浴加熱5 min，自然冷卻后放4℃保存，準備電泳試驗。

1.2.2 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳

（1）按照乳的蛋白分布?！?br>