骨傷洗劑的制備工藝研究

巫繁菁 韋瑋 唐林 姚金娥（通訊作者）

（廣西骨傷醫(yī)院藥劑科 廣西 南寧 530012）

骨傷洗劑源于廣西骨傷醫(yī)院的外用經驗方骨洗方，臨床上已使用多年，具有活血化瘀、消腫止痛的功效，主要用于治療風濕骨痛、跌打損傷等骨科疾病。骨傷洗劑由桂枝、荊芥、山香、歸尾、蘇木、紫草、五味藤提取所得，合約0.55g生藥材?mL-1，制劑中桂枝、荊芥、山香、歸尾均含有揮發(fā)油成分[1-5]，現(xiàn)代藥理研究表明桂枝、荊芥、歸尾和山香揮發(fā)性成分均有抗炎鎮(zhèn)痛的作用[5-10]。

由于骨洗劑含揮發(fā)性成分中藥較多，傳統(tǒng)用法為藥材粉末加開水沖泡，不宜煎煮。故保留方中揮發(fā)性成分成為工藝研究的重點，水蒸氣蒸餾法可以將藥材中的揮發(fā)性成分隨水蒸氣蒸餾而帶出，該法操作簡便，設備簡單，成本低，適用于具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、在水中穩(wěn)定且難溶或不溶于水的成分的提取，是提取中藥揮發(fā)油的重要方法[11]。本實驗采用此法提取骨傷洗劑中的揮發(fā)油，按2015年版《中國藥典》四部通則2204項下?lián)]發(fā)油測定法（甲法）進行提取[12]，并以揮發(fā)油提取量為評價指標，通過正交試驗優(yōu)選骨傷洗劑的水提工藝，通過單因素試驗考察濃縮工藝和成型工藝，為該制劑的規(guī)模化生產提供參考。

1.儀器與試藥

BB89-2000揮發(fā)油提取器（上海化科實驗器材有限公司）；JM-B5003電子分析天平（諸暨市超澤衡器設備有限公司）；JB-2恒溫攪拌器（上海雷磁創(chuàng)益儀器儀表有限公司）；DZTW型調溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

桂枝、荊芥、山香、歸尾、蘇木、紫草、五味藤均購自南寧市萬藥堂中藥飲片有限公司，經廣西骨傷醫(yī)院藥劑科姚金娥副主任藥師鑒定，桂枝、荊芥、蘇木、紫草、歸尾符合《中國藥典》2015版一部有關項下的規(guī)定，山香和五味藤符合《廣西中藥材標準》1990年版第二冊有關項下的規(guī)定。聚山梨酯80（江西益普生藥業(yè)有限公司），苯甲酸鈉（成都金山化學試劑有限公司），其他試劑均為分析純。

2.實驗方法與結果

2.1 臨床處方

桂枝，荊芥，山香，歸尾，蘇木，紫草，五味藤。一劑藥材量為55g。

2.2 提取工藝的優(yōu)選

2.2.1 正交試驗優(yōu)化工藝 取10倍處方量藥材550g，加水浸泡后，連接揮發(fā)油提取器回流提取，收集揮發(fā)油及水提液。以揮發(fā)油量為指標進行工藝優(yōu)化。根據(jù)預實驗結果及文獻報道[13]，影響揮發(fā)油提取的主要因素有浸泡時間、加水量、藥材規(guī)格及提取時間，因此，各取三水平見表1，采用L9（34）正交試驗設計表，正交試驗安排及實驗結果見表2，方差分析見表3。

表1 揮發(fā)油提取正交試驗因素水平表

表2 揮發(fā)油正交實驗結果表

表3 方差分析表

從表2可以看出，得油量最高的實驗組合為A2B2C3D1,影響骨傷洗劑揮發(fā)油提取的因素：D＞A＞B＞C，C的影響作用最小，因此將C作為誤差項進行方差分析。方差分析結果表明因素D對揮發(fā)油提取率具有顯著影響（P＜0.05），提取時間、加水倍量、浸泡時間均無顯著影響（P＞0.05）。揮發(fā)油提取預實驗結果顯示骨洗方中的揮發(fā)油在2h左右已提取完全，說明藥材成分極易揮發(fā)，粉碎或短暫熱處理以及放置過程均有可能造成揮發(fā)性耗損，故出現(xiàn)因素D影響最顯著，飲片優(yōu)于段和粗粉的結果。綜上，從成本節(jié)約及提高產品質量考慮，選擇較優(yōu)工藝為A2B2C2D1，即藥材飲片加水8倍量，浸泡2h，提取2h為較優(yōu)提取工藝。

2.2.2 揮發(fā)油提取驗證實驗 取10倍處方量藥材3份，每份550g，按優(yōu)選出的提取工藝A2B2C2D1（飲片加8倍量水，浸泡2h，提取2h）進行3次驗證試驗，結果表明3次驗證試驗的揮發(fā)油量分別為0.99ml，0.92ml，0.96ml，RSD值為2.99%，說明工藝穩(wěn)定，可行，重現(xiàn)性好。

2.3 濃縮體積考察

稱取5倍處方量藥材275g，加水8倍量，浸泡2h，加熱回流2h，藥液200目篩網濾過，濾液濃縮至2000ml，平均分成5份，每份400ml，再取其中4份分別濃縮成不同體積（50、100、200、300ml），分別放入帶刻度的具塞塑料瓶中，密塞，常溫下放置3天，觀察沉淀情況；上清液200目篩網過濾，濾液再放置3天，觀察沉淀情況，一個臨床處方藥材的提取液濃縮至100mL時比較穩(wěn)定，沉淀較少，實驗結果見表4。考慮到制劑設計、降低損耗及提高產品質量，故本品的濃縮體積優(yōu)選為一個臨床處方藥材的提取液濃縮至100ml。

表4 沉淀情況觀察（ml）

2.4 放置時間考察

稱取2倍處方量藥材3份，每份110克，加水8倍量，浸泡2h，加熱回流2h，藥液200目篩網濾過，濾液濃縮至200mL，分別放置6h、12h、24h，觀察沉淀情況。上清液200目篩網過濾，濾液再放置24h，觀察沉淀情況，結果表明，放置12h即可。實驗結果見表5。

表5 放置時間考察

2.5 重復及放大試驗

稱取2倍處方量藥材110g、5倍處方量藥材275g和10倍處方量藥材550g，分別加水8倍量，浸泡2h，加熱回流2h，藥液200目篩網濾過，濃縮至一定體積，進行放大及驗證試驗，實驗安排及結果見表6。

表6 三次除雜考察數(shù)據(jù)

以不同的處方量進行的三次實驗，結果基本一致。因此骨傷洗劑的提取工藝確定為中藥飲片加水8倍量，浸泡2h，加熱回流2h，收集揮發(fā)油蒸餾液，將余下藥液用200目篩網濾過，濾液濃縮至相對密度1.004～1.007（25℃），放置12h，上清液200目篩網過濾，濾液加純化水調整總量至指定體積，攪勻，即得。

2.6 骨傷洗劑的成型

2.6.1 乳化劑的種類及用量 聚山梨酯80為《中國藥典》2015年版四部收載的用做增溶劑和乳化劑的藥用輔料[14]，屬于水溶性的非離子表面活性劑，具有不受電解質和溶液pH值影響，毒性和溶血性小，無刺激性，以及能與大多數(shù)藥物配伍等優(yōu)點，在藥劑上應用較廣，可供內服，也可供外用[15]。選擇聚山梨酯80作為本品的乳化劑。取含揮發(fā)油的蒸餾液15mL（相當于骨洗方5倍臨床處方量藥材275g的提取量），攪拌下逐步加入聚山梨酯80，直至上部揮發(fā)油滴均勻分散為止，結果折算成制劑每L中加入聚山梨酯0.6g（即含量為0.06%）。

2.6.2 防腐劑的種類及用量 骨洗方提取液為含有揮發(fā)油的水溶液，苯甲酸鈉為《中國藥典》2015年版四部收載的用做抑菌劑的藥用輔料[16]，易溶于水，在空氣中穩(wěn)定，選擇苯甲酸鈉作為防腐劑，并參照《中國藥典》2015年版四部附錄Ⅰ洗劑項下有關苯甲酸鈉用量的要求，確定1000ml溶液中苯甲酸鈉的用量為2g(即含量為0.2%）。

2.7 骨傷洗劑的工藝流程

2.7.1 制劑處方 處方藥材5劑275g，聚山梨酯80 0.3g，苯甲酸鈉1g。

2.7.2 制備工藝 稱取5倍處方量藥材275g，加水8倍量，浸泡2h，加熱回流2h，收集揮發(fā)油蒸餾液，將余下藥液用200目篩網濾過，濾液濃縮至約450ml，加入苯甲酸鈉1g,加熱至沸并保持微沸30min，放置12h，取上清液用200目篩網濾過，濾液加入揮發(fā)油蒸餾液15ml（加有聚山梨酯80 0.3g，攪拌使揮發(fā)油滴均勻分散），加純水至500mL，攪勻，制成濃度為0.55g生藥材?mL-1的溶液500mL。

3.討論

工藝研究決定著中藥制劑的物質基礎，直接關系到藥物的安全性、有效性和質量可控性。處方中藥材主要含苷類、黃酮類、生物堿類，有機酸類等，這些成分用水提取即可。又因處方中的大部分中藥含有揮發(fā)油，起到抗菌消炎鎮(zhèn)痛的作用，經實驗發(fā)現(xiàn)骨傷洗劑揮發(fā)油提取完全所需時間為2h左右，故將處方中所有組成中藥用水蒸氣蒸餾法共同提取，以保留揮發(fā)性成分，并在一定程度上節(jié)約了成本。該工藝合理可行，質量可控，可為骨傷洗劑的生產提供理論依據(jù)及相應的工藝參數(shù)。